심정지, 소생술 및 자발순환 회복 후 심장 손상 및 혈역학을 연구하기 위한 새끼돼지 주산기 질식 모델

이 프로토콜은 노르웨이 식품 안전청(승인 번호 25030)의 승인을 받았으며 실험은 유럽, 노르웨이 및 기관 규정에 따라 수행되었습니다. 이 모델을 복제하려면 제도적 및 국가 규정에 따라 동물 실험에 대한 윤리적 승인을 획득하고 세 가지 Rs23에 따라 실험을 수행해야 합니다. 동물을 취급하는 모든 직원은 EU 지침 2010/63/EU 24의 23조 및24조 또는 이와 동등한 규정에 따라 기능 A, B 및 D 인증을 받아야 합니다. 전체 실험 동안 동물을 주의 깊게 모니터링하고 마취, 인공호흡기 설정, 온도 및 동물 위치를 조정하여 동물의 웰빙을 보장합니다. 모델과 해당 응용 프로그램을 정기적으로 비판적으로 평가하고 필요에 따라 가능한 대로 구체화합니다. 참고: 이 연구에 사용된 새끼 돼지는 12-36세, 체중 1.7-2.3kg, 성별 분포가 동일하고 노르웨이 랜드레이스, 듀록 및 요크셔 혼혈이었고 유전적으로 변형되지 않았습니다. 프로토콜의 1단계 및 2단계는 실험 전반에 걸쳐 적용되는 전신 마취 및 데이터 샘플링 절차를 포함하며, 3-10단계는 동물의 준비, 외과적 개입, 심정지까지 질식, 소생술 및 소생술 후 관찰을 포함한 실험 절차를 자세히 설명합니다. 1. 마취 프로토콜(TIME: 전체 실험에 적용) 귀 정맥의 말초 정맥 카테터에 IV 펜타닐(50μg/kg)과 펜토바르비탈(15-20mg/kg)의 볼루스로 마취를 유도합니다.주의: 펜타닐은 흡입하거나 섭취하면 유해하며 눈과 피부를 자극합니다. 또한 제한 약물입니다. 그 공급과 사용은 제한 약물에 대한 규정에 따라 모니터링되고 규제되어야 합니다. 펜토바르비탈은 섭취하면 유해하며 눈과 피부를 자극합니다. 질식할 때까지 IV 펜타닐(50μg/kg/h)로 마취를 유지한 다음 질식 중에 중지하고 자발 순환(ROSC)이 회복된 후 25μg/kg/h로 다시 시작합니다.참고: 이 모델에 사용된 고용량 펜타닐 마취는 신생아 전문의와 소아 마취과 전문의가 참여하는 공동 노력으로 수십 년 동안 모델을 개선한 결과입니다. 고용량 펜타닐 마취는 심혈관 및 혈역학적 안정성과 관련이 있습니다 25,26 인간 성인과 신생아에서. 그러나 신생아 새끼 돼지를 대상으로 한 한 연구에서는 펜타닐 사용이 HR 및 심박출량(CO) 감소 및 평균 동맥압(MAP), 좌심실 이완기말 압력 및 총 말초 저항 지수 증가와 관련이 있음을 보여주었습니다27. 전체 실험에서 새끼 돼지의 웰빙을 모니터링하십시오. 근육의 긴장도를 확인하고 활력을 평가하여 새끼 돼지가 완전히 마취되었는지 확인하십시오. 새끼 돼지가 고통의 징후를 보이면 임상적 판단에 따라 추가 IV 펜타닐 또는 IV 펜토바르비탈을 투여하십시오. 2. 데이터 샘플링 및 등록(TIME: 전체 실험에 적용) 각 새끼 돼지에 대해 종이 케이스 등록 양식(CRF)을 인쇄합니다. CRF에는 HR, 혈압(MAP 포함), 산소 포화도(SpO2), 국소 대뇌 산소 포화도(NIRS), 체온, 제공된 추가 약물 및 떨림에 대한 정보가 포함되어 있습니다. CRF에서 새끼 돼지에게 ID 번호를 부여하고 첫 페이지에 새끼 돼지의 체중과 성별을 기록하십시오. 안정화 기간 동안 그리고 질식 유도 직전에 5분마다 등록을 하십시오. 