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PCR 돌연변이 발생, 복제, 발현, 빠른 단백질 정화 프로토콜 및 트립토판 신타제의 야생 유형 및 돌연변이 형태의 결정화
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生物化学
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JoVE 杂志 生物化学
PCR Mutagenesis, Cloning, Expression, Fast Protein Purification Protocols and Crystallization of the Wild Type and Mutant Forms of Tryptophan Synthase
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PCR 돌연변이 발생, 복제, 발현, 빠른 단백질 정화 프로토콜 및 트립토판 신타제의 야생 유형 및 돌연변이 형태의 결정화

DOI:
10.3791/61839-v

•

09:31 min

•

September 26, 2020

•

, , ,
1Department of Chemistry,University of California-Riverside, 2Department of Biochemistry,University of California-Riverside

Chapters

  • 00:04Introduction
  • 00:44Purification of Wild Type or Mutant Form of α2β2 StTS Complex
  • 03:53Optimized Crystallization for Wild Type and Mutant Form of the α2β2 StTS Comple
  • 06:49Results: Purification of the α- and β -Subunits of the Tryptophan Synthase and the Wild Type and Mutant α2β2 StTS Complexes
  • 08:50Conclusion

Summary

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이 문서는 살모넬라 타이피무륨 트립토판 synthase의 발현 및 정화를 위한 일련의 연속적인 방법을 제시하며, 이 프로토콜은 하루에 단백질 복합체를 정화하는 신속한 시스템이다. 커버되는 방법은 현장 지향 돌연변이 발생, 대장균의단백질 발현, 친화 성염색로그래피, 젤 여과 크로마토그래피 및 결정화입니다.

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PCR MutagenesisCloningExpressionProtein PurificationTryptophan SynthaseSalmonella TyphimuriumAmmonium Sulfate FractionationSize Exclusion ChromatographySDS-PAGEProtein ConcentrationCrystallization

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