Il presente protocollo descrive un labirinto riconfigurabile, un sistema unico per testare la navigazione spaziale e i fenotipi comportamentali nei roditori. L’adattabilità di questo sistema di labirinto consente l’esecuzione di vari esperimenti in un unico ambiente fisico. La facilità di riarrangiamento strutturale genera risultati sperimentali affidabili e riproducibili.
Diverse forme di labirinto vengono utilizzate per testare le prestazioni di navigazione spaziale e i fenotipi comportamentali. Tradizionalmente, ogni esperimento richiede una forma di labirinto unica, richiedendo quindi diversi labirinti separati in diverse configurazioni. La geometria del labirinto non può essere riconfigurata in un singolo ambiente per adattarsi alla scalabilità e alla riproducibilità. Il labirinto riconfigurabile è un approccio unico per affrontare le limitazioni, consentendo configurazioni rapide e flessibili dei percorsi del labirinto in modo ripetibile. Consiste in percorsi ad incastro e include alimentatori, tapis roulant, pareti mobili e sensori di intercettazione. Il protocollo corrente descrive come il labirinto riconfigurabile può replicare i labirinti esistenti, inclusi i labirinti a forma di T, a forma di più, a forma di W e a forma di otto. Inizialmente, il labirinto a forma di T è stato costruito all’interno di un’unica stanza sperimentale, seguita da modifiche. Il protocollo rapido e scalabile qui delineato dimostra la flessibilità del labirinto riconfigurabile, ottenuta attraverso l’aggiunta di componenti e fasi di addestramento comportamentale in modo graduale. Il labirinto riconfigurabile valuta sistematicamente e con precisione le prestazioni di molteplici aspetti del comportamento di navigazione spaziale.
La navigazione spaziale è una capacità fondamentale di un animale di identificare un percorso adatto a un obiettivo mirato. Vari processi cognitivi, come il processo decisionale, l’apprendimento e la memoria, sono necessari durante la navigazione. L’utilizzo di questi processi consente l’apprendimento esperienziale quando si determina il percorso più breve per raggiungere un obiettivo. I test del labirinto sono utilizzati per studiare i meccanismi comportamentali e fisiologici della navigazione spaziale1. Ad esempio, il labirinto a forma di T2,3, il labirinto a forma di più4, il labirinto a braccio radiale 5,6 e il labirinto a otto figure7 valutano il comportamento di navigazione spaziale, comprese le variabili cognitive come il processo decisionale8 e l’ansia9.
Ogni forma di labirinto presenta vantaggi e svantaggi, richiedendo esperimenti sfaccettati utilizzando più attività di labirinto per valutare l’apprendimento e la memoria specifici10,11. Ad esempio, il compito di alternanza spontanea, in cui un animale seleziona tra il braccio sinistro e destro senza richiedere l’apprendimento, è un tipico compito di memoria di lavoro spaziale che può essere valutato con i labirinti a forma di T e a forma di Y12. I labirinti del braccio a forma di più e radiali, che utilizzano la direzione della testa e segnali esterni, vengono utilizzati per determinare la capacità di navigazione orientata all’obiettivo13. I labirinti a forma di T e a forma di T modificati, che separano i percorsi di selezione e ritorno, vengono utilizzati per valutare i compiti della memoria di lavoro spaziale analizzando la funzione di navigazione per traiettoria14,15.
Può essere difficile mantenere la coerenza tra i labirinti quando si utilizzano diversi labirinti in un esperimento. Si pensa che i roditori usino segnali visivi per la navigazione16,17,18; Le modalità olfattive19,20 e somatosensoriali 21 possono anche essere utilizzate per la cognizione spaziale e possono contribuire alla capacità di navigazione. Se una serie di esperimenti di labirinto sono condotti utilizzando spazi, layout, dimensioni e materiali diversi, queste variabili possono influenzare la strategia di navigazione dei roditori. Gli studi di navigazione spaziale richiedono il controllo più rigoroso possibile di queste variabili; Tuttavia, mantenere un apparato di labirinto standardizzato per varie forme o ricostruire il labirinto per ogni esperimento può essere costoso. Queste difficoltà impediscono un modo sistematico di condurre una serie di esperimenti all’interno dello stesso laboratorio.
Per combattere le limitazioni configurate in strutture di labirinto precedentemente stabilite, un sistema di labirinto che può essere configurato in varie forme in un singolo ambiente fisico22 è descritto qui. Il “labirinto riconfigurabile” combina parti standardizzate, fornendo un ambiente di test altamente ripetibile, riproducibile, flessibile e scalabile. Questo articolo descrive la capacità di un labirinto riconfigurabile di valutare la navigazione spaziale nei roditori.
Il labirinto riconfigurabile ci ha permesso di eseguire una varietà di attività di labirinto in un unico ambiente. Fori sul pavimento equidistanziati e un sistema ad incastro coordinato da torri con piastre di base garantivano un elevato grado di ripetibilità e riproducibilità. Inoltre, la struttura potrebbe essere facilmente attaccata e staccata e la forma del labirinto desiderata potrebbe essere configurata istantaneamente, funzionando come un sistema efficiente, flessibile e scalabile.