질식 유도 후 10 분 후에 첫 번째 등록을 한 다음 심장 마비까지 5 분마다 등록하십시오. ROSC가 달성되면 ROSC 후 가능한 한 빨리, ROSC 후 처음 1시간 동안 5분마다, 나머지 관찰 기간 동안 30분마다 등록하십시오. CRF에 다른 표본을 수집할 시기를 명시합니다.안정화 시작, 질식 유도 직전, 심정지, ROSC, ROSC 후 30분, 60분, 120분, 240분 및 540분, 연구 종료 시(570분) 전혈과 혈장을 수집합니다.참고 : 각 새끼 돼지에서 얼마나 많은 혈액을 채취 할 수 있는지 계산하는 것이 중요합니다. 예를 들어, 작은 새끼 돼지, 불안정한 새끼 돼지 및 목 수술로 인해 약간의 출혈을 겪은 새끼 돼지에서 더 적은 혈액을 채취 할 수 있습니다. 실험 내내 산-염기 상태에서 헤모글로빈(Hb)을 관찰하는 것도 중요합니다. 이 연구에서는 Hb가 <6g/dL인 새끼 돼지는 제외되었습니다. ROSC 후 240분과 연구 종료 시(570분)에 소변을 수집합니다. 안정화 시작 시, 질식 유도 직전, 질식 유도 후 10분, 심정지까지 5분마다 산-염기 상태를 취합니다. 심정지 시, ROSC, ROSC 후 5분, 15분, 30분, 60분, 120분, 240분 및 540분 및 연구 종료 시(570분) 산-염기 상태를 취합니다. 연구 종료 시 뇌척수액(CSF)을 수집합니다(570분). 중앙 동맥 카테터에서 전혈과 혈장을 수집합니다.중앙 동맥 카테터에서 혈액 2mL를 헤파린 주사기로 빼내어 옆으로 눕힌다. 그런 다음 2.5mL의 혈액을 새로운 헤파린 주사기에 넣습니다. 마지막으로 채취한 전혈 0.5mL를 미세 원심분리기 튜브에 넣고 액체 질소에서 급속 동결합니다. 나머지 2mL를 적절한 크기의 EDTA 바이알에 넣고 4°C에서 1,700 x g 에서 10분 동안 원심분리합니다. 혈장(버피 코트와 적혈구에서 최상층으로 분리됨)을 미세 원심분리기 튜브에 피펫팅하고 액체 질소에서 급속 동결합니다. 중앙 동맥 카테터에서 또 다른 0.2mL의 혈액을 새로운 헤파린 주사기로 빼냅니다. 주사기를 산-염기 기계에 넣고( 재료 표 참조) 관련 정보(ID, 시점 및 새끼 돼지의 온도)를 입력합니다. 첫 번째 헤파린 주사기로 빼낸 혈액을 동맥 카테터로 다시 밀어 넣습니다. 동맥 카테터를 헤파린 처리된 생리 식염수로 씻어내어 모든 혈액이 새끼 돼지의 순환계로 되돌아가도록 합니다. 소변의 치골 상 흡인으로 소변을 수집합니다.랜드 마크를 찾으십시오 : 세 번째로 낮은 젖꼭지와 두 번째로 낮은 젖꼭지 사이의 영역, 배꼽 아래 약 2cm, 정중선에서 측면으로 몇 밀리미터. 23G 캐뉼라가 있는 10mL 주사기를 사용하십시오. 캐뉼라를 수직으로 약 1cm 전진시키고 주사기에 소변이 채워질 때까지 흡인합니다. 소변을 극저온 튜브에 넣고 액체 질소에서 급속 냉동합니다. 요추 천자로 뇌척수액을 수집합니다.새끼 돼지를 옆으로 눕히고 뒷다리를 가슴쪽으로 당깁니다. 랜드 마크를 찾으십시오 : 새끼 돼지의 장골 볏 수준에서 척추 태그 사이. CSF가 나타날 때까지 척추 태그 사이의 약간 두개골 방향으로 21G 캐뉼라를 전진시킵니다. CSF를 미세 원심 분리기 튜브에 넣고 액체 질소에서 급속 동결합니다. 데이터 수집 및 분석 소프트웨어( 재료 표 참조)를 사용하여 연속 ECG 및 침습 동맥 혈압 데이터(6단계 및 7단계 참조)를 수집합니다. 