Caffeine Extraction, Enzymatic Activity and Gene Expression of Caffeine Synthase from Plant Cell Suspensions

00:04Title
00:28Caffeine Extraction in Cell Suspension of C. arabica L.
00:55Conditions for the Assessment of Caffeine by Thin Layer Chromatography (TLC) Denistometry
01:29Ribonucleic Acid (RNA) Isolation
02:55Incubation of RNA Transcript with Deoxyribonuclease (DNase)
03:59Complementary Deoxyribonucleic Acid (cDNA) Synthesis
05:03Real-Time Quantitative PCR (qPCR) to Amplify the Gene CCS1
05:43Total Protein of Cell Suspensions of C. arabica L.
06:26Enzymatic Assay for Caffeine Synthase
07:39Results: Enzymatic Activity of Caffeine Synthase Gene Evaluated via qPCR
08:30Conclusion

Summary

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Ce protocole décrit une méthodologie efficace pour l’extraction et le dosage de la caféine dans des suspensions cellulaires de c. arabica L. et un processus d’expérimentation pour l’évaluation de l’activité enzymatique de synthase de caféine avec le niveau d’expression de le gène codant pour cette enzyme.

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