需要订阅 JoVE 才能查看此. 登录或开始免费试用。
Chapters
- 00:05Introduction
- 00:32Design and Plasmid Construction of sgRNAs Targeting Rosa26 Locus
- 02:28Design and Construction of Targeting Vector as Homologous Recombination Template
- 03:46Electroporation of Macrophage and T Cell Lines
- 07:19Cell Sorting to Isolate Putative Knock-in Cells
- 08:58Screening and Validation of Positive Knock-in Cells
- 10:16Representative Results
- 10:52Conclusion
Denne protokollen bruker fluorescerende reportere og cellesortering for å forenkle knock-in eksperimenter i makrofag og T-cellelinjer. To plasmider brukes til disse forenklede knock-in-eksperimentene, nemlig en CRISPR /Cas9- og DsRed2-uttrykkende plasmid og en homolog rekombinasjonsdonor plasmid som uttrykker EBFP2, som er permanent integrert ved Rosa26-locus i immunceller.
