هنا ، تم تفصيل بروتوكولين لتقييم مصدر الغذاء وتفضيلات وضع البيض في يرقات وإناث الذباب. وتشمل هذه أربعة خيارات مع عاملين متفاعلين: نوع الركيزة ودرجة الحرارة. تمكن المقايسات من تحديد تفضيل مصدر الغذاء لليرقات وتفضيل موقع وضع البيض للإناث.
يقدم الذباب المنتفخ (Diptera: Calliphoridae) مجموعة واسعة من أنماط حياة اليرقات ، والتي تصنف عادة على أنها تطفل ملزم ، وتطفل اختياري ، و sapro-necrophagy كاملة. تعتبر العديد من الأنواع الطفيلية ، الملزمة والاختيارية ، ذات أهمية صحية واقتصادية ، حيث يمكن أن تسبب يرقاتها الانقباضات (غزو اليرقات في الأنسجة الحية). ومع ذلك ، من الجدير بالذكر أن الأنثى البالغة تلعب دورا حاسما لأنها تختار موقع وضع البيض ، وبالتالي ، تحدد إلى حد كبير عادة التغذية والظروف التنموية لليرقات. في هذه الدراسة ، تم اقتراح بروتوكولين لاختبار تفضيل تغذية اليرقات وتفضيل موقع وضع البيض الأنثوي مع مراعاة عاملين متفاعلين: نوع ركيزة اللحم ودرجة الحرارة. سمحت الإعدادات المعروضة هنا باختبار يرقات Lucilia cuprina والإناث الجاذبة في اختبار من أربعة خيارات مع درجتي حرارة (33 ± 2 درجة مئوية و 25 ± 2 درجة مئوية) ونوعين من ركائز اللحوم (اللحوم الطازجة المكملة بالدم واللحوم الفاسدة البالغة من العمر 5 أيام). يمكن لليرقات أو الإناث الجاذبة أن تختار الحفر أو وضع بيضها ، على التوالي ، في أي مما يلي: اللحوم الفاسدة عند 25 درجة مئوية (محاكاة حالة الأنواع الميتة) ، واللحوم الطازجة المكملة بالدم عند 33 درجة مئوية (محاكاة حالة الأنواع الطفيلية) ، واثنين من الضوابط ، اللحوم الفاسدة عند 33 درجة مئوية ، أو اللحوم الطازجة المكملة بالدم عند 25 درجة مئوية. يتم تقييم التفضيل عن طريق حساب عدد اليرقات أو البيض الموضوعة في كل خيار لكل نسخة مكررة. سمحت مقارنة النتائج المرصودة بالتوزيع العشوائي بتقدير الدلالة الإحصائية للتفضيل. أشارت النتائج إلى أن يرقات L. cuprina لها تفضيل قوي للركيزة الفاسدة عند 25 درجة مئوية. على العكس من ذلك ، كان تفضيل موقع وضع البيض من قبل الإناث أكثر تنوعا بالنسبة لنوع اللحوم. يمكن تكييف هذه المنهجية لاختبار تفضيل أنواع الحشرات الأخرى ذات الحجم المماثل. يمكن أيضا استكشاف أسئلة أخرى باستخدام شروط بديلة.
