마우스에서 동맥 경화증의 정량화

모든 동물 실험은 윤리 당국의 승인이 필요합니다. 1. 마우스 희생과 오르타의 미세 해부 CO2 질식에 의해 마우스를 희생하고 기록 무게. 시료의 모피 오염을 방지하기 위해 70 % 에탄올로 마우스를 스프레이하십시오. 마우스를 척추 위치에 놓습니다. 경질 노치에서 마요 가위를 사용하여 중간 선을 절개하여 음모 뼈까지 거의 연장하십시오.주의 사항: 높은 비율의 에탄올은 인화성이 높으며 심각한 눈 자극을 일으킬 수 있습니다. 예방 조치를 취하십시오. 23 G 바늘을 사용하여 흉부 벽을 통해 심장 천자에 의해 마우스를 exsanguinate합니다. 이 절차는 일반적으로 20 주 오래된 마우스에게서 혈액의 750 μL를 산출합니다. 전형적으로, 삼중 칼륨 EDTA 코팅 관에 부피의 반을 수집하고 나머지 절반은 혈청 또는 리튬 헤파린 코팅 튜브에 수집한다. 튜브를 부드럽게 돌리고 추가 가공이 될 때까지 실온에서 보관하십시오. 마요 네즈 가위를 사용하여 중간선의 정수리 복막을 잘라 복강을 엽니다. 조직 집게로 xiphoid 과정을 잡고 양쪽으로 측면으로 peritoneum을 열고 다이어프램을 열어 계속 합니다. 마요네즈 가위를 사용하여 흉곽을 가능한 한 측면으로 절단하여 흉부 구멍을 엽니다. 이것은 나중에 대인을 미세 하게 도금하는 동안 계측기의 광각을 가능하게 합니다. 관류 유체 배수를위한 오른쪽 귀리클에 절개를합니다. 두개골 방향으로 심장의 정점을 통해 27G 바늘을 삽입합니다. 최소 2분 동안 10 mL 의 얼음-차가운 인산완충식염수(PBS)로 마우스를 천천히 교전시키면서 좌심실에서 바늘을 고정시키고 창백해지는 간을 관찰합니다.참고: 몇몇 프로토콜은 파라포름알데히드 관류를 이용하지만, 이것은 림프구의 면역성 화학 분석과 같은 몇몇 다운스트림 응용을 방해합니다. 따라서, 파라포름알데히드와 관류 고정은이 프로토콜에서 수행되지 않습니다. 해부학 적 집게와 해부 가위를 사용하여 관심기관 (예 : 림프절, 비장, 간, 내장, 환각 지방 패드, 신장 등)을 해부하십시오. 대동맥 아치를 손상시키지 않고 심장 오른쪽에 기관과 식도를 잘라. 내장을 레트로페리톤에 부착하는 다이어프램과 구조물을 자르고 심장, 대동맥 및 신장을 그대로 둡습니다. 폐와 내장을 접어서 냅킨으로 덮어 파라 대동맥 림프절과 복부 대동맥의 복강 내분면을 시작합니다. 6배 배율로 입체 현미경으로 미세 해부를 시작합니다. Dumont 집게로 주변 조직을 들어 올리고 Vannas 가위로 장력 하에서 절단하여 대동맥 분기를 해부하기 시작합니다. 복부 대동맥을 두개골로 해부하십시오. 대동맥에서 복부 가지를 자르고 대동맥을 횡격막의 대동맥 틈새를 통해 근접하게 풀어냅니다.참고: 미세 해부는 스테레오 현미경을 통해 정확한 손과 눈의 협응을 필요로하며, 이를 마스터하는 데 약간의 연습이 필요합니다. 흉부 대반을 덮는 지방 조직을 제거하십시오. 신중하게 나뭇 가지대동맥 아치를 해제하기 위해 흉선 의 dorsally 해부. 흉강에서 경동맥을 가능한 한 비하적으로 해부하십시오. 특별한 경우에, 목 해부는 경동맥 분기를 포함하기 위하여 수행될 수 있었습니다. 실제로 대강물을 절단하기 전에 탈이온수, RNase 오염 제거 용액, 70 % 에탄올 및 PBS에서 연속 헹구어로 기기를 청소하십시오. 집게로 정점에 의해 마음을 들어 올립니다. 대인을 심장에 가깝게 자르고 전체 심장을 PBS가있는 튜브에 놓습니다. 