Lesão por Constrição Crônica do Nervo Infraorbital Distal (DIoN-CCI) em Camundongos para Estudo da Dor Neuropática do Trigêmeo
Summary
A lesão por constrição crônica do nervo infraorbital distal em camundongos induz mudanças no comportamento espontâneo (aumento da atividade de limpeza facial) e no comportamento nocifensivo em resposta à estimulação tátil (hiperresponsividade à estimulação capilar de von Frey) que são sinais de dor contínua e alodinia e serve como modelo para a dor neuropática do trigêmeo.
Abstract
Os modelos animais continuam sendo ferramentas necessárias para estudar a dor neuropática. Este manuscrito descreve o modelo de lesão por constrição crônica do nervo infraorbital distal (DIoN-CCI) para estudar a dor neuropática do trigêmeo em camundongos. Isso inclui os procedimentos cirúrgicos para realizar a lesão de constrição crônica e os testes comportamentais pós-operatórios para avaliar as mudanças no comportamento espontâneo e evocado que são sinais de dor contínua e alodinia mecânica. Os métodos e leituras comportamentais são semelhantes ao modelo de lesão por constrição crônica do nervo infraorbital (IoN-CCI) em ratos. No entanto, mudanças importantes são necessárias para a adaptação do modelo IoN-CCI a camundongos. Primeiro, a abordagem intraorbital é substituída por uma abordagem mais rostral com uma incisão entre o olho e a almofada do bigode. O IoN é, portanto, ligado distalmente fora da cavidade orbital. Em segundo lugar, devido à maior atividade locomotora em camundongos, permitir que os ratos se movam livremente em pequenas gaiolas é substituído pela colocação de camundongos em dispositivos de retenção projetados e construídos sob medida. Após a ligadura DIoN, os camundongos exibem mudanças no comportamento espontâneo e em resposta à estimulação capilar de von Frey que são semelhantes às dos ratos IoN-CCI, ou seja, aumento da limpeza facial direcionada e hiperresponsividade à estimulação capilar de von Frey do território IoN.
Introduction
A dor neuropática surge de danos ao sistema nervoso somatossensorial, levando à transmissão anormal de sinais sensoriais ao cérebro. O dano do nervo somatossensorial nem sempre leva à dor neuropática, mas a prevalência aumenta com a gravidade da neuropatia clínica 1,2. Pacientes com dor neuropática apresentam sintomas específicos, como sensações espontâneas (queimação, formigamentos, sensações elétricas) e dor anormalmente intensa ou prolongada a estímulos inócuos ou nocivos que tendem a se tornar crônicos e resistentes ao tratamento com analgésicos convencionais3. Um progresso significativo no campo da pesquisa da dor neuropática decorre da descoberta de que ligaduras frouxamente constritivas ao redor do nervo ciático em ratos levam a comportamentos semelhantes às condições de dor neuropática humana4. Os animais exibem limiares reduzidos ao calor, frio e estimulação mecânica e exibem comportamentos nocifensivos. Apesar das diferenças biológicas inerentes ao processamento da dor entre humanos e roedores, os modelos animais são uma ferramenta valiosa para estudar os mecanismos subjacentes no desenvolvimento da dor neuropática e testar estratégias de tratamento recém-propostas.
Os paradigmas de teste de dor baseados em reflexos sensoriais têm sido amplamente utilizados em modelos de dor neuropática, mas medir a dor contínua ou outros distúrbios frequentemente acompanhados (distúrbio do sono, depressão, ansiedade) não recebeu atenção suficiente, considerando que esses são sintomas clínicos comuns que afetam a qualidade de vida 5,6,7,8 . O comportamento de higiene facial em ratos foi documentado como uma medida de dor neuropática espontânea após lesão por constrição crônica (CCI) do nervo infraorbital (IoN)9,10. Além disso, os ratos também desenvolvem hiperresponsividade à estimulação tátil leve do território IoN, o que é indicativo de alodinia mecânica.
Em comparação com os camundongos, devido ao seu tamanho maior, os ratos são mais adequados para lesões cirúrgicas. No entanto, os camundongos oferecem eficiência de custo e espaço e requerem quantidades menores de medicamentos. Além disso, o advento da tecnologia transgênica impulsionou ainda mais o uso de camundongos11,12. Portanto, o objetivo geral deste procedimento é realizar uma lesão cirúrgica do nervo infraorbital em camundongos, semelhante à de ratos, que induza alterações no comportamento espontâneo e evocado para o estudo da dor neuropática do trigêmeo.
Protocol
Representative Results
Discussion
Em ratos, foi argumentado anteriormente que uma abordagem intra-orbital para a IoN é preferível, considerando a importância da musculatura fina intacta controlando padrões complexos de batida na discriminação vibristátil e a distância relativa da incisão da linha média ao território do nervo cutâneoinfraorbital 10. Outros argumentaram que uma abordagem distal por meio de uma incisão na pele pilosa caudal ao coxim vibrissal tem uma série de benefício…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Os autores não têm agradecimentos.
Materials
| Chromic catgut (6-0) | Dynek | CG602D | ligatures |
| Cotton applicator | Pharmacy | ||
| Digital video camera | Sony | HDR-CX330E | |
| Dumont #5 forceps | Fine Science Tools | 11251-10 | |
| Dumont forceps – Micro-blunted tips (#5/45) | Fine Science Tools | 11253-25 | |
| Duratears | Alcon | 0037-820 | ophthalmic ointment |
| Hooked ligation aid | Fine Science Tools | 18062-12 | |
| Ketalar | Pfizer | ketamine (50 mg/mL) | |
| Operation microscope | Kaps | SOM 62 | |
| Precision cotton swab | Qosina | 10225 | |
| Precision trimmer | Philips | HP6392/00 | |
| Rompun | Bayer | xylazine (2%) | |
| Scissors – blunt tips | Fine Science Tools | 14574-09 | |
| Semmes-Weinstein Von Frey Aesthesiometer kit | Stoelting | 58011 | |
| Vicryl Rapide | Ethicon | MPVR489H | sutures |
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