الذباب ، وخاصة المسكوكات كاليبرات (بما في ذلك الذباب ، الذباب المنزلي ، ذباب الروبوت وذباب اللحم وغيرها) ، يظهر مجموعة واسعة من أنماط الحياة ، بما في ذلك السلوكيات الطفيلية والميتة1. عادة ما تسبب الأنواع الطفيلية الانقباضات ، وهي غزو الأنسجة الحية بواسطة اليرقات (اليرقات)2. في عائلة Calliphoridae ، تعتبر كل من الأنواع الطفيلية الإلزامية والاختيارية آفات حيوانية رئيسية مسؤولة عن الخسائر الاقتصادية وسوء رعاية الحيوانات بسبب تفشي اليرقات2،3،4،5،6،7. الطفيليات الملزمة ، مثل الديدان الحلزونية في العالم الجديد والعالم القديم (Cochliomyia hominivorax و Chrysomyia bezziana ، على التوالي) ، هي إشكالية خاصة4،7،8،9،10 جنبا إلى جنب مع الطفيليات الاختيارية ، مثل ذباب الأغنام (Lucilia cuprina و Lucilia sericata)2،5،6 ، 7. تتطور الأنواع غير الطفيلية ، بما في ذلك الأنواع sapro-necrophagous ، في المواد العضوية المتحللة والميتة وتوجد عادة في البيئات غير الصحية. يمكن استخدام نمط حياتهم غير الطفيلي بشكل صارم بنجاح لعلاج اليرقات ، والذي يستخدم يرقات الذباب لتنظيف جروح الأنسجة الميتة11،12،13. تستخدم الذباب أيضا في علم الطب الشرعي ، لأنها من بين الكائنات الحية الأولى التي تحدد موقع الجثث المتوفاة حديثا واستعمارها ، حيث تعمل اليرقات النامية كوسيلة لتقدير وقت الوفاة14.
كانت أنماط حياة الذبابة موضوع دراسات بحثية مختلفة (على سبيل المثال ، 15،16،17،18،19،20،21) نظرا لأهميتها فيما يتعلق بالمصالح البشرية. يمكن أن يوفر فهم الآليات البيولوجية التي تحكم نمط حياة الأنواع رؤى قيمة حول تحسين الأساليب التي تهدف إلى مكافحة أنواع الآفات. علاوة على ذلك ، يوفر تنوع وتطور أنماط حياة الذبابة سياقا مثاليا لدراسة أصول وآليات السمات المعقدة (مثل التطفل). تطور التطفل بسبب تغذية الديدان على الأنسجة الحية بشكل مستقل عدة مرات داخل عائلة Calliphoridae22,23. ومع ذلك ، لا يزال التاريخ التطوري لعادات تغذية الذباب غير معروف إلى حد كبير ، حيث تقتصر الدراسات على رسم خرائط للعادات على طول السلالات (على سبيل المثال ، 16،19،22) دون مساعدة المقايسات الوظيفية. على سبيل المثال ، من غير المؤكد ما إذا كانت الطفيليات الملزمة قد تطورت من عامة الناس (أي الطفيليات الاختيارية) أو مباشرة من الأنواع الميتة. كما أن العمليات الجزيئية والفسيولوجية والسلوكية المصاحبة للتحولات التطورية في نمط الحياة غير معروفة إلى حد كبير.
في هذا السياق ، توفر الطفيليات الاختيارية ، مثل ذبابة الأغنام Lucilia cuprina ، التي يمكن أن تتطور كطفيليات على مضيف أو كجثث على الجثث إمكانية استكشاف العوامل والآليات التي تتحكم في خيارات نمط الحياة. Lucilia cuprina هو نوع عالمي معروف بالتسبب في ذبابة الأغنام ، خاصة في أستراليا حيث يعتبر آفة 3,16. يمكن أن يحدث الانقباض الناتج عن L. cuprina أيضا في الماشية الأخرى والحيوانات الأليفة والبشر3،24،25،26،27،28،29،30. ومع ذلك ، يمكن أن تتطور يرقاتها أيضا في الأنسجة الميتة والمواد المتحللة وقد تم استخدام هذا النوع بنجاح في علم الحشرات الشرعي لأنه سريع جدا لتحديد موقع الجثث واستعمارها31،32،33،34. على الرغم من أن نمط الحياة الطفيلية مقابل غير الطفيلية للذباب يتم تحديده من خلال مرحلة اليرقات ، إلا أن الأنثى البالغة هي التي تختار موقع وضع البيض. وبالتالي ، فإن الأنثى البالغة تؤثر بشدة على نمط حياة اليرقات ، حيث أن هذه الأخيرة لديها حركة محدودة. ومع ذلك ، فإن اختيار الأنثى لا يعني بالضرورة أن اليرقات تفضل نفس الركيزة عند تقديمها مع الخيار35. إحدى الفرضيات هي أن التغييرات السلوكية التي تؤدي إلى وضع الإناث بيضها على الأنسجة الحية يمكن أن تكون جزءا من التحول المبكر نحو نمط حياة طفيلي. كانت التكيفات المسبقة أو القدرات الفسيولوجية لليرقات الناتجة ضرورية لتطورها الناجح على الأنسجة الحية ، مما أدى إلى ظهور نمط الحياة الطفيلية. على هذا النحو ، قد لا تتوافق العمليات المتأثرة والمختارة بالضرورة بين مرحلتي الحياة.