상업적으로 이용 가능한 NIRS 기계로 NIRS(단계 7 참조)를 수행합니다( 재료 표 참조). 3. 준비 (시간 : 몇 주에서 몇 달, 필요한만큼) 동물 실험에 대한 윤리적 승인을 얻습니다. 농부에게 연락하여 새끼 돼지 선택 (연령 : 12-36 시간, 동등한 성별 분포, 체중 : 1.7-2.3 kg), 배달 날짜 및 운송 준비를 구성하십시오.참고: 동일한 인종(이 연구에서는 노르웨이 랜드레이스, 듀록 및 요크셔가 혼합됨)과 농장에서 새끼 돼지를 선택하는 것이 이상적으로는 동일한 깔짚에서 좁은 연령 범위 내에서 생물학적 및 생리학적 차이를 줄이는 데 중요합니다. 직원이 설정된 날짜에 사용할 수 있는지 확인하십시오. 필요한 모든 장비를 사용할 수 있고 모든 기기와 관찰 도구가 작동하는지 확인하십시오. 질식 가스(8% O2, 92%N2)의 유효 기간이 비어 있지 않은지 확인하십시오. 새끼 돼지를 수용 할 수 있도록 실험실과 모든 장비를 설치하십시오. 필요한 모든 장비를 보정하십시오. 무작위 대조 시험의 경우 표본 크기 추정을 수행하고 새끼 돼지의 무작위화를 준비합니다. 4. 새끼 돼지의 접수 (시간 : 새끼 돼지 수에 따라 10 분에서 2 시간까지) 실험 당일 농장에서 수술 시설로 국내 새끼 돼지를 수송하는 것을 조직하십시오. 새끼 돼지의 온도를 유지하기 위해 고운 나무 조각과 뜨거운 물병으로 용기 “바닥”을 덮으십시오. 공기 순환을 보장하기 위해 용기에 버 구멍을 만드십시오. 새끼 돼지의 나이와 체중에 대한 정보를 농부로부터 얻으십시오. 도착 시 체중을 확인하십시오. 새끼 돼지가 용기에서 평온하고 편안하게 있는 동안 새끼 돼지의 뒷다리에 맥박 산소 측정기(PO) 프로브(재료 표 참조)를 배치하여 SpO2 및 HR을 측정합니다. 모든 기구를 준비하고 수술대 위의 전기 난방 매트리스에 불을 켭니다. 팀의 모든 사람들이 마취 유도 및 외과 적 개입을 할 준비가 될 때까지 새끼 돼지를 용기에 넣으십시오. 5. 마취유도, 삽관, 기계환기 (소요시간: 15분) IV 접근 및 삽관을 위한 장비를 준비합니다. 마취 및 삽관 유도 중 산소 공급 및 HR 모니터링을 위해 뒷다리에 PO 프로브를 적용합니다. 포대기에 싸인 새끼 돼지를 가만히 잡고 있는지 확인하십시오. 두 사람이 말초 정맥 카테터를 귀 정맥에 삽입했는지 확인하십시오. 약 1mL의 생리 식염수로 카테터를 씻어내어 배치를 확인합니다. 테이프로 카테터를 고정합니다. 펜타닐과 펜토바르비탈의 일시 용량을 귀 정맥에 주입합니다(1.1단계에서 설명한 대로). 생리 식염수 1mL로 카테터를 세척합니다. 철수 반사를 평가하여 새끼 돼지가 마취되었는지 확인하십시오. 사람이 새끼 돼지를 앙와위 자세로 놓도록하십시오. 입을 벌리고 10cm x 10cm 거즈 면봉으로 혀를 빼냅니다. 후두를 일직선으로 유지하십시오. 두 사람이 후두경( 재료 표 참조)을 사용하여 혀를 들어 올리도록 합니다. 후두경을 전진시켜 후두개를 들어 올리고 성대를 시각화합니다. 성대를 통해 기관내관(ETT, 재료 표 참조)을 전진시킵니다.알림: 커프가 있는 ETT를 사용하면 성대를 통한 ETT의 전진이 더 어려워질 수 있습니다. 삽관이 어려운 경우 새끼 돼지의 활력 징후를 관찰하는 것이 특히 중요합니다. 바이탈이 떨어지면 새끼 돼지의 주둥이에 마스크를 씌우고 마스크를 자체 팽창 백에 연결하고 바이탈이 정상화될 때까지 수동으로 새끼 돼지를 환기시킵니다. 