심장은 대동맥 뿌리를 계속 처리하고 냉동 장착하기 전에 몇 시간 동안 얼음에 저장 될 수 있습니다. 그림 1A에따라 대동맥 아치를 잘라. 대동맥 아치를 4°C에서 밤새 4% 포름알데히드의 1 mL을 함유하는 튜브에 넣는다. 견본은 고정하고 분석하기 전에 몇 년 동안 이 방법으로 저장될 수 있었습니다.주의 사항: 포름알데히드는 암, 알레르기 성 피부 반응을 일으킬 수 있으며 삼키면 유해합니다. 필요에 따라 개인 보호 장비를 사용하십시오. 나머지 내림차순 대류를 해부하고 RNA 안정화 용액에 넣거나 후속 RNA 분석 또는 기타 응용 을 위해 동결스냅. 과도한 RNA 분해를 피하기 위해 해부 시간을 최소화하기 위해 작업 흐름을 최적화하는 것이 중요합니다. 혈액 채취 튜브(1.3단계에서 수집)를 원심분리기에 넣습니다. 별도의 플라즈마 와 혈청 튜브를 실온에서 15 분 동안 1,500 x g에서 회전시면 됩니다. 플라즈마와 혈청을 미세 원심 분리튜브로 조심스럽게 옮기고 -80°C에서 보관하십시오. EDTA 와 헤파린화된 플라즈마 또는 혈청을 모두 수집하면 여러 다운스트림 응용 분야에 대한 가능성이 남습니다. 심장을 코르크 침대에 놓고 복부 쪽을 위로 향합니다. 정점을 통해 바늘로 코르크에 마음을 고정합니다. 해부학 적 집게로 심장의 기초를 잡으하십시오. 메스를 사용하여 절단 방향이 시상면에서 20°로 기울어진 두 오리클 과 횡단 평면에서 20°의 두개골로 절단되는 방향으로 심장의 정점 2/3을 잘라냅니다(그림1B). 최적의 절삭 온도 (OCT) 화합물에 대동맥 뿌리를 포함, 이는 둘러싸고 있지만, 조직에 침투하지 않습니다. OCT 화합물에 심장의 기초를 담가. 부드럽게 OCT와 대동맥 뿌리를 채우고 기포를 제거하기 위해 집게로 마음을 짜내. 10월로 채워진 저금종의 바닥으로 시편을 옮김을 옮김. 대동맥 근은 이제 아래쪽 표면에 수직이어야 합니다. 마른 얼음에 장착 된 심장을 넣어 동결합니다. 이 프로토콜의 섹션 3에 따라 냉동 절편을 추구할 때까지 지퍼 잠금 백에 시편을 -80°C에 보관하십시오. 그림 1: 심장과 대동맥 아치의 경우. (a) 폐, 기관, 식도 및 흉선제거는 20주 령 암컷 아포에-/- 마우스를 현미경으로 일반 차우 다이어트에 대동맥 아치를 표시하기 위해, 스케일 바 = 2 mm. 점선은 대동맥 아치와 그 가지를 잘라낼 위치를 나타냅니다. (B) 심장과 대반의 개략적 묘사. 빨간색 점선은 대동맥 뿌리를 저온 설치하기 전에 심장을 잘라낼 위치를 나타냅니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 2. 대동맥 아치와 브라키오세팔릭 동맥의 얼굴 분석 대동맥 아치의 얼굴 분석을 위해 고정 침대를 준비합니다. 파라핀 왁스 필름 의 세그먼트를 8 번 접어 평평한 25mm x 25mm 표면을 만듭니다. 대반에 대한 어두운 배경을 만들기 위해 검은 색 전기 절연 테이프로 포장. 고정 침대 뒷면에 레이블을 놓고 리드 연필을 사용하여 마우스 식별 번호를 작성합니다(일반 펜 잉크는 염색 과정에서 사라집니다). 대동맥 아치를 고정 침대로 옮기고 그 위에 PBS 한 방울을 놓습니다. 스테레오 현미경의 밑에 남아있는 periadventitial 지방 조직에서 대동맥을 청소를 시작합니다. Vannas 가위와 Dumont 집게를 사용하여 대불을 조작하거나 손상시키지 않고 주변의 모든 지방 조직을 부드럽게 벗겨냅니다. 