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视觉GPCR-迷你G蛋白信号复合物的战略筛选与表征，成功结晶

JoVE 杂志
生物化学

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JoVE 杂志生物化学

Strategic Screening and Characterization of the Visual GPCR-mini-G Protein Signaling Complex for Successful Crystallization

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视觉GPCR-迷你G蛋白信号复合物的战略筛选与表征，成功结晶

DOI:

10.3791/60747-v

•

09:19 min

•

March 16, 2020

•

Filip Pamula², Jonas Mühle, Alain Blanc, Rony Nehmé, Patricia C. Edwards, Christopher G. Tate, Ching-Ju Tsai

¹Laboratory of Biomolecular Research,Paul Scherrer Institute, ²Department of Biology,ETH Zürich, ³Center for Radiopharmaceutical Sciences,Paul Scherrer Institute, ⁴Laboratory of Molecular Biology,Medical Research Council

Chapters

00:04Introduction
00:45Cell Membrane Solubilization and Protein Extraction
03:53UV-VIS Spectroscopy
04:33Automated Size-Exclusion Chromatography of Rhodopsin and Rhodopsin Mini-Go Complex
06:04Deglycosylation
06:44Results: UV-VIS Spectroscopy, SEC, and SDS-PAGE
08:34Conclusion

Summary

自动翻译

本报告描述了不同的洗涤剂的筛选，以准备视觉GPCR，红蛋白，其复合与微型G_o。演示了在纯化过程中不同阶段对复杂质量进行特征的生化方法。该协议可以推广为其他膜蛋白复合物，用于其未来的结构研究。

Tags

Keywords: GPCR Mini-G Protein Signal Transduction Membrane Protein Complex Detergent Screening Crystallization HEK293 Cells Affinity Purification 9-cis Retinal Buffer Exchange

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