Il labirinto riconfigurabile ha permesso agli animali di imparare rapidamente. Negli ambienti sperimentali convenzionali di labirinti, può essere difficile riconfigurare la lunghezza e la forma del percorso e condurre test che combinano più labirinti richiede molto tempo. Come dimostrato in questo studio, il labirinto riconfigurabile consente l’estensione del labirinto in modo graduale, in cui l’addestramento post-modifica di test comportamentali complessi viene condotto in modo efficiente in un solo giorno (Figura 6A,B). Inoltre, è facile per lo sperimentatore apportare modifiche. In questo studio, il tempo di assemblaggio del labirinto è stato misurato in più prove e gli sperimentatori hanno completato costantemente le ricostruzioni in circa 1 o 2 minuti (Figura 6A).
Uno dei principali vantaggi di questo sistema di labirinto è che consente di mettere a punto la forma del labirinto. Poiché il pavimento è pieno di fori per punzonatori, è possibile eseguire esperimenti di labirinto flessibili che sarebbero difficili da ottenere con i sistemi di labirinto convenzionali. Nel compito di alternanza ritardata eseguito in questo studio, i ratti hanno iniziato il ritardo e sono usciti dall’area di ritardo colpendo (Figura 5A). Posizionare due alimentatori nelle vicinanze, come abbiamo fatto qui, è difficile in un sistema di labirinto convenzionale con una geometria fissa. Inoltre, questo sistema di labirinto consente modifiche controbilanciate; ad esempio, la posizione dell’alimentatore B può essere facilmente sostituita sul lato opposto (Figura 5A). Questo vantaggio consente anche la replica delle configurazioni dei labirinti tra i laboratori. Diversi labirinti sono usati per il compito di alternanza ritardata, tra cui il labirinto a otto figure, il labirinto Y e il labirinto W26,29,30. Anche la zona di ricompensa, l’area di ritardo e il metodo di ritardo differiscono da studio a studio23,31. Con il labirinto riconfigurabile, tutti questi diversi labirinti possono essere creati in un unico ambiente fisico e riprodotti in diversi laboratori. Se questo sistema si diffonde, potrebbe portare alla standardizzazione delle attività di labirinto tra i laboratori.
Il labirinto riconfigurabile supporta registrazioni elettrofisiologiche multiunità, che esaminano i correlati neurali che supportano la navigazione spaziale22. Nella formazione dell’ippocampo, che è considerata svolgere un ruolo essenziale nella navigazione spaziale, sono stati segnalati diversi tipi di cellule per codificare informazioni spaziali, come le cellule che si attivano quando passano una posizione specifica32 o quando si avvicinano al confine dell’ambiente esterno33. Questi tipi di cellule cambiano la loro attività di accensione in base alle alterazioni in punti di riferimento distanti16,17,18. Questo sistema è ideale per registrare l’attività neurale durante gli esperimenti di navigazione spaziale perché il labirinto riconfigurabile può cambiare solo la forma del labirinto mantenendo lo stesso ambiente. Il labirinto riconfigurabile mantiene un rigoroso controllo dell’ambiente esterno, una specifica pertinente alla sperimentazione dell’attività neurale.
Il labirinto riconfigurabile fornisce un ambiente ottimale per gli esperimenti sui labirinto, con alcune avvertenze. In primo luogo, il labirinto viene costruito inserendo parti in fori in un pannello di perforazione, in modo che gli angoli non possano essere modificati in modo flessibile. Il labirinto circolare (Figura 4E) supera questo problema in una certa misura, ma ci sono limitazioni nell’aggiungere curve e angoli al percorso garantendo al contempo la stabilità del labirinto. Inoltre, alcuni labirinti classici, come il labirinto d’acqua Morris 34 e il labirinto di Barnes 35, e labirinti sviluppati negli ultimi anni come il labirinto a nido d’ape36,37, sono difficili da costruire combinando parti dei labirinti riconfigurabili. Gli sforzi futuri dovrebbero concentrarsi sull’esplorazione di metodologie per fondere questi tipi di labirinto con il labirinto riconfigurabile per aumentare l’adattabilità e coprire più sperimentazione cognitiva.
The authors have nothing to disclose.
Questo lavoro è stato sostenuto dalla Società giapponese per la promozione della scienza, Kakenhi concede 16H06543 e 21H05296 a S.T.
3D printer | Stratasys Ltd. | uPrint | |
Arduino Mega 2560 R3 | Elegoo | JP-EL-CB-002 | |
Camera | Basler | acA640-750uc | |
Control box | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FMM-IF | |
DeepLabCut | Mathis laboratory at Swiss Federal Institute of Technology in Lausanne | N/A | |
Feeder unit | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FM-PD | |
Free maze system for mice | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FM-M1 | |
Free maze system for rats | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FM-R1 | |
Long-Evans Rat | Shimizu Laboratory Supplies, Co. LTD. | N/A | |
MATLAB | MathWorks | Matlab2020b | |
Movable wall for mice | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FMM-DM | |
Movable wall for rats | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FMR-DM | |
Pathway and tower for mice | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FMM-SS | |
Pathway and tower for rats | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FMR-SS | |
Pellet dispenser | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | PD-020D/PD-010D | |
Photo beam sensors unit for rats | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FMR-PS | |
Punching board for mice | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FMM-ST | |
Punching board for rats | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FMR-ST | |
Treadmill for rats | O’Hara & Co., LTD. / Amuza Inc. | FMR-TM |