수단 IV는 지방 조직을 밝게 염색하고 이 시점에서 모든 조직을 제거하는 것이 중요합니다.참고: 필요할 때 추가 PBS를 적용하여 대불위를 항상 촉촉하게 유지하십시오. 대동맥 루멘에 Vannas 가위를 도입하여 관상 면에서 대동맥을 열어 친밀한 표면을 노출시다. 말단 방향으로 오름차순 아치의 외부 곡률을 절단하고 brachiocephalic 동맥을 포함하여 가지를 열어 계속 잘라 시작합니다. 내림차순 흉부 지역의 등도 부분을 절약하십시오. 작은 곡률을 열고 대장을 접어 친밀한 표면을 표시합니다.참고: 이 단계는 미세 한 모터 기술을 필요로하고 마스터하는 몇 가지 연습이 필요합니다. minutien 곤충 핀의 무딘 끝을 사용하여 열린 아치를 고정 침대에 고정합니다. 마이크로 카스트로비에호 바늘 홀더를 사용하여 핀을 제자리에 놓습니다. 제자리에 있을 때 핀을 시편에서 부드럽게 구부립니다. 표본을 스트레칭하지 않고 침대에 대강타를 평평하게 고정합니다. 4°C에서 PBS로 채워진 페트리 접시에 아래쪽을 향한 고정된 아치를 보관합니다.참고: 여기에서 프로토콜을 일시 중지할 수 있습니다. 수단 IV의 작업 솔루션을 준비합니다. 수단 IV 파우더 1 g, 70% 에탄올 100 mL, 아세톤 100 mL를 어두운 병에 넣고 10분간 부드럽게 저어줍니다. 용액을 필터링 할 필요가 없으며 실온에서 어둡게 유지하면 몇 달 동안 사용할 수 있습니다. 염색 색상이 만족스럽지 않으면 새로운 용액을 만들 수 있으며 시편이 다시 염색될 수 있습니다.주의 사항: 아세톤은 심각한 눈 자극을 일으킬 수 있는 인화성 액체입니다. 통풍이 잘 되는 곳에 보관하고 취급 시 예방 조치를 취하십시오. 실험실 벤치에 페트리 접시 5개를 준비합니다: 70% 에탄올로 채워진 요리, 수단 IV 작업 용액으로 채워진 요리, 80% 에탄올로 채워진 요리, PBS로 채워진 요리 1개. 첫 번째 페트리 접시에 고정 침대를 놓고 아치가 아래쪽을 향하여 70 % 에탄올로 시편을 헹구는 것으로 시작합니다. 검체를 수단 IV 작업 용액으로 옮기고 아치를 7 분 동안 얼룩지게하십시오. 다음으로, 80% 에탄올로 3분 간 2회 헹구어 정상적인 자궁 표면을 탈색시다. 결과를 최적화하기 위해 디스테인링 시간을 조정할 수 있습니다. 마지막으로, 표본을 원래의 페트리 접시에 다시 넣기 전에 PBS에서 헹구어 넣습니다. 디지털 카메라에 연결된 10배 배율로 입체 현미경을 사용하여 현미경을 수집합니다. 작은 금속 분동(20mm x 10mm x 5mm)을 사용하여 PBS에 잠긴 고정 된 아치의 사진을 찍어 페트리 접시의 바닥에 고정 침대를 고정합니다. 이미지 보정을 위해 대열권 옆에 눈금자를 놓습니다. 이미지 분석 소프트웨어(예: ImageJ)를 사용하여 병변 면적과 총 자궁 표면을 결정합니다. 대동맥 아치를 정의하는 해부학 적 랜드 마크가 부족한 경우, 측정은 일반적으로 오름차순 대동맥의 시작부터 첫번째 늑간 분기까지 수행됩니다 (그림 2A). 소프트웨어의 영역 정량화 기능을 사용하여 전체 암시적 아치 영역을 수동으로 둘러싸습니다.참고 : 병변 정량화는 맹목적인 방식으로 수행해야하며 두 번째 조사자가 결과를 확인하는 것이 좋습니다. ImageJ에서 다각형 선택 도구를 선택하고 반복클릭으로 전체 아치 영역을 둘러싸습니다. 그런 다음 분석 메뉴에서 측정값을 선택하여 결과 창에 총 아치 영역을 표시합니다. 