그런 다음 삽관을 다시 시도하십시오. 여전히 어렵다면 펜토바르비탈을 추가로 투여하는 것이 좋습니다. 드문 경우(예: 상기도 기형)에는 기관절개술을 시행해야 합니다. 그러나 숙련 된 직원이 있으면 삽관은 일반적으로 쉽게 수행됩니다. ETT를 자체 팽창 백( 재료 표 참조)에 연결하고 수동 환기를 시작합니다. 1) 환기 시 양측 및 대칭 흉부 상승, 2) 상복부를 통한 공기 유입 소리 없이 폐장에서 양측 및 대칭 호흡음, 3) SpO2 및 HR 반응, 4) ETT 내부의 응결로 올바른 ETT 배치를 확인합니다. 만료 된 CO2 는 의심스러운 경우 (반) 정량적으로 측정 할 수도 있습니다. ETT 커프를 팽창시킵니다. 세로로 반으로 쪼갠 테이프로 12-13cm (2kg 새끼 돼지의 경우)의 깊이에 ETT를 고정하십시오. 앞니 바로 말단에 있는 ETT 부분 주위에 테이프를 붙이고 주위를 계속 돌립니다. 새끼 돼지가 기계식 인공 호흡기에 연결된 외과 적 개입 테이블로 옮겨 질 때까지 수동으로 환기를 계속하십시오. 테이블에서 다음 설정으로 ETT를 기계식 인공호흡기(재료 표 참조)에 연결합니다: P Insp = 15-20cm H 2O, Peep = 5.0cm H2O, Flow Insp = 8.0L/min, Frequency = 30bpm 및 T Insp = 0.34초. 참고: 새끼 돼지에 SpO2가 <90%인 경우SpO2가 ≥90%가 될 때까지 PInsp와 빈도를 증가시킬 수 있습니다. 소생술 프로토콜이 다른FiO2s의 비교를 포함하지 않는 경우 보충 산소를 사용할 수 있습니다. 직장 체온계를 놓고 새끼 돼지의 꼬리 주위에 수술 용 테이프로 고정하십시오. 따뜻한 담요/수건을 둥지처럼 감싸고, 새끼 돼지 아래 가열 매트리스의 온도를 조절하거나, 고무/라텍스 장갑에 뜨거운 수돗물을 채우고 새끼 돼지를 둘러싼 수건에 넣어 새끼 돼지의 온도(38.5-39.0 °C)를 유지합니다. 외과 적 개입 중 새끼 돼지의 온도를 관찰하고 필요에 따라 온도 안정화 조치를 수행하십시오. 6. 외과 개입 (시간 : 20 분) 필요한 모든 장비를 준비하고 모든 카테터를 생리 식염수로 채웁니다(그림 1). CRF에서 외과 적 개입이 시작되는 시간을 기록하십시오. 3-5개의 수술용 스폰지를 사용하여 5mg/mL 유색 클로르헥시딘으로 마취된 새끼 돼지의 피부를 소독합니다. 메스를 사용하여 새끼 돼지의 목 오른쪽에 2.5cm 길이의 피부 절개를하십시오. 눈꺼풀 견인기를 사용하여 절개 부위 양쪽의 피부를 수축시킵니다. 동맥 겸자를 사용하여 내부 경정맥을 해부하고 노출시킵니다(그림 2). 경정맥 아래에 두 개의 나일론 3-0 봉합사를 배치하여 안정적으로 유지합니다. 한 손에는 봉합사 중 하나를 잡고 다른 한 손에는 중심 정맥 카테터를 잡습니다(그림 3). 중심 정맥 카테터를 삽입하고 바늘을 빼냅니다. 카테터가 정맥 내부에 있는 부위의 정맥(및 카테터) 주위에 정맥을 고정하는 데 사용된 봉합사 중 하나를 묶습니다(그림 4).알림: 고정 봉합사가 카테터 주위에 너무 단단히 묶여 있지 않은지, 매듭이 카테터의 말단 끝 부분에 근접해 있는지 확인하십시오. 카테터의 올바른 배치를 확인하기 위해 생리 식염수 1mL로 씻어냅니다. 흡수성 4-0 봉합사로 피부를 닫으십시오. 