Этот метод включает в себя использование клинических диагностических данных для больных раком простаты для того, чтобы направлять процедуры отбора проб, когда биобанковская ткань после радикальной простатэктомии. Это преодолевает проблемы с ранее опубликованными методами, касающимися эффективности и доступности свежих тканей для более широкого спектра приложений ниже по течению.
Предыдущие методы для биобанкинга ткани простаты, после радикальной простатэктомии, как правило, участвуют случайные выборки. В целях повышения эффективности и обеспечения более широкого спектра применения ниже по течению был разработан более целенаправленный метод отбора проб ткани простаты. Здесь мы используем как магнитно-резонансную томографию (МРТ), так и данные биопсии для таргетинга на конкретные области органа для отбора проб. Метод включает в себя использование ранее опубликованного устройства нарезки простаты, которое удаляет 5 мм поперечный ломтик из заданной области простаты, а затем удаление 6 мм бип-биопсии из заранее определенных областей этого ломтика. Эти образцы могут храниться замороженными или фиксированными для биобанкинговых целей, или использовать свежие сразу же с 70% уверенностью содержания опухоли, по сравнению с 10% уверенностью от случайного подхода выборки. Это позволяет использовать все стандартные методы вниз по течению, такие как геномика, протеомика или гистологическая работа, но и работа, которая требует свежих тканей, таких как изображения живой ткани или ex vivo культуры.
Доступ к высококачественной ткани рака простаты человека является ключевым требованием для проведения эффективных исследований в этой области. Есть ряд существующих методов для образца ткани простаты после радикальной простатэктомии для исследования. Как правило, они включают в себя использование пунша биопсии взять случайные образцы из свежих, замороженных или фиксированных ломтик ткани простаты, и ретроспективно подтверждающие или нет опухоль присутствует в каждом образце гематоксилин и эозин (H и E), как оценивается уропатолог1,2,3,4,5. Недавний обзор составил обзор этих существующих методов6. Эти методы полезны для некоторых приложений ниже по течению, где ткани могут храниться и оцениваться по содержанию опухоли на более поздний срок, такие как крупномасштабные геномные анализы, такие как Международный консорциум генома рака (ICGC) и Атлас генома рака (TCGA) 4,7. Тем не менее, эти методы могут быть улучшены, если мы должны были использовать магнитно-резонансную томографию (МРТ) и / или биопсии данных для целевых конкретных областях простаты для отбора проб. Это позволит улучшить методологию двумя способами; во-первых, за счет сокращения количества собранных образцов тканей, повышения эффективности и снижения нагрузки на патологические отделения и стоимость хранения, а во-вторых, путем немедленного использования свежей ткани без необходимости немедленного подтверждения содержание опухоли, для новых современных технологий вниз по течению, таких как живая обработка тканей, органоидное поколение или культура ex vivo. Эта потребность исследования привела к развитию PEOPLE (PatiEnt prOstate samPLes для rEsearch) метод, и результаты из первых 84 случаев биобанксированных с использованием PEOPLE были недавно опубликованы8. Вариант этого метода также был опубликован с трехмерным (3D) печатных нарезки аппарата и пациента конкретных плесени, для того, чтобы облегчить ex vivo МРТ на предварительной и пост-фиксации ткани9,10.
Критические шаги в рамках этого протокола включают идентификацию опухолевой области для отбора проб, измерения простаты и взятия проб тканей. Во-первых, ключевым моментом является измерение МРТ для определения правильной области выборки. Мы демонстрируем этот метод в сопроводительном видео; однако, мы также рекомендуем подтвердить измерения с радиологом в первую очередь. Четкие клинические заметки, которые указывают исследователя в области МРТ изображения, которые содержат индекс поражения являются идеальными. Во-вторых, измерение простаты должно проводиться с осторожностью, гарантируя, что линейка проводится под углом для измерения полной длины от основания до вершины, параллельно передней простаты. В-третьих, опухолевые участки должны быть подтверждены до отбора проб путем визуального осмотра фрагмента ткани по отношению к исходному изображению МРТ, пальпирования ткани (в некоторых случаях область опухоли может чувствовать себя более плотной), и визуально оценивая цвет ткани (в некоторых случаев опухоль будет выглядеть более бледной, чем окружающие доброкачественные ткани).
