فحص جدوى الترايكوديرما ستروماتيكوم كونيديا داخل الدم المحيطي البشري الضامة المشتقة أحادية النواة

يتكون جنس الترايكوديرما (الرتبة: Hypocreales ، العائلة: Hypocreaceae) من الفطريات الرمية في كل مكان وهي طفيليات من الأنواع الفطرية الأخرى وقادرة على إنتاج مجموعة من الإنزيمات المفيدة تجاريا¹. تستخدم هذه الأنواع الفطرية لإنتاج البروتينات غير المتجانسة² ، وإنتاج السليلوز³ ، والإيثانول ، والبيرة ، والنبيذ ، والورق⁴ ، في صناعة النسيج⁵ ، وصناعة الأغذية⁶ ، وفي الزراعة كعوامل مكافحة بيولوجية ^7,8. بالإضافة إلى الاهتمام الصناعي بهذه الأنواع الفطرية ، فإن العدد المتزايد من الإصابات في البشر قد أعطى بعض أنواع الترايكوديرما حالة مسببات الأمراض الانتهازية⁹.

Trichoderma spp. تنمو بسرعة في الثقافة ، مع مستعمرات بيضاء وقطنية في البداية تتحول إلى الأصفر المخضر إلى الأخضر^{الداكن 10}. يتم تكييفها للعيش في مجموعة واسعة من ظروف الأس الهيدروجيني ودرجة الحرارة ، والأنواع الانتهازية قادرة على البقاء على قيد الحياة في درجة الحموضة الفسيولوجية ودرجات الحرارة ، وبالتالي ، استعمار الأنسجة البشرية المختلفة^11،12،13. الأهم من ذلك ، أن ارتفاع معدل الإصابة ب Trichoderma spp. قد يترافق مع عوامل الفوعة ، وهذه لم تدرس جيدا. بالإضافة إلى ذلك ، لا تزال الدراسات التي تركز على فهم الاستجابة المناعية ضد أنواع الترايكوديرما الانتهازية نادرة.

أثناء العدوى ، إلى جانب العدلات ، تمثل البلاعم خط الدفاع المسؤول عن البلعمة ، وبالتالي تمنع نمو واستعمار مسببات الأمراض في الأنسجة المختلفة. باستخدام مستقبلات التعرف على الأنماط ، مثل المستقبلات الشبيهة ب Toll ومستقبلات الليكتين من النوع C ، تقوم البلاعم بالفطريات البلعمية ومعالجتها في جسيمات البلعمة ، وبالتالي تعزيز انفجار الجهاز التنفسي ، وإطلاق السيتوكينات المؤيدة للالتهابات ، وتدمير الكائنات الحية الدقيقة البلعمية¹⁴. ومع ذلك ، يمكن أن تتأثر آلية البلعمة وتتهرب منها الاستراتيجيات الميكروبية المختلفة ، مثل حجم وشكل الخلايا الفطرية. وجود كبسولات تعيق البلعمة. تقليل عدد المستقبلات التي تحفز البلعمة ؛ إعادة تشكيل بنية ألياف الأكتين في السيتوبلازم ؛ إعاقة تشكيل الكاذب. وهروب البلعمة أو البلعمة بعد عملية البلعمة¹⁴.

تستخدم العديد من مسببات الأمراض ، بما في ذلك Cryptococcus neoformans ، الضامة كمكان مناسب للبقاء على قيد الحياة في المضيف ، ونشر العدوى وتحريضها¹⁵. يستخدم اختبار البلعمة والإزالة لتقييم الاستجابة المناعية ضد مسببات الأمراض وتحديد الاستراتيجيات الميكروبية المستخدمة للتهرب من جهاز المناعة الفطري^15،16،17. يمكن أيضا استخدام هذا النوع من التقنية لفحص الحركية التفاضلية للبلعمة ، وتحمض البلعمة المتأخر ، والانفجار التأكسدي الذي يؤدي إلى تقليل قتل الفطريات¹⁸.

يمكن استخدام طرق مختلفة لتقييم البلعمة، وبقاء الفطريات، والتهرب من عملية نضوج الجسيمات. وتشمل هذه المجهر الفلوري ، والذي يستخدم لمراقبة البلعمة ، والموقع الخلوي ، والجزيئات المنتجة أثناء البلعمة¹⁹. قياس التدفق الخلوي ، الذي يوفر بيانات كمية عن البلعمة ويستخدم لتقييم العلامات المختلفة المشاركة في العملية^20,21 ؛ الفحص المجهري داخل الجسم ، والذي يستخدم لتقييم التقاط الميكروبات ونضج البلعمة²² ؛ البلعمة بوساطة الأجسام المضادة ، والتي تستخدم لتقييم خصوصية عملية البلعمة لمسببات الأمراض²³ ؛ وغيرها^{24،25،26،27}.

يستخدم البروتوكول المقدم هنا طريقة شائعة ومنخفضة التكلفة ومباشرة باستخدام المجهر الضوئي ومقايسة نمو الصفائح لتقييم البلعمة وقتل الكونيديا الفطرية. سيوفر هذا البروتوكول للقراء تعليمات خطوة بخطوة لإجراء فحص البلعمة والإزالة باستخدام الضامة المشتقة من الدم البشري أحادي النواة المعرضة ل T. stromaticum. تم استخدام PBMCs لأن Trichoderma conidia يتم تطبيقه كمكافحة حيوية ضد مسببات الأمراض النباتية والأسمدة الحيوية للمحاصيل النباتية في جميع أنحاء العالم وتسبب في العديد من الإصابات البشرية ، والتي تسمى داء المشعرات. إلى جانب ذلك ، لا يوجد سوى عملين سابقين يركزان على التفاعل بين Trichoderma conidia وجهاز المناعة البشري ، حيث قمنا بفحص العدلات²⁸ والالتهام الذاتي في الضامة²⁹. توضح هذه المقالة أولا كيف يمكن دراسة البلعمة في كونيديا T. stromaticum بواسطة البلاعم المشتقة من PBMC ، ثم كيف يمكن تقييم صلاحية الكونيديا المبتلعة باستخدام تقنيات بسيطة قائمة على الفحص المجهري. قد يسهل هذا البروتوكول بشكل أكبر التحقيقات في الاستجابة المناعية المرتبطة بالبلاعم أو الآليات المتعلقة بتعديل الجهاز المناعي.