펜타닐 50μg/kg/h와 균형 잡힌 탄수화물-전해질 용액(10mg/mL 포도당, 재료 표 참조)을 중심 정맥 카테터에 연결합니다. 메스를 사용하여 새끼 돼지의 목 왼쪽에 2.5cm 길이의 피부 절개를하십시오. 절개 부위를 목 오른쪽 절개 부위보다 약간 더 내측으로 만듭니다. 눈꺼풀 견인기를 사용하여 절개 부위 양쪽의 피부를 수축시킵니다. 그런 다음 동맥 겸자를 사용하여 총경동맥(흉쇄유돌근 내측)을 해부하고 노출시킵니다. 두 개의 나일론 3-0 봉합사를 총경동맥 아래에 놓아 안정적으로 유지합니다. 한 손에는 봉합사 중 하나를 잡고 다른 한 손에는 중앙 동맥 카테터를 잡습니다. 중앙 동맥 카테터를 삽입하고 바늘을 빼냅니다. 카테터가 동맥 내부에있는 영역에서 동맥 (및 카테터) 주위에 동맥을 고정하는 데 사용 된 봉합사 중 하나를 묶습니다.알림: 고정 봉합사가 카테터 주위에 너무 단단히 묶여 있지 않은지, 매듭이 카테터의 말단 끝 부분에 근접해 있는지 확인하십시오. 카테터의 올바른 배치를 확인하기 위해 생리 식염수 1mL로 씻어냅니다. 흡수성 4-0 봉합사를 사용하여 카테터 날개를 피부에 고정하고 피부를 닫습니다. 침습적 동맥 혈압 모니터링( 재료 표 참조)에 연결하고 데이터 수집 및 분석 소프트웨어를 사용하여 기록을 시작합니다.알림: 정확한 혈압 판독값을 얻으려면 침습적 동맥 BP 변환기가 심장 수준에서 보정되었는지 확인하십시오. 투명한 드레싱으로 덮으십시오. 이제 중앙 동맥 카테터가 제자리에 있습니다. 수술이 끝난 시간을 CRF에 기록하십시오. 7. 안정화(시간: 최소 1시간, 그러나 수술 후 새끼 돼지를 안정시키고 직원이 질식 유도를 준비하는 데 필요한 만큼) 새끼 돼지를 ECG 모니터링 장비에 연결하십시오 ( 재료 표 참조).전극을 배치하기 전에 필요에 따라 면도하고 머리카락을 제거하십시오. 흉부의 양쪽에 두 개의 전극을 배치합니다 – 각 상지의 내측에 있습니다. 세 번째 전극을 배꼽의 왼쪽에 놓습니다. 리드를 전극에 연결하고 데이터 수집 및 분석 소프트웨어를 사용하여 기록을 시작합니다. 새끼 돼지를 비침습적 CO 모니터링 장치에 연결합니다( 재료 표 참조).전극을 배치하기 전에 필요에 따라 면도하고 머리카락을 제거하십시오( 재료 표 참조). 첫 번째 전극을 새끼 돼지의 머리 위, 눈 바로 뒤에, 두 번째 전극을 목 왼쪽에, 세 번째 전극을 복부 왼쪽에, 겨드랑이 중간에 배꼽 높이에, 네 번째 전극을 왼쪽 허벅지에 놓습니다. 장치에 관련 정보를 입력하고 녹음을 시작합니다. 제한된 내부 메모리로 인해 실험 기간에 따라 샘플링 속도를 조정하십시오. 새끼 돼지를 NIRS 모니터링에 연결합니다.전극을 배치하기 전에 필요에 따라 면도하고 머리카락을 제거하십시오. NIRS 전극( 재료 표 참조)을 새끼 돼지의 머리 상단, 비침습적 CO 전극 뒤에 놓고 빛으로부터 보호하기 위해 불투명 테이프로 고정합니다. 해당되는 경우 새끼 돼지를 추가 모니터링 장비에 연결하고 이것이 실험 프로토콜의 일부인 경우 심 초음파를 수행합니다. 새끼 돼지를 편안한 자세로, 가급적이면 엎드린 자세로 놓으십시오. 측정 및 등록을 수행하고 안정화 기간 동안 CRF에 기록합니다(2단계 참조). 안정화 기간 동안 온도,SpO2, HR, BP 및 떨림에 대하여 자돈을 관찰한다. 인공호흡기 설정과 새끼 돼지의 체온을 조정하고 적절하게 추가 마취를 합니다. 8. 