자궁에서 두 배의 자궁 전기화는 시간적으로 그리고 공간적으로 분리된 세포 인구를 표적으로 합니다

대뇌 피질은 매우 복잡하고 복잡하게 구성된 구조입니다. 이러한 정도의 조직을 달성하기 위해, 피질 프로젝션 뉴런은 측두생성을 필요로 하는 복잡한 발달 과정을 거치며, 피질 판의 최종 목적지로의 마이그레이션, 단거리 및 장거리 연결^1,,2의확립을 통해 진행된다. 오랜 시간 동안, 코르티코 발생을 연구하는 고전적인 방법은 관심의 유전자의 녹아웃 또는 노크 에 뮤린 모델의 사용에 기초했다. 그러나, 이 전략, 특히 조건부 녹아웃 마우스의 사용은 시간이 많이 걸리고 비용이 많이 들며, 때로는 유전 적 중복의 존재 또는 특정 CRE 드라이버의 부족에 관한 추가 문제를 제시합니다. 이러한 문제를 해결하기 위해 발생 하는 접근 중 하나는 그 피 질 개발을 연구 하기 위해 요즘 광범위 하 게 사용 된다^3,,4. 자궁 에서 전기 화는 신경 줄기 세포와 그들의 자손의 생체 표적을 허용, 체세포 전염에 사용되는 기술이다. 본 방법은 형광 단백질^{55, 6,6}생체 내 유전자 조작을 위해 세포를 라벨링하는 데 사용할 수 있다 (즉, 기능 분석의 이득 또는 손실)^7,,8,,9,시험관 내의 전기 폴화 코르티스를 분리하고 세포^8,,10을배양하는 데 사용할 수 있다. 더욱이, 자궁 전기기화는 표적 영역의 시간적 및 지역 적 제어를 허용한다. 이 기술은 수많은 응용 프로그램을 가지고 널리 뉴런 마이그레이션을 연구하는 데 사용되어왔다, 줄기 세포 분열, 신경 연결, 및 기타 과목^{8,,9,,11,,12.}

현재 원고는 자궁 전기 기형에서 이중이라고 불리는 자궁 전기 기형의 사용을 설명하며, 대뇌 피질에서 세포의 상호 작용을 서로 다른 측두및 공간 기원으로 분석합니다. 이러한 연구는 여러 형질 전환선의 결합 된 사용을 필요로하기 때문에 뮤린 모델을 사용할 때 완료하는 것은 매우 복잡합니다. 이 논문에 설명된 프로토콜의 응용 프로그램 중 일부는 이웃 세포 간의 긴밀한 상호 작용의 연구뿐만 아니라 장거리 투영을 통해 먼 세포 사이의 상호 작용을 포함한다. 이 방법은 관심의 다른 세포 집단을 표적으로 하기 위하여 동일한 배아에, 측면및 공간적으로 분리된 자궁 전기기 수술에서 2개의 독립적인 능력을 발휘하는 것을 요구합니다. 이 접근법의 장점은 야생 형 동물을 사용하여 뉴런의 하나 또는 둘 다 모형에서 유전자 기능을 조작의 가능성입니다. 또한, 이러한 기능적 실험은 심토플라스믹 또는 멤브레인 태그형 형광 단백질의 발현과 결합하여 물병막 및 축축을 포함한 표적 세포의 미세한 형태를 시각화하고, 대조군(즉, 형광 단백질로만 표지된 세포)과 비교하여 세포 상호 작용의 가능한 차이를 분석할 수 있다.

여기서 묘사된 프로토콜은 신피질 내부의 세포 상호 작용연구에 초점을 맞추고 있지만, 이 전략은 또한 소반^15와같은 다른 구조물에서 피판또는 시상^13,,14,또는 세포 세포 상호 작용과 같은 자궁 전기포레이션에서 표적화될 수 있는 외피 영역과의 상호 작용을 검사하는 데 사용될 수 있다. 다른 영역의 표적화는 전극의 방향과 DNA가 주입되는 심실 (측면, 세 번째 또는 네 번째)에 기초한다. 여기에 설명된 전략으로, 우리는 기능 실험에서 연결 / 내면의 일반적인 변화를 평가하는 데 유용한 셀의 상당수를 레이블수 있습니다. 그럼에도 불구하고, 연결의 미세한 변화를 연구하기 위해, 하나는 스파저 라벨링을 얻고 단일^{세포(16)를}식별하기 위해 자궁 전기화에서 수정된 버전을 사용할 수 있다. 요약하자면, 자궁 전기기의 이중은 일시적이고 공간적으로 분리된 세포 집단을 표적으로 하고 통제 조건에서 또는 기능 실험과 결합하여 현세및 경제적 비용을 상당히 줄이는 다목적 방법입니다.