This content is Free Access.
Chapters
- 00:00Title
- 01:38Introduction
- 02:30Experimental Design
- 03:58Immobilization of the Ligand Papain for CFCA Analysis
- 07:34Determining Cystatin B Concentration Using the CFCA Assay
- 11:07Measuring the Kinetics of Cystatin B binding to Papain
- 17:13CFCA assay and Kinetics of Cystatin B binding to Papain Representative Results
- 18:47Conclusion
Vi tillämpar etikett-fri analys av proteininteraktioner använda Biacore X100 för struktur och funktion analys av bindning av flera mutanter cystatin B till papain genom kinetiska karakterisering. Kalibrering-fria koncentrationen analys (CFCA) mäter koncentrationen av protein med bibehållen bindande aktivitet utan behov av en standardkurva. Vi visar att en bekräftelse av koncentrationer med CFCA ökar tillförlitligheten i den kinetiska analysen och att kinetiska konstanter tillförlitligt kan bestämmas, även om aktiviteten av ett rekombinant protein minskar.
Tags
Protein ConcentrationKineticsAffinity DeterminationStructure-function AnalysisCysteine Protease InhibitorCystatin BPapainReal-time Label-free AnalysisBiacore X100Point MutationsInteractionCalibration-free Concentration Analysis (CFCA)A280Single-cycle Kinetics (SCK)Association Rate Constant (ka)Affinity (KD)Reliable ResultsInteraction Mechanism