Этот протокол был выполнен в полном объеме в UCL/UCLH неклиническими постдокторскими исследователями, стипендиатом патологии, консультантами по патологии и техническими специалистами. По нашему опыту, все этапы протокола могут быть изучены в менее чем десяти случаях, независимо от технической подготовки. Тем не менее, мы рекомендуем обучение у радиолога относительно измерения МРТ и обучение у патологоанатома в отношении нарезки в первую очередь. Протокол может быть изменен с помощью 3D печатной нарезки ручки, как ранее опубликовано10.
Потенциальные ограничения методики включают риск покоя при постановке диагноза. Нарезка простаты является ключевым шагом, который может препятствовать на классификации или положительные ставки маржи, если сделано неправильно. Здесь есть две потенциальные проблемы. Во-первых, если все индексные повреждения удаляются и используются для экспериментов с свежей тканью немедленно, рутинная клиническая диагностика не будет проводиться для этого поражения и пациент может быть неправильно диагностирован как имеющий рак более низкого класса. Чтобы избежать этого, исследователь должен обсудить план отбора проб с консультантом патологоанатом, который будет регулярно рассматривать случай, до отбора проб, и согласовать количество и местоположение образцов, которые должны быть приняты. Небольшие опухоли могут быть исключены локально по этой причине. Во-вторых, если простатическая капсула не прижата вниз правильно пробки борту до фиксации, это может позволить внутренней ткани выпуклость наружу во время фиксации, изменяя хирургические поля. Это может привести к ложноположительной маржи, где остальные опухоли, как представляется, проживают в капсуле чисто из-за деформации тканей.
Значение этой техники по отношению к существующим методам заключается в основном в таргетинге опухолей. На сегодняшний день опубликован ряд методов отбора проб радикальных образцов простатэктомии; однако, все это зависит от полностью или частично случайного подхода выборки1,2,3,4,5,6,7. Использование биопсии и, в частности, данные МРТ здесь повысило эффективность, что позволило уменьшить выборку с повышенной достоверностью получения опухолевой ткани8.
Будущие применения этого метода позволяют применять более широкий спектр методов, расположенных ниже по течению, чем при предыдущих методах отбора проб. Например, наличие свежей ткани, которая имеет высокую вероятность быть опухолью означает, что более дорогие и / или трудоемких свежих тканей методы могут быть использованы, так как многие образцы не требуется для обеспечения присутствия опухоли. Это может включать в себя и не ограничивается, ex vivo культуры, ex vivo МРТ, передовые изображения и транскриптомики.
The authors have nothing to disclose.
Авторы хотели бы признать рака предстательной железы Великобритании для финансирования SH в рамках рака предстательной железы Великобритании Центр передового опыта и путешествия премии стипендий (TLD-PF16-004) и HP в соответствии с INNOVATE (PG14-018-TR2). Эта работа была поддержана исследователями из Национального института медицинских исследований Университетского колледжа Лондона Больницы Биомедицинский исследовательский центр.
6 mm biopsy punch | Fisher Scientific | 13404607 | Disposable biopsy punches for removing 6 mm tissue samples |
Black Ink | Leica Biosystems | 3801753 | Tissue marking & margin dye |
Blue Ink | Leica Biosystems | 3801751 | Tissue marking & margin dye |
Chainmail hand glove | Arco | 1456803 | Chainmail gloves to protect hand during slicing |
Cork board | Fisher Scientific | 12396447 | Cork board for pinning prostate to following sampling procedure |
Needles | SLS (Scientific Laboratory supplies) | SYR6112 | Sterile needles to use to pin tissue to cork board following sampling |
Prostate slicing aparatus | Insitute of Cancer Research, London | NA – must be obtained under MTA | A kit containing the slicer handle, blades, spacer, base, walls and pins |