Modèle de métastases ganglionnaires drainantes pour évaluer la dynamique des lymphocytes T CD8⁺ spécifiques de l’antigène au cours de la tumorigenèse

L’immunothérapie du cancer, en particulier le blocage des points de contrôle immunitaires (ICB), a révolutionné le traitement du cancer¹. L’ICB bloque les immunorécepteurs co-inhibiteurs (tels que-1, Tim-3, LAG-3 et TIGIT), qui sont fortement exprimés dans les lymphocytes T CD8⁺ épuisés dans le microenvironnement tumoral (TME), ce qui entraîne la revigoration des lymphocytes T CD8⁺ épuisés². Compte tenu de l’hétérogénéité des lymphocytes T CD8⁺ épuisés, l’accumulation de preuves a révélé que les lymphocytes T CD8⁺ spécifiques à la tumeur dérivés de la périphérie, y compris les ganglions lymphatiques drainants (dLN), mais pas dans les EUT, médient l’efficacité de l’ICB 3,4,5,6,7,8. Récemment, il a été confirmé que les lymphocytes T CD8⁺ mémoires spécifiques à ^{la tumeur} TCF-1⁺TOX dérivés de TdLN (TdLN-T_TSM) étaient les véritables répondeurs aux ICB qui incarnent plusieurs propriétés fonctionnelles des lymphocytes T mémoires conventionnels et pourraient se développer et se différencier en cellules épuisées par la descendance lors du traitement par ICB⁹. Dans l’ensemble, ces résultats ont corroboré l’importance de LN dans le renforcement de l’immunité antitumorale.

Les ganglions lymphatiques fonctionnent comme un endroit critique pour faciliter l’amorçage et l’activation des lymphocytes T CD8⁺ spécifiques à la tumeur en fournissant une base structurelle ainsi que des signaux biologiques¹⁰. Plusieurs types de cellules cancéreuses ensemencent fréquemment le ganglion sentinelle (SLN, le premier LN drainant une tumeur primaire) avant une dissémination systématique¹¹. La présence de métastases SLN est liée à un mauvais pronostic dans le cancer humain et les modèles précliniques ont montré que les cellules tumorales du TdLN pouvaient se propager à des organes distants à la fois par les vaisseaux lymphatiques et les vaisseaux sanguins du ganglion 12,13,14,15. La biopsie SLN représente désormais une procédure standard pour guider les décisions de traitement ultérieures dans de nombreux types de tumeurs solides, ce qui pourrait éviter une résection inutile de LN^16,17 non impliquée. Même pour les LN concernés, la question de savoir si et quand une résection chirurgicale est nécessaire reste controversée, car plusieurs études ont démontré que l’ablation de LN régionale n’a pas amélioré la survie globale par rapport à ceux qui ont reçu une radiothérapie ou une thérapie systémique sans résection régionale^{LN 18,19}. Une interprétation est que le LN métastatique (mLN) avec une maladie microscopique peut conserver une certaine capacité à éduquer les cellules immunitaires et à fournir certains avantages thérapeutiques. Il est donc extrêmement important d’élucider comment les métastases LN affectent la réponse immunitaire anti-tumorale, en particulier les propriétés et les fonctions de TdLN-T_TSM.

Jusqu’à présent, les données précliniques et cliniques ont révélé certaines altérations structurelles et cellulaires du mLN²⁰. Cependant, les changements dynamiques des lymphocytes T CD8⁺ spécifiques à la tumeur au cours des métastases LN n’ont pas été délimités. Par conséquent, le développement d’un modèle convaincant de métastases LN est nécessaire pour une étude plus approfondie. En effet, plusieurs études ont rapporté des modèles murins de mLN de différentes manières 14,21,22. Par exemple, des métastases spontanées dans les LN axillaires ont été conduites par l’implantation de cellules cancéreuses du sein 4T1 dans le coussinet adipeux mammaire²². Dans une autre étude, Reticker-Flynn et al. ont généré des lignées cellulaires de mélanome avec une incidence élevée de propagation de la tumeur primaire sous-cutanée aux LN par inoculation en série de cellules tumorales cultivées à partir de tissus mLN dissociés (neuf tours)¹⁴. Un autre modèle couramment utilisé a été préparé par l’injection de cellules tumorales dans le coussinet plantaire et les loci métastatiques seraient formés dans le LN²² poplité. Notamment, il est difficile d’évaluer les moments précis de l’intervention car les métastases LN dans ces modèles ne sont pas toujours fidèles.

Dans la présente étude, un modèle métastatique murin de LN a été établi par injection intraganglionnaire de cellules B16F10-GP^23,24, générées par l’insertion médiée par CRISPR/Cas9 de la séquence du gène de la glycoprotéine (GP) du virus LCMV dans le génome de la lignée cellulaire 9 de B16F10. Ensuite, ces souris ont été transférées avec des cellules P14 qui hébergent des récepteurs de lymphocytes T transgéniques (TCR) reconnaissent spécifiquement l’épitope H-2D^b GP_33-41 ^25,26 et la dynamique systémique et locale des lymphocytes T CD8⁺ spécifiques de l’antigène pendant les métastases LN a pu être étudiée. Notre conception expérimentale fournit un modèle utile pour l’étude des réponses immunitaires, en particulier des lymphocytes T CD8⁺ spécifiques de l’antigène pendant la métastase LN, ce qui exclut la perturbation des lymphocytes T CD8⁺ témoins. Ces résultats affecteraient les options de traitement clinique de l’élimination ou de la conservation du LNm et jetteraient un nouvel éclairage sur la manipulation du LNm pour obtenir des avantages thérapeutiques maximaux.