Summary

Протокол упражнений по плаванию и методы ухода за беременными крысами

Published: April 05, 2024
doi:

Summary

Здесь мы представляем протокол, описывающий методы разведения крыс, процедуры обучения плаванию и протоколы кормления беременных крыс после размножения. Этот протокол представляет собой животную модель для изучения влияния материнских упражнений во время беременности на потомство и лежащие в их основе механизмы.

Abstract

Концепция «Истоки здоровья и болезней развития» подчеркивает влияние ранней среды на хронические неинфекционные заболевания, такие как диабет, сердечно-сосудистые заболевания и рак. Исследования с использованием животных моделей изучали, как материнские факторы, такие как недоедание, переедание, ожирение, воздействие химических веществ или гипоксия, влияют на развитие плода и здоровье потомства, что приводит к таким проблемам, как низкий вес при рождении, высокое кровяное давление, дислипидемия и резистентность к инсулину. Учитывая растущую распространенность избыточного веса и ожирения среди женщин репродуктивного возраста, решающее значение имеют эффективные вмешательства. Физические упражнения для матери во время беременности стали ключевым вмешательством, приносящим пользу как матери, так и потомству и снижающим риск заболеваний. В этом исследовании сравниваются различия трех моделей упражнений на беременных крысах: добровольный бег на колесах, моторизованные беговые дорожки и плавание. Плавание является наиболее выгодным вариантом из-за его безопасного и контролируемого уровня интенсивности. В этом протоколе подробно описаны методы разведения крыс, обучение плаванию во время беременности и протоколы кормления после осеменения. Эта модель, подходящая для различных видов крыс и мышей, полезна для изучения пользы физических упражнений для здоровья потомства и благополучия между поколениями.

Introduction

В последние два десятилетия появилась концепция «Истоки здоровья и болезней в развитии» (DOHaD), которая показала, что влияние окружающей среды на ранних этапах развития влияет на риск более поздних патофизиологических процессов, связанных с хроническими неинфекционными заболеваниями (НИЗ), особенно диабета, сердечно-сосудистых заболеваний и некоторыхвидов рака1. Во время наиболее пластичной фазы внутриутробного развития плода, когда потомство подвергается воздействию внутриутробной среды, взаимодействие генов и окружающей среды и перфузия матки являются решающими факторамиперепрограммирования плода. В предыдущих исследованиях преимущественно использовались животные модели для изучения пагубных эффектов, таких как недоедание матери, переедание или ожирение во время беременности, а также пренатальное воздействие химических веществ или гипоксия, на развитие плода и долгосрочные фенотипические эффектыу потомства. Это привело к снижению массы тела при рождении и последующему росту, а также к неблагоприятным последствиям для потомства, включая повышенное кровяное давление, дислипидемию и резистентность к инсулину4. Поскольку уровень избыточного веса и ожирения среди женщин репродуктивного возраста быстро растет, срочно необходимо разработать эффективные меры для предотвращения передачи этих вредных материнских расстройств из поколения в поколение, что оказывает важное влияние на здоровьенаселения5,6.

Физические упражнения уже давно признаны важным профилактическим средством при сахарном диабете 2 типа, гипертонии и некоторых других заболеваниях7. Физические упражнения во время беременности оказывают благотворное воздействие на мать и оказывают благотворное влияние на потомство, тем самым снижая передачу болезней от матери потомству8. Несколько лет исследований продемонстрировали безопасность и глубокие преимущества физических упражнений, включая значительное снижение распространенных заболеваний беременности, таких как гестационный сахарный диабет 9,10. Что касается безопасности матери и плода, проведение тренировок по физическим упражнениям и протоколов после кормления грудью является сложной задачей.

David11et al. Описаны модели упражнений на животных, применимые к исследованиям сердечно-сосудистого здоровья. Три широко используемые модели упражнений — добровольный бег на колесах, беговые дорожки с электроприводом и плавание — имеют свои преимущества и недостатки. Произвольный бег колеса точно имитирует локомоторное поведение крыс, позволяя им двигаться в соответствии со своим циркадным ритмом. Тем не менее, этот вид упражнений требует более точного регулирования интенсивности и продолжительности. Моторизованная беговая дорожка может контролировать интенсивность, объем и продолжительность упражнений, но иногда ей требуется электрическая стимуляция, которая может вызвать физическое и психологическое напряжение у животных. Плавание широко используется в исследованиях на грызунах из-за присущей крысам способности плавать, что также позволяет избежать электрической стимуляции или механического повреждения ног ихвостов. В исследованиях на моделях пренатальных упражнений13,14 плавание является широко используемым методом упражнений. По мере прогрессирования беременности и увеличения живота крысы упражнения на беговой дорожке и колесе могут вызвать повторный контакт живота с твердыми поверхностями. Напротив, водная среда при плавании обеспечивает плавучесть, снижая риск травм, связанных с физическими упражнениями, у беременных животных.