في هذا السياق ، تم تطوير طريقتين لاختبار التفضيل السلوكي في الذباب ، على وجه الخصوص ، ل L. cuprina ، فيما يتعلق بركيزة تغذية اليرقات (مقايسة تفضيل اليرقات) وموقع وضع البيض (مقايسة تفضيل الإناث). تأخذ هذه الطرق في الاعتبار عاملين متفاعلين: درجة الحرارة ونضارة اللحوم. تم اختيار درجة الحرارة كعامل حاسم لأن معظم حالات الانقباضات تحدث في الحيوانات المثليةالحرارة 2. ومن ثم ، تم اختيار درجة حرارة 33 درجة مئوية كبديل ل “عامل نمط الحياة الطفيلية” ، في حين أن درجة حرارة 25 درجة مئوية (درجة حرارة الغرفة) تمثل “العامل غير الطفيلي”. تم اختيار درجة حرارة 25 درجة مئوية لأنها تمثل متوسط درجة الحرارة السنوية المسجلة في البرازيل (المعهد الوطني للأرصاد الجوية ، INMET). بالإضافة إلى ذلك ، تم النظر في نوعين من ركائز اللحوم ، كلاهما من مصادر بقري: (i) اللحوم الطازجة المكملة بالدم ، والتي تحاكي الركيزة لنمط الحياة الطفيلية ، والتي تستخدم لتربية الذبابة الطفيلية Co. hominivorax في ظروف المختبر36 ، و (ii) اللحوم الفاسدة البالغة من العمر 5 أيام ، والتي تحاكي الركيزة لنمط الحياة الميتة. تستخدم الركيزة البقرية بشكل شائع لتربية L. cuprina في ظروف المختبر27،37،38،39 لأنها توفر العديد من المزايا من حيث التوافر والفعالية من حيث التكلفة والتطبيق العملي مع كونها ركيزة مبررة بيئيا. استخدمت دراسات أخرى40,41 تقارن تأثير الركائز الفاسدة مقابل الركائز الطازجة في الذباب ركيزة فاسدة عمرها 7 أيام (في الظروف اللاهوائية) وأظهرت تأثيرا سلبيا للركيزة الفاسدة على معدلات النمو والبقاء والنمو. نظرا لأنه من المعروف أن L. cuprina تستعمر الجثث الطازجة التي تتعرض عادة للهواء ، فقد قررنا استخدام اللحوم الفاسدة البالغة من العمر 5 أيام (اللحم المفروم) في أواني غير محكمة الغلق (التحلل الهوائي واللاهوائي) لتقليد الركيزة الميتة.
توفر التصاميم التجريبية المعروضة هنا ميزة تمييز التفضيلات للعوامل الفردية بالإضافة إلى آثارها المشتركة. علاوة على ذلك ، فإن الأنماط الظاهرية المسجلة ، وهي اختيار ركيزة تغذية اليرقات وعدد البيض الموضوعة ، لها صلة مباشرة بالجوانب البيولوجية والبيئية لأنواع الذبابة. يتم تسليط الضوء على مدى ملاءمة هذه البروتوكولات من خلال إظهار فعاليتها في L. cuprina. بالإضافة إلى ذلك ، يتم توفير برنامج نصي للتحليل الإحصائي ، والذي يمكن استخدامه لمقارنة النتائج المرصودة التي تم الحصول عليها في L. cuprina بمحاكاة البيانات العشوائية ، مما يضمن تحليلا وتفسيرات إحصائية قوية.