다음으로, 아치에 있는 모든 수단 IV 스테인드 플라크를 둘러싸는다. 수단 IV는 오렌지-레드 컬러로 지질, 트리글리세라이드 및 지단백질을 염색하는 리소크롬 디아조 염료입니다. ImageJ에서 자유형 선택 도구를 선택하고 Alt 키를 누를 때 모든 플라크를 둘러싸습니다. 분석 메뉴에서 측정값을 클릭하여 결과 창에 병변이 없는 아치 영역을 표시합니다. 전체 아치 영역에서 병변없는 영역을 빼고 결과를 총 아치 영역으로 나누어 상대 병변 영역을 계산합니다. 쇄골 동맥과 경동맥을 조심스럽게 고정하여 brachiocephalic 동맥에서 병변 정량화를 가능하게합니다 (그림 2A). 쇄골 동맥 과 일반적인 경동맥에 있는 병변의 정량화는 일반적으로 아주 도전적이고 의미없는, 각각입니다. ImageJ에서 시프트 키를 누를 때 다각형 선택 도구를 사용하여 브라시오두팔릭 동맥의 두 조각을 둘러싸습니다. 분석 메뉴에서 측정값을 클릭하여 결과 창에 총 brachiocephalic 동맥 영역을 표시합니다. 다음으로, 자유형 선택 도구를 선택하고 Alt 키를 누른 상태에서 brachiocephalic 동맥에 있는 모든 플라크를 둘러싸는다. 분석 메뉴에서 측정값을 클릭하여 병변이 없는 브라치오세팔릭 동맥 영역을 결과 창에 표시합니다. 전체 brachiocephalic 동맥 영역에서 병변 없는 영역을 빼고 그 결과를 총 brachiocephalic 동맥 영역으로 나누어 상대 병변 영역을 계산합니다. 도 2: 죽상 경화성 병변 정량화. (A) 20주 령 남성 인간 APOB100-형질전환 Ldlr-/- (HuBL)마우스에서 대동맥 아치를 10주 동안 서양 식단에 고정하고 수단 IV로 지질이 풍부한 플라크를 위해 염색하였다. 총 대동맥 아치 표면적은 현미경, 스케일 바 = 2 mm에서 흰색의 점선으로 윤곽이 그려져 있습니다. 노란색의 점선은 brachiocephalic 동맥의 전체 표면적을 윤곽. (B) 대동맥 근 단면에서 대동맥 부비동으로부터 400 μm에서 20주 령 남성 Ldlr-/- 마우스는 현미경으로 시각화된 8주 동안 서양 식단을 공급하고, 스케일 바 = 500 μm을 가졌다. 검은 색의 점선은 총 혈관 영역과 동맥 친시에 국한 된 오일 레드 O로 염색 된 죽상 경화성 병변을 윤곽. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 3. 대동맥 근의 냉동 부속 저온 온도를 -20°C에서 설정하고 단면 두께를 10 μm로 설정합니다. 절단을 시작하는 동안 단면의 정렬을 시편 홀더와 평행하게 미세 조정합니다. 겹이 들지 않고 섹션을 쉽게 수집할 수 있도록 과도한 주변 OCT를 제거합니다. 이제 대동맥 근이 심장의 기저부가 금형에 올바르게 배치되었다는 점을 감안할 때 칼날과 수직으로 배치되어야 합니다. 폐기 될 일반 현미경 슬라이드에 초기 제어 섹션을 수집합니다. 첫 번째 섹션은 심장 근육 조직을 포함해야. 당시 200 μm까지 단면을 진행한다. 섹션을 수집하고 빛 현미경으로 진행 상황을 확인합니다. 좌심실 유출관에 가까워질 때, 현미경으로 매 100 μm마다 확인하십시오. 용기 벽의 초기 징후가 관찰되면 속도를 50 μm로 느리게 합니다.참고: 첫 번째 대동맥 cusp가 나타나면 섹션을 수집하기 위한 점 0이 됩니다. cusps가 정확하게 나타나는 때 보기 어려울 수 있습니다, 그러나 정확한 현지화는 동일 지구에 있는 병변의 비교를 능력을 발휘하기 위하여 중요합니다. 