В этом протоколе представлены методы разведения крыс, как проводить тренировки по плаванию во время беременности, а также протоколы кормления беременных крыс после вязки. Эта модель обучения плаванию беременных может быть применена к широкому кругу видов крыс и мышей, что, таким образом, может предоставить полезную модель грызунов для будущих исследований с использованием животных моделей для изучения механизмов, регулирующих благотворное влияние материнских упражнений на здоровье потомства и преимущества физических упражнений из поколения в поколение.

Protocol

Все описанные здесь методы были одобрены комитетом по этике животных Пекинского университета спорта и выполняются в соответствии с рекомендациями Национальных институтов здравоохранения (NIH) и китайскими законами о защите животных и институциональными рекомендаци…

Representative Results

В разделе «Методы разведения крыс» (рис. 1) мы определяем эстральный цикл самок крыс с помощью слайдов вагинального секрета для повышения успешности разведения. Эстральный цикл крыс длится 4-5 дней, включая проэструс, течку, метеструс и диэструс. Самки к?…

Discussion

Это исследование направлено на создание осуществимой программы упражнений для беременных крыс, включая подробные методы спаривания крыс, протоколы обучения плаванию и методы исследования для оценки физиологических показателей у плода. Мы разработали пренатальную …

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Работа выполнена при поддержке Национального фонда естественных наук Китая (32071174, 32200941, 32371183 и 31771312).

Materials

Caliper Mitutoyo Measuring Instruments (Shanghai) Co., Ltd 530-101 N15 Fetus dissect
Circular water bucket Naliya N/A Rat swimming
Experimental Surgical Instrument  Shenzhen RWD Life Technology Co., LTD SP0001-G Fetus dissect
Glass Microscope Slides Jiangsu Shitai experimental equipment Co., LTD 80312-3161 Vaginal smear
Glass petri dish Merck Life Technologies BR455751-10EA Offspring rearing
Hairdryer Panasonic EH-WNE5H Post-swimming care
Information Card Zhongke Life Science SS3 Rat mating
Isoflurane Shenzhen RWD Life Technology Co., LTD R510-22-10 Fetus dissect
Light microscope Olympus IX71-F22PH Vaginal smear
Mating cage Zhongke Life Science SS3 Rat mating
Medical Absorbent Cotton Hongxiang Sanitary Materials Co., LTD N/A The pregnant rats are anticipating giving birth
Rodent Anesthesia Machine, Gas Anesthesia Shenzhen RWD Life Technology Co., LTD R500IE Fetus dissect
Rodent breeding feed Beijing Huafukang Biotechnology Co., LTD 1032 Pregnant rat feeding
Rodent maintenance feed Beijing Huafukang Biotechnology Co., LTD 1022 Offspring rearing
Rodent sunflower seeds Jolly JP241 Nutritional supplement
Soundproof cotton Kufu Medical Instrument N/A The pregnant rats are anticipating giving birth
Sterile Cotton Swab (2 mm diameter) Kufu Medical Instrument N/A Vaginal smear
Sterile gauze Kufu Medical Instrument N/A Fetus dissect
Stroke-physiological Saline Solution (0.9% NaCl) Shandong Hualu Pharmaceutical Co., LTD N/A Vaginal smear
Thermometer Beekman organism N/A The monitoring of rat swimming
Towels Grace N/A Post-swimming care
Transparent plastic container Naliya N/A Swimming adaptive training
Ultraviolet light Merck Life Technologies Z169633-1EA Post-swimming care
Water heater Haier EC6001-Q6S Rat swimming
Weight Scale Electronlc Acale JM.A10001 Body weight measurement
Wistar Rats Vital river Laboratory Animal Technology Co., LTD N/A Experiment

