Los inicios de los ensayos de placa viral se remontan a los primeros descubrimientos de virus en la década de 18901. El virus del mosaico del tabaco se aisló por primera vez y se transmitió a las hojas de tabaco, donde las manchas individuales de infección pudieron reconocerse y cuantificarse como originarias de una sola entidad de virus ^viva2, más tarde identificada como un ^virión2. Estudios seminales posteriores con bacterias y bacteriófagos perfeccionaron las técnicas utilizadas para placar estos virus, incluidas las bacterias en la fase media del crecimiento, la dilución en serie de muestras de bacteriófagos y el agar superior con la posterior visualización de agujeros literales (llamadas placas) en el césped ^bacteriano3.

La detección de virus animales retrasó la emocionante investigación que se estaba llevando a cabo con bacteriófagos, principalmente porque los métodos requeridos para cultivar células de mamíferos en cultivo no se desarrollaron hasta la década de ¹⁹⁴⁰⁴. Sin embargo, el advenimiento del crecimiento de células murinas en ausencia de todo el organismo ^huésped4 generó una nueva era en la capacidad de cultivar y contar virus. Dicho trabajo se amplió para la propagación y cuantificación del virus de la encefalomielitis equina occidental en células de pollo y poliovirus en células ^humanas5,6. A medida que el reino de las células de mamíferos cultivables se expandió, el grupo de diferentes células huésped para diversas infecciones virales le dio al mundo una cornucopia de posibilidades para estudiar todo tipo de ^virus7. Esto incluyó la propagación y cuantificación de herpesvirus humanos, particularmente virus del herpes simple-1 (HSV-1) y -2 (HSV-2), que causan lesiones mucocutáneas8. Es importante destacar que todos los ensayos de placa dependen de la existencia de viriones vivos, que pueden ingresar a las células huésped de manera mediada por receptores en una ^muestra9. Independientemente de la ubicuidad y la multitud de publicaciones sobre la ejecución de ensayos de placa5,10,11,12,13,14,15,16, estos métodos para HSV-1/-2 son una mezcla de arte y ciencia; no se puede llevar a cabo el ensayo sin la debida atención a cada detalle en el protocolo, ni se puede ejecutar un ensayo exitoso sin un ojo crticial para la sutileza en el proceso. Este manuscrito describe uno de los métodos reproducibles más consistentemente para los ensayos de placa HSV-1/-2, con detalles precisos hacia el arte del ensayo que rara vez se discuten.

Este protocolo actual obtiene recuentos de unidades formadoras de placa viva (PFU) para HSV-1 y -2 de manera confiable. Los mejores resultados se obtienen utilizando células Vero (células epiteliales de riñón de mono verde africano transformadas) a paso bajo (por debajo del número de paso 155) y cultivadas rutinariamente en alfa-MEM17 suplementadas con 10% de suero fetal de ternero (FCS), L-alanil-L-glutamina y una mezcla antibiótica/antimicótica18. Las células Vero se propagan estándarmente en este medio dos o tres veces por semana a una dilución de ¹/₅ cada vez.