Introduzimos uma abordagem interna do tubo da técnica de manguito para transplante de coração heterotópico cervical do rato para ajudar a everter o vaso sobre a braçadeira. Descobrimos que a cooperação entre dois cirurgiões experientes diminui significativamente o tempo de operação.
O transplante cardíaco de Murine é realizado há mais de 40 anos. Com os avanços na microcirurgia, algumas novas técnicas têm sido usadas para melhorar a eficiência cirúrgica. Em nosso laboratório, otimizamos a técnica da braçadeira com dois passos principais. Primeiro, utilizamos a técnica do tubo interno para inserir um tubo interno temporário na veia jugular externa e no vaso sanguíneo da artéria carótida para facilitar a eversão do vaso sobre a braçadeira. Em segundo lugar, realizamos transplante cardíaco heterotópico completo através da colaboração de dois cirurgiões experientes. Essas modificações efetivamente reduziram o tempo de operação para 25 minutos, com uma taxa de sucesso de 95%. Neste relatório, descrevemos esses procedimentos em detalhes e fornecemos um vídeo suplementar. Acreditamos que este relatório sobre a técnica aprimorada da braçadeira oferecerá orientação prática para transplante de coração heterotópico murine e aumentará a utilidade deste modelo de camundongos para pesquisa básica.
O estabelecimento de transplante de coração heterotópico de camundongos por meio de anastomose de ponta a ponta no abdômen em 1973 foi um marco importante na pesquisa básica de imunologia de transplante1. Este modelo forneceu uma ferramenta importante e válida para a análise dos mecanismos de isquemia de reperfusãolesão 2,rejeição imunológica e tolerância3,4. No entanto, a natureza complexa e demorada da cirurgia, bem como o potencial de infecções podem resultar em aderências abdominais perioperatórias graves e reações inflamatórias, resultando em baixa eficiência para o modelo heterotópico de transplante cardíaco.
A técnica de transplante de coração heterotópico cervical foi descrita pela primeira vez por Chen em 19915. Neste modelo, a veia jugular externa do receptor é anastomosada à artéria pulmonar do enxerto e a artéria carótida é anastomosada à aorta ascendente. As principais vantagens desse método são a conveniência de monitorar e reduzir o trauma ao receptor. No mesmo ano, Matsuura descreveu uma técnica melhorada, na qual a extremidade da veia jugular externa e da artéria carótida foram sempre sempre realizadas sobre um manguito de Teflon e fixadas com uma ligadura de seda circunferencial6. Alguns pesquisadores também fixaram a braçadeira na artéria pulmonar direita no coração doador antes de inserir o manguito na veia jugular externa do receptor7. Até agora, a técnica da braçadeira tem sido amplamente aplicada em vários modelos de transplante de pediculo vascular, incluindo os do pulmão8, fígado9e transplante renal10.
Até o momento, existem várias dificuldades associadas à técnica da braçadeira. Por exemplo, a artéria carótida é difícil de eterncar sobre a braçadeira devido à elasticidade adicional, resultando na inversão do tecido. Assim, uma prática adicional e um dilador microcirúrgico podem ser necessários para completar esta etapa. Além disso, a preparação do vaso cervical pode levar até 25 minutos.
Para resolver esses problemas, introduzimos a técnica do tubo interno, que é baseada na técnica da braçadeira e inclui a fixação da braçadeira na veia jugular externa e na artéria carótida usando um tubo interno para ajudar na eversão da parede do vaso. Além disso, com treinamento simples, a preparação do receptor é reduzida para 15,5 minutos. Esta técnica reduz a complexidade da operação e não requer prática adicional ou o uso de um dilatador vascular. Pode ser aplicado em todas as pesquisas imunológicas de transplante, especialmente para verificar a tolerância imune de terceiros durante a qual o receptor recebe dois arófilos cardíacos, um dentro do abdômen e outro no pescoço11. Também recomendamos a cooperação entre dois cirurgiões qualificados para estabelecer esse modelo, com um cirurgião preparando o animal receptor e o outro colhendo e implantando o coração doador. Tal colaboração pode reduzir o tempo de operação para 25 minutos. Utilizando este procedimento otimizado, estabelecemos modelos de transplante de coração de camundongos síngênicos, aogênicos12,,13,,14,,15,,16,,17,,18,,19e xenogênicos de transplante de coração decamundongos 20.
A justificativa para o desenvolvimento da técnica do tubo interno foi reduzir o tempo de operação para o estabelecimento de um modelo de transplante de coração de camundongos com alta taxa de sucesso. A otimização do modelo de transplante cardíaco cervical facilita a aquisição de altas taxas de sucesso em um curto período de tempo de cirurgia em comparação com a técnica tradicional de sutura e manguito21. Além disso, o modelo de cooperação pode reduzir ainda mais o tempo isquêmico quente do coração doador em comparação com as cirurgias realizadas com um único operador.
Modelos de transplante de coração de rato são ferramentas importantes para a pesquisa em imunologia de transplante, pois ferramentas e materiais para avaliar os mecanismos imunológicos deste modelo e um grande número de camundongos modificados por genes estão disponíveis. No entanto, desafios técnicos microcirúrgicos, como sutura e eversão de vasos, limitaram seu uso generalizado. No presente estudo, investigamos certos desafios técnicos fundamentais do transplante de coração murino e obtivemos bons resultad…
The authors have nothing to disclose.
Este trabalho foi apoiado pelo Fujian Provincial Health Education Joint Research Project (WKJ2016-2-20), a National Natural Science Foundation of China (81771271 e 81800664), o Programa Nacional de P&D da China (2018YFA0108304) e o Projeto de Educação e Pesquisa Científica para Professores Jovens e De Meia Idade na Província de Fujian (JAT170714), Fundação de Ciências Naturais da Província de Hunan da China (2019JJ50842) e Huxiang Jovens Talentos da Província de Hunan (2019RS2013).
Artery cuff | Self-made | Polyamide tube. diameter: 0.55 mm,length: 1.0 mm | |
Artery inner tube | Self-made | Polyamide tube. Diameter: 0.28mm | |
Micro curved forceps | Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory | WA3050 | 1/8 arc, 0.3-mm tip without a hook |
Micro needle holders | Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory | WA2050 | 0.2-mm tip |
Micro scissors | Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory | WA1050 | Straight, blade length: 10 mm |
Micro straight forceps | Shanghai Medical Instruments (Group) Ltd., Corp. Surgical Instruments Factory | WA3060 | 0.15-mm tip without a hook |
Scanlan Vascu-Statt Bulldog Clamps | Scanlan International Inc | 1001-531 | Clamping pressure 20–25 grams |
Vein cuff | Self-made | Polyamide tube. diameter: 0.9 mm,length: 1.2 mm | |
Vein inner tube | Self-made | Polyamide tube. Diameter: 0.6 mm |