Bu protokol, dışkı pelet üretimini ölçerek odun sıkıcı kabuklu Limnoria’nın beslenme oranını değerlendirmek için bir yöntem sunar. Bu yöntem uzman olmayan laboratuvarlarda kullanılmak üzere tasarlanmıştır ve deniz koşullarında gelişmiş ahşap dayanıklılığını değerlendirmek için standart test protokollerine dahil olma potansiyeline sahiptir.
Odun sıkıcı omurgasızlar, deniz kerestelerini ve ahşap kıyı altyapısını hızla yok ederek her yıl dünya çapında milyarlarca dolarlık hasara neden oluyor. Creosote ve kromlu bakır arsenat (CCA) gibi geniş spektrumlu biyositlere sahip ahşabın tedavileri artık mevzuat tarafından deniz kullanımında kısıtlandığı için, doğal olarak dayanıklı kereste türleri ve ahşabın yeni koruma yöntemleri gereklidir. Bu yöntemler, ahşap koruyucuların deniz borerlerine karşı test etmek için Avrupa standardı olan EN 275 gibi düzenleyici standartları karşılamak için testlerden geçer. Dayanıklı kereste türlerinin veya ahşap koruyucu tedavilerin ilk araştırması, tipik olarak maliyetli, uzun vadeli çabalar olan deniz sahası denemelerine göre birçok avantaj sunan laboratuvar testleri ile hızlı ve ucuz bir şekilde elde edilebilir. Birçok Limnoria türü (gribble) deniz odunu sıkıcı kabuklulardır. Limnoria , deniz odun borerleri tarafından ahşabın biyobozunurluğunun laboratuvar testlerinde, kovalarda yetiştirilmesinin pratikliği ve odundaki beslenme oranlarını ölçme kolaylığı nedeniyle kullanım için idealdir. Burada, kumlama kullanarak ahşap biyobozunurluğunu değerlendirmek için standart bir laboratuvar testi özetliyoruz.
Ahşap borerler deniz savunması, iskeleler ve su ürünleri yapıları gibi deniz ahşap yapılarına büyük zarar verebilir; dünya çapında yılda milyarlarca dolara mal olan değiştirme veya restorasyon1,2,3. Bu yapıları korumak için, kereste genellikle biyobozunurluğunu azaltmak için tedavi edilir. Bununla birlikte, Avustralya, AB, İngiltere ve ABD’de geniş spektrumlu biyositlerin deniz ortamında kullanımının kısıtlanması nedeniyle, borerlere doğal olarak dayanıklı olan yeni modifikasyon teknikleri ve ahşap türleri 4,5,6,7’den sonra aranmaktadır. Deniz ortamında ahşabın korunmasına yönelik yeni teknikler, düzenleyici standartları karşılamak ve herhangi bir kimyasal koruyucunun sızması gibi tehlikelerden kaynaklanan çevresel etkileri sınırlamak için kapsamlı testler gerektirir. Örneğin, 1992’den kalma mevcut Avrupa standardı olan EN 275, deniz odun-borer hasarına karşı ahşap koruma tedavilerini değerlendirmek için kullanılır8,9. Bu standart, CCA4,5,6,7 ve creosote10 gibi biyosidal bileşiklerin kullanımına karşı diğer mevzuatlarla birlikte, sürdürülebilir, toksik olmayan ahşap koruma yöntemlerini ve biyosidal tedavilerin yerini almak için doğal olarak dayanıklı kereste türlerinin kullanılmasını gerektirir11,12 . EN 275’te belirtilenler gibi deniz denemeleri uzun pozlama süreleri gerektirir ve bu nedenle anlamlı sonuçlar vermek için pahalı ve yavaştır. Bununla birlikte, laboratuvar testleri, kereste ürünlerini deniz odun-borer saldırısına karşı koruma test yöntemlerine çok daha hızlı bir alternatif sunarak, tedavi programlarındaki ayarlamaların hızlı bir şekilde değerlendirilmesini sağlar13. Bu hızlı laboratuvar deneyinden elde edilen sonuçlar, ahşabın yeni modifikasyon süreçlerini bilgilendirmek ve doğal dayanıklılığı olan kereste türlerini borer hasarına belirlemek için tasarlanmıştır. Düşük bir beslenme oranı ve canlılık, potansiyel ürünlerde direncin arttığını gösterebilir ve bu bilgiler daha sonra tasarımları geliştirmelerine izin vermek için endüstri ortaklarına geri beslenebilir. Yöntemimiz, endüstride istenen çevik ve hızlı bir yanıt sağlar ve umut verici ürünler belirlendikten sonra, sonuçlar deniz denemelerinden elde edilenlerle desteklenebilir.