References

  1. Hanson, M. A., Gluckman, P. D. Early developmental conditioning of later health and disease: Physiology or pathophysiology. Physiol Rev. 94 (4), 1027-1076 (2014).
  2. Calkins, K., Devaskar, S. U. Fetal origins of adult disease. Curr Probl Pediatr Adolesc Health Care. 41 (6), 158-176 (2011).
  3. Chavatte-Palmer, P., Tarrade, A., Rousseau-Ralliard, D. Diet before and during pregnancy and offspring health: The importance of animal models and what can be learned from them. Int J Environ Res Public Health. 13 (6), 586 (2016).
  4. Lapehn, S., Paquette, A. G. The placental epigenome as a molecular link between prenatal exposures and fetal health outcomes through the dohad hypothesis. Curr Environ Health Rep. 9 (3), 490-501 (2022).
  5. Shrestha, A., Prowak, M., Berlandi-Short, V. M., Garay, J., Ramalingam, L. Maternal obesity: A focus on maternal interventions to improve health of offspring. Front Cardiovasc Med. 8, 696812 (2021).
  6. Haire-Joshu, D., Tabak, R. Preventing obesity across generations: Evidence for early life intervention. Annu Rev Public Health. 37, 253-271 (2016).
  7. Kusuyama, J., Alves-Wagner, A. B., Makarewicz, N. S., Goodyear, L. J. Effects of maternal and paternal exercise on offspring metabolism. Nat Metab. 2 (9), 858-872 (2020).
  8. Blaize, A. N., Pearson, K. J., Newcomer, S. C. Impact of maternal exercise during pregnancy on offspring chronic disease susceptibility. Exerc Sport Sci Rev. 43 (4), 198-203 (2015).
  9. Hinman, S. K., Smith, K. B., Quillen, D. M., Smith, M. S. Exercise in pregnancy: A clinical review. Sports Health. 7 (6), 527-531 (2015).
  10. Acog committee. Physical activity and exercise during pregnancy and the postpartum period: Acog committee opinion, number 804. Obstet Gynecol. 135 (4), e178-e188 (2020).
  11. Poole, D. C., et al. Guidelines for animal exercise and training protocols for cardiovascular studies. Am J Physiol Heart Circ Physiol. 318 (5), H1100-H1138 (2020).
  12. Beleza, J., et al. Self-paced free-running wheel mimics high-intensity interval training impact on rats’ functional, physiological, biochemical, and morphological features. Front Physiol. 10, 593 (2019).
  13. August, P. M., Rodrigues, K. D. S., Klein, C. P., Dos Santos, B. G., Matté, C. Influence of gestational exercise practice and litter size reduction on maternal care. Neurosci Lett. 741, 135454 (2021).
  14. Li, S., et al. Prenatal exercise reprograms the development of hypertension progress and improves vascular health in shr offspring. Vascul Pharmacol. 139, 106885 (2021).
  15. Li, S., et al. Exercise during pregnancy enhances vascular function via epigenetic repression of ca(v)1.2 channel in offspring of hypertensive rats. Life Sci. 231, 116576 (2019).
  16. Musial, B., et al. Exercise alters the molecular pathways of insulin signaling and lipid handling in maternal tissues of obese pregnant mice. Physiol Rep. 7 (16), e14202 (2019).
  17. Dos Santos, A. S., et al. Resistance exercise was safe for the pregnancy and offspring’s development and partially protected rats against early life stress-induced effects. Behav Brain Res. 445, 114362 (2023).
  18. Barnes, M. D., Heaton, T. L., Goates, M. C., Packer, J. M. Intersystem implications of the developmental origins of health and disease: Advancing health promotion in the 21st century. Healthcare. 4 (3), 45 (2016).
  19. Bakrania, B. A., George, E. M., Granger, J. P. Animal models of preeclampsia: Investigating pathophysiology and therapeutic targets. Am J Obstet Gynecol. 226, S973-S987 (2022).
  20. Ferrari, N., et al. Exercise during pregnancy and its impact on mothers and offspring in humans and mice. J Dev Orig Health Dis. 9 (1), 63-76 (2018).
  21. Lerman, L. O., et al. Animal models of hypertension: A scientific statement from the american heart association. Hypertension. 73 (6), e87-e120 (2019).
  22. Mangwiro, Y. T. M., et al. Exercise initiated during pregnancy in rats born growth restricted alters placental mtor and nutrient transporter expression. J Physiol. 597 (7), 1905-1918 (2019).
  23. Kim, H., Lee, S. H., Kim, S. S., Yoo, J. H., Kim, C. J. The influence of maternal treadmill running during pregnancy on short-term memory and hippocampal cell survival in rat pups. Int J Dev Neurosci. 25 (4), 243-249 (2007).
  24. Harris, J. E., et al. Exercise-induced 3′-sialyllactose in breast milk is a critical mediator to improve metabolic health and cardiac function in mouse offspring. Nat Metab. 2 (8), 678-687 (2020).
  25. Zhang, Y., et al. Maternal exercise represses nox4 via sirt1 to prevent vascular oxidative stress and endothelial dysfunction in shr offspring. Front Endocrinol. 14, 1219194 (2023).
  26. Shan, M., et al. Maternal exercise upregulates the DNA methylation of agtr1a to enhance vascular function in offspring of hypertensive rats. Hypertens Res. 46 (3), 654-666 (2023).

Play Video

Cite This Article
Ni, Z., Cao, J., Shan, M., Zhang, Y., Shi, L. Swimming Exercise Protocol and Care Methods for Pregnant Rats. J. Vis. Exp. (206), e66577, doi:10.3791/66577 (2024).

View Video