バイタル顕微鏡によるゼブラフィッシュ胚におけるマイコバクテリア感染時のマクロファージ溶解細胞死の可視化

マイコバクテリア感染は、宿主免疫細胞死¹を引き起こすことが実証されている。例えば、減衰した株はマクロファージ中のアポトーシスを引き起こし、感染を含む。しかし、毒性株は、溶解細胞死を引き起こし、細菌の播種^を引き起こす^1、2.これらの異なるタイプの細胞死が宿主抗抗抗抗抗抗細菌応答に及ぼす影響を考慮すると、生体内でのマイコバクテリア感染時のマクロファージ細胞死の詳細な観察が必要である。

細胞死を測定する従来の方法は、Annnexin V、TUNEL、またはアクリジンオレンジ/ヨウ化プロピジウム染色^3、4、5などの死細胞染色を使用することです。しかし、これらの方法は、生体内での細胞死の動的過程に光を当てることができません。インビトロでの細胞死の観察は、すでに生イメージング⁶によって促進されている。しかしながら、結果が生理学的条件を正確に模倣するかどうかは不明のままである。

ゼブラフィッシュは、宿主抗抗抗抗抗抗抗菌応答を研究するための優れたモデルである。それは人間と同様に高度に保存された免疫系を有し、容易に操作されるゲノム、および初期胚は透明であり、生きたイメージング^{を可能にする7、8、9}を可能に^する。M.マリナムとの感染後、成人ゼブラフィッシュは典型的な成熟肉芽腫構造を形成し、胚性ゼブラフィッシュは構造^9、10のような早期肉芽腫を形成する。自然免疫細胞間細菌相互作用の動的過程は、ゼブラフィッシュM.マリナム感染モデル^11、12において以前に検討されている。しかし、空間的な時間分解能の要件が高いため、自然免疫細胞の死を取り巻く詳細はほとんど未定義のままである。

ここでは、生体内のマイコバクテリア感染によって引き起こされるマクロファージ溶解細胞死のプロセスを可視化する方法について説明する。このプロトコルはまた、発達および炎症の間に生体内の細胞行動を視覚化するために適用され得る。