질식 및 심정지 유도(시간: 15-60분, 새끼 돼지에 따라 다름) 참고: 관련된 모든 인원은 질식을 유도하기 전에 자신의 역할을 알아야 합니다. 질식을 시작할 시간을 결정하고(안정화 기간 및 인력 가용성에 따라) 이를 CRF에 기록하십시오. CRF에 새끼 돼지의 생리 학적 측정 값을 기록하고 질식 유도 직전에 혈액 샘플을 채취하십시오. 질식이 시작되기 직전에 펜타닐 IV를 중지하십시오. 질식을 시작하려면 기계식 인공 호흡기의 산소 다이얼을 100 %로 돌리고 인공 호흡기의 산소 호스를 질식 가스 (8 % O 2, 92 % N2 )로 전환하십시오. 인공호흡기 속도를 분당 10회 줄입니다. 유도가 성공적인지 확인하기 위해 새끼 돼지의SpO2 가 떨어지고 있는지 확인하십시오. 질식 10분 후 인공호흡기 속도를 분당 10회 더 줄입니다. 질식 10분 후, 그 후 5분마다 산-염기 상태를 측정하고 CRF에 새끼 돼지의 생리학적 측정값을 기록합니다. 심장 마비가 발생할 때까지 계속하십시오. 질식 20분 후 인공호흡기 속도를 분당 10회 더 줄입니다. 질식 30분 후 동맥 겸자로 ETT를 고정합니다. MAP가 20mmHg 아래로 떨어지면 심장의 지속적인 청진을 시작합니다.참고: 심정지는 청진 및/또는 동맥선 맥동의 상실에 의해 들리지 않는 심장 박동으로 정의됩니다. ECG에서 펄스가 없는 전기 활동(PEA)이 발생할 수 있습니다. 그 사람이 마음을 청진하는지 확인하십시오. ETT cl을 제거하는 동안 심장 박동이 더 이상 들리지 않을 때(심정지) 큰 소리로 외치십시오.amp. 사람이 인공호흡기의 질식 가스 호스를 산소 배출구로 다시 전환하도록 하십시오. CRF에 심정지 시간을 기록하고 타이머를 시작합니다. 프로토콜에 의해 할당된 FiO2를 설정한다(본 연구에서, 새끼 돼지는 0.21 또는 1.0의FiO2를 받도록 무작위 배정되었다). 인공호흡기 설정을 다음과 같이 설정합니다: P Insp = 30cm H 2O, Peep = 5.0cmH2O, Flow Insp= 8.0L/min, Frequency = 40bpm, TInsp = 0.34초. 2.5단계에 설명된 대로 심정지 시점에서 혈액 샘플을 채취합니다. 9. 심폐소생술(CPR)(시간: 0-15분) 참고: 심폐소생술은 ILCOR(International Liaison Committee on Resuscitation) 지침28에 따라 수행할 수 있으며, 연구 목적에 따라 3:1 흉부 압박 대 환기 비율 또는 흉부 압박 대 환기 비율이 다릅니다. ILCOR에서 권장하는 3:1 CPR을 사용하는 경우 다음 단계를 수행하십시오.심장 마비 후 30 초 동안 새끼 돼지를 기계적으로 환기시킵니다. 그런 다음 흉부 압박을 시작하고 3:1 흉부 압박 대 환기 비율을 목표로 합니다.알림: 인공호흡기가 사람이 아닌 인공호흡을 수행하기 때문에 흉부 압박과 인공호흡이 때때로 동시/조정되지 않을 수 있습니다. 흉부 전후 직경의 1/3 깊이까지 가슴을 압박하고 가슴 반동을 완전히 허용하고 두 엄지 손가락으로 손을 감싸는 기술을 사용합니다. 수축기 동맥압 ≥20mmHg를 생성하는 것을 목표로 합니다. 흉부 압박 30초 후 아드레날린(0.02-0.03 mg/kg) IV를 투여한 다음 CPR 3분마다(최대 4회 투여). 각 아드레날린 투여 후 1mL의 생리 식염수로 씻어냅니다. 