用于评估肿瘤发生过程中抗原特异性 CD8⁺ T 细胞动力学的引流淋巴结转移模型

癌症免疫疗法，尤其是免疫检查点阻断 （ICB），彻底改变了癌症治疗¹。ICB 阻断在肿瘤微环境 （TME） 中耗竭的 CD8⁺ T 细胞中高表达的抑制性免疫受体（如 PD-1、Tim-3、LAG-3 和 TIGIT），导致耗竭的 CD8⁺ T 细胞重新焕发活力²。考虑到耗竭的 CD8⁺ T 细胞的异质性，越来越多的证据表明，来源于外周的肿瘤特异性 CD8⁺ T 细胞，包括引流淋巴结 （dLN），但不在 TME 中，介导 ICB ^3,4,5,6,7,8 的疗效。最近，TdLN 衍生的 TCF-1⁺TOX^– 肿瘤特异性记忆 CD8⁺ T 细胞 （TdLN-T_TSM） 被证实是 ICB 的真正应答者，它体现了传统记忆 T 细胞的多种功能特性，并且在 ICB 处理后可以进一步扩增和分化为后代耗竭细胞⁹。总而言之，这些发现证实了LN在增强抗肿瘤免疫力方面的重要性。

淋巴结通过提供结构基础和生物信号，在促进肿瘤特异性 CD8⁺ T 细胞的启动和激活方面发挥着关键作用¹⁰。在系统播散之前，几种类型的癌细胞经常播种前哨淋巴结（SLN，第一个引流原发肿瘤的 LN）¹¹。SLN 转移的存在与人类癌症的不良预后有关，临床前模型表明 TdLN 中的肿瘤细胞可以通过淋巴管和淋巴结¹²、^13、14、15 的血管扩散到远处器官。SLN 活检现在代表了指导许多实体瘤类型的后续治疗决策的标准程序，可以避免不必要的切除未受累的 LN^16,17。即使对于受累的 LN，是否以及何时需要手术切除仍然存在争议，因为多项研究表明，与接受放疗或全身治疗而未进行区域 LN 切除的患者相比，切除区域 LN 并未改善总生存期^18,19。一种解释是，患有微观疾病的转移性 LN （mLN） 可能保留了一些教育免疫细胞的能力并提供一些治疗益处。因此，阐明LN转移如何影响抗肿瘤免疫反应，尤其是TdLN-T_TSM的特性和功能至关重要。

到目前为止，临床前和临床数据都揭示了 mLN²⁰ 的一些结构和细胞改变。然而，肿瘤特异性CD8⁺ T细胞在LN转移过程中的动态变化尚未被描述。因此，需要开发一个令人信服的 LN 转移模型以进行进一步研究。事实上，一些研究通过不同的方式报告了mLN小鼠模型14,21,22。例如，腋窝 LN 的自发转移是通过将 4T1 乳腺癌细胞植入乳腺脂肪垫²² 进行的。在另一项研究中，Reticker-Flynn 等人通过连续接种从解离的 mLN 组织培养的肿瘤细胞（九轮）¹⁴，生成了从皮下原发肿瘤扩散到 LN 的高发生率黑色素瘤细胞系。另一种常用的模型是通过将肿瘤细胞注射到脚垫中制备的，转移位点将在腘窝LN²²中形成。值得注意的是，很难评估干预的精确时间点，因为这些模型中的 LN 转移并不总是忠实的。

在本研究中，通过节点内注射 B16F10-GP 细胞^23,24 建立了小鼠 LN 转移模型，该模型由 CRISPR/Cas9 介导的 LCMV 病毒糖蛋白 （GP） 基因序列插入 B16F10 细胞系⁹ 的基因组中产生。然后，将这些小鼠与携带转基因 T 细胞受体 （TCR） 的 P14 细胞转移，特异性识别 H-2D^b GP_33-41 表位^25,26，并且可以研究抗原特异性 CD8⁺ T 细胞在 LN 转移过程中的全身和局部动力学。我们的实验设计为免疫反应的研究提供了一个有用的模型，特别是LN转移过程中的抗原特异性CD8⁺ T细胞，排除了旁观者CD8⁺ T细胞的扰动。这些结果将影响临床治疗方案，即是否去除或保留 mLN，并为操纵 mLN 以实现最大治疗益处提供新的线索。