يتطلب فهم تطور عادات التغذية ، لا سيما في سياق التطفل في الذباب ، فحص تفضيلات الركيزة عبر مراحل الحياة المختلفة للتغذية أو وضع البيض. لذلك ، في هذه الدراسة ، تم اقتراح طرق قوية ومباشرة للتحقيق في تفضيلات الركيزة في يرقات وإناث الذباب. تم اختبار هذه الطرق في Lucilia cuprina ، وهي ذبابة طفيلية ا…
The authors have nothing to disclose.
نعرب عن تقديرنا لباتريشيا ج. تايسن وغابرييلا س. زامبيم ولوكاس دي ألميدا كارفاليو لتوفيرها مستعمرة L. cuprina ومساعدتهم في إعداد التجربة. نود أيضا أن نشكر رافائيل باروس دي أوليفيرا على تصوير الفيديو وتحريره. تم دعم هذا البحث من خلال منحة أبحاث الأمة النامية من جمعية سلوك الحيوان إلى V.A.S.C. ومنحة FAPESP Dimensions US-Biota-São Paulo إلى T.T.T. (20/05636-4). تم دعم ST و DLF من قبل FAPESP (19 / 07285-7 منحة ما بعد الدكتوراه و 21 / 10022-8 منحة دكتوراه ، على التوالي). تم دعم V.A.S.C. و AVR من خلال منح الدكتوراه CNPq (141391 / 2019-7 ، 140056 / 2019-0 ، على التوالي). تم دعم T.T.T. من قبل CNPq (310906 / 2022-9).
Agar | Sigma-Aldrich | 05038-500G | For microbiology |
Black cardboards | – | – | 70×50 cm |
Bovine blood with anticoagulat | – | – | 50% pure bovine blood with anticoagulant (3.8% sodium citrate) + 50% of filtered water |
Bovine ground Meat | – | – | Around 7-8% of fat |
Brush | – | – | Made with plastic |
Conical tube | Falcon or Generic | – | 50 mL |
Cross-shaped glass containers | Handmade | NA | 48×48 cm, 8 cm of height and 8 cm of width |
Erlenmeyer | Vidrolabor | NA | 500 mL |
70% Ethanol | Synth | A1084.01.BL | 70% ethyl ethanol absolute + 30% filtered water |
Graduated cylinder | Nalgon or Generic | – | 500 mL and 50 mL |
Heating pad | Thermolux | – | 30×40 cm dimensions, 40 W, 127 V |
Infrared thermometer | HeTaiDa | HTD8808 | Non-contact body thermometer (Sample Rate: 0.5 S, Accuracy: ±0.2 °C, Measuring: 5-15 cm) |
Petri dish (Glass) | Precision | NA | 150×20 mm dimensions |
(Note: the petri dishes can be plastic if used only once) | |||
Petri dish PS | Cralplast | 18130 | 60×15 mm dimensions |
Plastic Pasteur pipette | – | – | 3 mL (total volume) |
Sodium citrate | Synth | C11033.01.AG | 3.8% Sodium citrate (38 g diluted in 1L of filtered water) |
Spoons | – | – | More than one spoon is necessary. Use one for each type of meat substrate. Preferably stainless steel. |
Stainless steel spatula | Generic | – | Flat end and spoon end |
Stereomicroscope | Bioptika | – | WF10X/22 lenses |
Tweezer | – | – | Metal made and fine point |
White led light strips | NA | NA | 4.8 W, 2×0.05 mm², 320 lumens, Color temperature:6500 K (white) |