동맥 혈압 추적 및 ECG를 관찰하여 ROSC를 결정하고 심장 청진으로 확인합니다. ROSC의 정의는 안정적이고 비보조 HR≥100bpm입니다. ROSC까지 또는 최대 15분 동안 소생술을 계속합니다. 심폐소생술이 15분 이내에 성공하지 못하면 소생술 노력을 중단하고 사망 시간을 기록하고 CRF에 기록하십시오. 소생술 노력이 성공하면 ROSC 시간, 심폐소생술 기간(초) 및 투여된 아드레날린 투여 횟수를 CRF에 기록하십시오. ROSC 후 가능한 한 빨리 혈액 샘플과 CRF 등록을 채취하고 2단계에서 설명한 대로 등록을 9.5시간(570분) 더 계속합니다. 10. ROSC 후 관찰(시간: 9.5시간) 펜타닐 IV 주입을 초기에 25μg/kg/h로 재도입하고 임상 효과/요구 사항에 따라 적정합니다.참고: 질식 중 및 질식 후 대사율이 감소하므로 펜타닐 IV의 용량이 낮아집니다. 그러나 일부 새끼 돼지는 더 높은 주입 속도가 필요할 수 있으므로 새끼 돼지의 활력과 반사 신경을 관찰하는 것이 중요합니다. 조심스럽게 새끼 돼지를 9.5 시간 동안 모니터하십시오. SpO 2 ≥90%를 유지하고 정상 혈압(온도 조정 CO 2 분압 2 (pCO2) 5-7.5kPa)을 유지하기 위해 필요에 따라 기계식 인공호흡기 설정을 조정합니다. 새끼 돼지의 체온을 38.5-39.0 °C로 유지하고 지시에 따라 온도 보정 조치를 취하십시오.참고: 새끼 돼지는 질식 중과 후에 저체온증에 걸리는 경향이 있습니다. 채취ampCRF에서 지시한 대로 미리 결정된 시점에서 샘플 및 CRF 등록(2단계). ROSC 후 관찰 9.5시간에서 새끼 돼지를 안락사시킵니다(단계 11).참고: 일부 새끼 돼지는 ROSC 후 관찰의 전체 9.5시간에서 생존하지 못할 수 있습니다. 새끼 돼지가 심각한 고통과 악화 된 상태의 징후를 보이면 조기에 안락사를 시행하십시오. 11. 안락사 (소요시간: 10분) 필요한 수술 장비, 조직 샘플을 보관할 바이알, 샘플을 급속 냉동하기 위한 액체 질소로 해부 테이블을 준비합니다. 2단계에서 설명한 대로 연구 종료(570분) 샘플을 수집합니다. IV 펜토바르비탈 150mg/kg을 투여합니다. 해부를 수행하고, 장기 샘플을 표시된 극저온 튜브에 넣고, 액체 질소에서 급속 동결합니다. 원하는 경우 포르말린에 1 개의 두뇌 절반을 보관하십시오. 실험의 샘플(전혈, 혈장, 소변, CSF 및 장기 샘플)을 -80°C 냉동고에 넣거나 계획된 분석에 따라 다른 방식으로 보관하십시오. 그림 1: 수술 도구가 있는 멸균 테이블. 수술 도구는 목 수술을 시작하기 전에 멸균 테이블에 준비되고 보관됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 그림 2: 내부 경정맥. 내부 경정맥은 해부되어 노출된 후입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 그림 3: 중심 정맥 카테터 삽입. 봉합사 실은 중심 정맥 카테터를 삽입하기 직전에 고정됩니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 그림 4: 중심 정맥 카테터를 고정하기 위한 봉합사. 봉합사는 정맥 내부에 카테터를 고정하기 위해 정맥(및 카테터) 주위에 묶입니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오.