小鸡西里神经神经元的分离与培养

Ciliary结节（CG）神经元属于寄生神经系统。这些神经元是胆碱，能够建立肌肉或烟酸突触^{1，2，3。,31,}从解剖学上讲，CG位于视神经（ON）和胆虫肌瘤（CF）之间的眼后部，由大约6000个处于早期胚胎阶段^{1、4,的神经元组成}。在培养的第一周，硅突神经元呈现多极形态。一周后，他们开始过渡到单极状态，一个神经石延伸并形成轴^孔5。此外，大约一半的CG神经元死亡之间的8^天至14^日小鸡胚胎发育，通过细胞死亡的编程过程。神经元数量的减少导致大约3000个神经元6，7，8^6,的西里^{结子的总种群}。在体外，当生长与肌肉细胞⁹和CG神经元可以培养几个星期1，9时^，CG神经元^{的数量没有减少}。

胆结由同性细胞神经元和胆状神经元的均匀种群组成，每个细胞群代表CG中神经元群的一半，内维眼睛的肌肉。这两种类型的神经元在结构上、解剖学和功能上是截然不同的。虹膜和透镜上的心肌神经元内侧，负责瞳孔收缩。胆道神经元内侧^,增强胆道1、10、11、12^{1,10,11的平滑肌}。

鸡骨结神经元的培养已被证明是研究神经肌肉突触和突触形成^{1，5，95的有用工具}。¹考虑到神经肌肉突触是胆碱^13，使用神经群是胆碱性-CG神经元-出现作为一个潜在的替代以前的细胞模型^14。这些模型包括异源神经元群体，其中只有一小部分是胆碱性。或者，在体外发育得相对较快，大约15小时后已经形成突触^1。CG神经元多年来一直被用作模型系统，用于不同的研究，因为它相对容易分离和操作。这些应用包括光遗传学研究，突触发育，凋亡和神经肌肉相互作用^{14，15。14,}

我们描述了从胚胎第7天（E7）小鸡胚胎中解剖、分离和体外培养的一个详细程序。我们提供一个分步协议，以获得高度纯净和稳定的细胞培养的胆碱神经元。我们还强调了需要特别注意并改善神经元培养质量的协议的关键步骤。这些培养物可以在体外保持至少15天。