Gribbles (Limnoria), Limnoriidae familyasında bulunan bir izopod kabuklu cinsidir. İngiltere’de Limnoria lignorum, Limnoria tripunctata ve Limnoria quadripunctata16 olmak üzere üç yaygın tür bulunan dünya çapında 13.14.15 Limnoria türü vardır. Deniz suyuna batırılmış ahşap yüzeyinde tüneller açtılar ve genellikle ekonomik olarak önemli hasara neden oldular. Gribbles kıyı İngiltere sularında oldukça boldur ve laboratuvar koşullarında bakımı kolaydır, bu da onları deniz odunu sıkıcı omurgasızlar tarafından ahşap biyobozunurluğunun incelenmesi için ideal organizmalar haline getirir. Gribbles’ın beslenme oranlarını ve canlılığını farklı kereste türleri ve ahşap koruma yöntemleri üzerinde değerlendirmek, biyobozunurluğa karşı dirençlerinin etkinliğini belirleyebilir. Aşağıdaki protokol, Borges ve meslektaşları tarafından açıklanandan geliştirilen gribble besleme oranlarını ölçmek için standart bir yöntem belirlemeye başlar12,17, ayrıca süreci uzman olmayan laboratuvarlarda çalıştırılamaz hale getirmek için görüntü analizinin başlatılmasını kolaylaştırır. Görüntü analizi, çok sayıda numunenin manuel olarak sayılmasının pratik sınırlamalarını azaltmak için de kullanılır. İngiliz EN350-1:1994 standardına göre uzun süreli deniz testlerinde dayanıklılık, Pinus sylvestris sapwood18’e atıfta bulunularak derecelendirilmektedir. Burada sunulan kısa süreli laboratuvar testinde, ekki (Lophira alata Banks ex C.F Gaertn), kayın (Fagus sylvatica L), tatlı kestane (Castanea sativa Mill) ve terebentin (Syncarpia glomulifera (Sm.) Nied) türlerinin kalp odunlarını test etmek için kontrol olarak İskoç çamı (Pinus sylvestris L) sapwood’u kullanıyoruz. Ortalama faekal pelet üretimi ve ahşap türleri başına sekiz kopya arasında canlılık dayanıklılığın bir göstergesi olarak kullanılmıştır. Limnoria quadripunctata gribble türleri ve doğal olarak dayanıklı kereste türleri kullanarak tipik bir değerlendirmeden toplanan açıklayıcı veriler sunuyoruz. Menzies (1951) tarafından sağlanan anahtarlar tarafından tanımlanan Limnoria quadripunctata, ailenin en iyi çalışılmış üyesi olması ve biyobozunurluk denemelerinde kullanılmak üzere bir model tür olarak iyi kurulmuş olması nedeniyle biyobozunurluk denemeleri için en uygun tür olarak seçildi. Bu protokol, kullanılan kontrolün aynı türün tedavi edilmemiş replikasyonları olması gerektiği halde, farklı tedavilerin ormanlarını test etmek için de geçerlidir.
Beslenme deneyinde kullanılacak gribble örneklerini seçmeden önce, bireyler uygunluklarını değerlendirmek için taranmalıdır. Boyut farklılıkları nedeniyle bireyler arasında beslenme oranında bazı farklılıklar olabilir, bu nedenle sadece tamamen yetişkin örnekler seçilmelidir. Borges ve ark., 200917 yılları arasında bireylerin beslenme oranı arasında 1,5 mm ile 3 mm uzunluğunda anlamlı bir fark saptanmıştır. Dişi Limnoria yumurtalarını kuluçkaya yakar, b…
The authors have nothing to disclose.
Norveç Araştırma Konseyi’ne (Oslo Bölge Fonu, Alcofur rffofjor 269707) ve Portsmouth Üniversitesi’ne (Fen Fakültesi Doktora araştırma bursları) Lucy Martin’in çalışmaları için fon sağladıkları için teşekkür ederiz. Ayrıca, temsili sonuçları elde etmek için kullanılan ahşabı sağlayan Gervais S. Sawyer’a. Terebentin British Columbia Üniversitesi’nden Prof. Philip Evans tarafından sağlanmıştır.
12-well cell culture plates | ThermoFisher Scientific | 150200 | |
50ml Falcon tubes | Fisher Scientific | 14-432-22 | |
Adjustable volume pipette | Fisher Scientific | FBE10000 | 1-10 ml |
Beech | G. Sawyer (consultant in timber technology) | Fagus sylvatica | Taxonomic authority: L |
Ekki | G. Sawyer (consultant in timber technology) | Lophira alata | Taxonomic authority: Banks ex C. F. Gaertn. |
Forceps | Fisher Scientific | 10098140 | |
Incubator | LMS LTD | INC5009 | |
Microporous specimen capsules | Electron Microscopy Sciences | 70187-20 | |
Petri dish | Fisher Scientific | FB0875713 | |
Scots Pine | G. Sawyer (consultant in timber technology) | Pinus sylvestris | Taxonomic authority: L. |
Size 00000 paintbrush | Hobby Craft | 5674331001 | Size 000 or 0000 also acceptable |
Sweet Chestnut | G. Sawyer (consultant in timber technology) | Castanea sativa | Taxonomic authority: Mill |
Turpentine | P. Evans (Professor, Dept. Wood Science, University of British Columbia) | Syncarpia glomulifera | Taxonomic authority: (Sm.) Nied. |
Vacuum desiccator | Fisher Scientific | 15544635 |