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Estrazione di caffeina, l'attività enzimatica e l'espressione genica della sintasi di caffeina da sospensioni di cellule vegetali
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JoVE 杂志 生物化学
Caffeine Extraction, Enzymatic Activity and Gene Expression of Caffeine Synthase from Plant Cell Suspensions
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Estrazione di caffeina, l'attività enzimatica e l'espressione genica della sintasi di caffeina da sospensioni di cellule vegetali

DOI:
10.3791/58166-v

•

09:11 min

•

October 02, 2018

•

, , , , ,
1Unidad de Bioquímica y Biología Molecular de Plantas,Centro de Investigación Científica de Yucatán, 2CONACYT, Facultad de Ingeniería Química, Campus de Ciencias Exactas e Ingeniería,Universidad Autónoma de Yucatán

Chapters

  • 00:04Title
  • 00:28Caffeine Extraction in Cell Suspension of C. arabica L.
  • 00:55Conditions for the Assessment of Caffeine by Thin Layer Chromatography (TLC) Denistometry
  • 01:29Ribonucleic Acid (RNA) Isolation
  • 02:55Incubation of RNA Transcript with Deoxyribonuclease (DNase)
  • 03:59Complementary Deoxyribonucleic Acid (cDNA) Synthesis
  • 05:03Real-Time Quantitative PCR (qPCR) to Amplify the Gene CCS1
  • 05:43Total Protein of Cell Suspensions of C. arabica L.
  • 06:26Enzymatic Assay for Caffeine Synthase
  • 07:39Results: Enzymatic Activity of Caffeine Synthase Gene Evaluated via qPCR
  • 08:30Conclusion

Summary

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Questo protocollo descrive una metodologia efficace per l'estrazione e la quantificazione di caffeina in sospensioni cellulari di L. c. arabica e un processo sperimentale per valutare l'attività enzimatica della sintasi di caffeina con il livello di espressione il gene che codifica per questo enzima.

Tags

Caffeine ExtractionEnzymatic ActivityGene ExpressionCaffeine SynthasePlant Cell SuspensionsAnalytical Chemistry生物化学BiotechnologyCaffeine BiosynthesisIn Vitro Plant ModelsAcetoneTLCDensitometryRNA IsolationChloroform Isoamyl AlcoholPhenolIsopropanolEthanolDEPC-treated WaterDNase

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