단면 평면을 다른 두 cusps와 정렬하려면 시편을 점 0 cusp 쪽으로 기울입니다. 이것은 대강의 진정한 단면을 얻기 위해 중요합니다. 대동맥 근을 도면하여 커프가 나타나는 대로 표시하고 점 0에서 이후로 절단되는 10 μm 섹션마다 계산합니다. 두 번째 커프가 나타나면 시편을 커프에서 다시 약간 기울여 시편을 세 번째 커프와 정렬합니다. cusps 사이의 레벨 차이는 50 μm을 초과해서는 안됩니다. 레벨 90 μm 이후의 슬라이드에서 섹션을 수집하기 시작합니다. 그림3의 슬라이드 계획에 따라 섹션을 수집합니다. 대동맥 뿌리가 50 μm 이상 기울어진 경우 섹션 의 수집은 190 μm부터 시작하여 루트를 직선 위치에 정렬할 수 있는 추가 공간을 허용합니다. 점 0에서 레벨 800 μm에 도달할 때까지 단면화를 계속합니다. 이 수준에서 여전히 보이는 플라크가 있는 경우 컬렉션은 1,000 μm로 확장될 수 있습니다.참고: 단순화된 슬라이드 조직은 섹션 속도 향상을 수 있는 추가 그림1에 표시됩니다. 최적의 슬라이드 계획은 프로젝트 계획에 따라 결정되어야 합니다. 수집 후 섹션을 수정합니다. 오일 레드 O 염색 및 피크로시리우스 적색 콜라겐을 4% 포름알데히드에 10분 동안 채취한 부분을 수정합니다. 슬라이드가 오일 레드 O로 즉시 염색되어야하고 여전히 젖은 경우, 건조 과정을 가속화하기 위해 1 분 동안 60 % 이소 프로판올에 놓습니다.주의 사항: 이소프로판올은 심각한 눈 자극을 유발할 수 있으며 졸음이나 현기증을 유발할 수 있는 인화성 액체입니다. 통풍이 잘 되는 곳에 보관하고 취급 시 예방 조치를 취하십시오. 얼음 차가운 순수 아세톤에서 면역 성 화학 또는 면역 형광을 위해 수집 된 섹션을 10 분 동안 고정. 실온에서 30 분 동안 건조. -20 °C의 섹션을 저장하십시오. 그림 3: 대동맥 루트의 직렬 섹션에 대한 슬라이드 구성입니다. 대동맥 의 처음 800 μm에 걸친 10 μm 두께의 섹션마다 대동맥 뿌리를 극저온 절제하는 동안 수집되어야한다. 다양한 응용 분야에 적합한 섹션을 얻으려면 체계적인 슬라이드 조직이 필요합니다. 병변 조성물의 분석은 일반적으로 지질에 대한 오일 레드 O 염색및 콜라겐에 대한 피크로시리우스 적색 염색을 포함한다. 나머지 절편은 면역 히스토화학 및 면역 형광 염색을 위해 수집되고 아세톤 고정됩니다. 이 그림은 Gisterå 외30에서수정되었습니다. 이 그림의 더 큰 버전을 보려면 여기를 클릭하십시오. 4. 대동맥 근에 있는 동맥 경화증의 기름 빨간 O 염색 그리고 정량화 이소프로판올 100 mL에 오일 레드 O 1 g을 용해시킴으로써 포화 오일 레드 O 용액을 준비한다. 실온에서 1시간 동안 어두운 병에 용액을 저어줍니다. 포화 용액은 몇 달 동안 보관 할 수 있습니다.참고: 솔루션과 접촉한 장비를 청소하기 어렵기 때문에 오일 레드 O 염색을 위한 실험실 장비를 지정하는 것이 좋습니다. 포화 오일 레드 O 용액 의 75 mL를 탈이온수 50 mL와 혼합하여 작동 용액을 준비하십시오. 실온에서 10분 동안 방치하십시오. 오일 레드 O 작업 용액에 슬라이드를 20 분 동안 헹구고 수돗물에 5 분 동안 헹구십시오. 조직 시각화를 돕기 위해 메이어의 헤마톡실린을 1분 동안 얼룩지게 합니다. 이제 모든 핵은 파란색으로 염색되고 염색 시간을 조정하여 결과를 최적화해야 합니다. 수성 마운팅 매체(예: 카이저의 글리세롤 젤라틴)에 슬라이드를 장착합니다. 사용하기 전에 유체를 만들기 위해 40 °C에 따뜻한 카이저의 글리세롤 젤라틴. 장착 매체가 수성이므로 슬라이드를 건조할 필요가 없습니다. 커버 유리를 추가할 때 기포가 형성되지 않도록 주의하십시오.주의 사항: Kaiser의 글리세롤 젤라틴에는 유전적 결함을 유발하는 것으로 의심되는 페놀이 함유되어 있습니다. 필요에 따라 개인 보호 장비를 사용하십시오. 광 현미경에 연결된 카메라를 사용하여 디지털 현미경을 수집합니다. 일반적으로 전체 혈관 벽 및 병변 경계는 50 배 배 배 확대로 명확하게 시각화 될 수 있습니다. 태그가 지정된 이미지 파일 형식(TIFF)으로 고해상도 이미지를 저장하는 것이 좋습니다. 컴퓨터 보조 이미지 분석 소프트웨어 시스템을 사용하여 병변 크기 분석을 수행합니다. 오일 레드 O는 중성 지질을 염색하고 병변 정량화를 돕는 강렬한 붉은 색으로 죽상 경화성 플라크를 시각화하는 리소크롬 디아조 염료입니다.참고 : 병변 정량화는 맹목적인 방식으로 수행해야하며 두 번째 조사자가 얻은 결과를 확인하는 것이 좋습니다. 이미지 분석 소프트웨어에서 면적 정량화 기능을 사용하여 대동맥 용기 벽의 외부 탄성 라미나(그림2B)를둘러싸서 전체 용기 면적을 정의합니다. ImageJ에서 다각형 선택 도구를 선택하고 반복클릭으로 영역을 둘러싸습니다. 그런 다음 분석 메뉴에서 측정값을 선택합니다. 총 선박 영역이 결과 창에 표시됩니다. 내부 탄성 라미나 및 발광 경계에 의해 정의 된 혈관의 친밀한 층에서 죽상 경화성 병변을 정량화하십시오. 일반적으로 판막 cusps에 병변은 측정27에서제외됩니다. ImageJ에서 자유형 선택 도구를 선택하고 Alt 키를 누를 때 모든 플라크를 둘러싸습니다. 분석 메뉴에서 측정값을 선택하여 결과 창에 병변이 없는 혈관 영역을 표시합니다. 전체 혈관 영역에서 병변없는 영역을 빼고 결과를 전체 혈관 영역으로 나누어 상대 병변 면적을 계산합니다.참고: 사용된 배율에 따라 이미지 분석 소프트웨어의 결과를 보정하여 제곱 마이크로미터에서 절대 병변 영역을 얻었다. 이미지 분석 소프트웨어에서 색상 임계값 특징을 사용하여 병변내의 오일 적색 O 염색 영역을 정의하여 전체 병변 영역의 오일 레드 O 양성 영역의 백분율을 계산합니다. ImageJ에서 시프트 키를 누를 때 자유형 선택 도구를 사용하여 모든 병변 영역을 둘러싸습니다. 분석 메뉴에서 측정값을 선택하여 총 병변 영역이 결과 창에 표시됩니다. 편집 메뉴에서 외부 지우기 선택을 선택합니다. 이미지 메뉴에서 이미지 유형을 8비트로 변경합니다. 이미지 메뉴의 조정 하위 메뉴에서 임계값을 선택하여 오일 레드 O 음수 영역에 대한 빨간색 임계값을 설정합니다. 적용을 클릭합니다. 프로세스 메뉴의 이진 하위 메뉴에서 이 옵션을 선택하여 이미지 바이너리를 만듭니다.참고: 일반적으로 오일 레드 O 염색배치마다 다릅니다. 따라서 색상 임계값은 동일한 염색 배치 내에서만 권장됩니다. 임계값이 결정되고 표준화된 방법에 대한 설명과 함께 결과를 제공해야 합니다. 분석 메뉴에서 입자 분석을 선택하여 그림을 분석하고 확인을 클릭합니다. 총 오일 레드 O 음의 병변 영역은 이제 요약 창에 표시됩니다. 총 병변 영역에서 오일 레드 O 음의 영역을 빼고 전체 병변 영역으로 나누어 상대 오일 레드 O 양성 영역을 계산합니다.