Opsonophagocytic 살해 분석 결과 세균성 병원 체에 대 한 면역학 응답을 평가 하
Summary
이 opsonophagocytic 죽이 분석 결과 응답 하 고 다른 치료 조건에 기반 하는 박테리아를 죽 일 phagocytic 면역 세포의 기능을 비교 하는 데 사용 됩니다. 고아 하 게,이 분석 결과 opsonin로 박테리아에 대하여 제기 하는 항 체의 효과 기 기능을 평가 하기 위한 황금 표준 역할을 합니다.
Abstract
호스트의 세균성 식민지에 면역 반응의 중요 한 부분은 이다 식 균 작용. Opsonophagocytic 살해 분석 결과 (OPKA) phagocytic 세포는 세균 대 공동 교양 있는 실험적인 절차 이다.입니다. 면역 세포 phagocytose 하 고 보완 종속 방식에서 세균성 문화를 죽 일 것 이다. 중재 하는 면역 세포 살해의 여러 가지 요인에 따라 달라 집니다 효율과 어떻게 다른 박테리아를 확인 하기 위해 사용할 수 있습니다 세포 죽음에 관하여 문화 비교. 이 방법에서는, 특정 세균성 긴장 또는 serotypes에 대 한 잠재적인 면역 기반 치료제의 효능을 평가 수 있습니다. 이 프로토콜에서 우리는 기본적인 문화 조건 및 셀 세 치료 조건 및 HL-60 면역 세포 공동 문화 후 세균 세포 생존 능력을 결정 하는 단순화 된 OPKA를 설명 합니다. 이 메서드는 다른 폐 렴 serotypes, capsular와 acapsular 긴장, 및 다른 세균 종 수와 성공적으로 이용 되어. 이 OPKA 프로토콜의 이점은 그것의 간명, 다양성 (로이 분석 결과 opsonins로 항 체 치료에 국한 되지 않습니다), 그리고 시간과 기본 실험 그룹을 평가 하기 위해 시 약의 최소화.
Introduction
Opsonophagocytic 분석 결과 (OPKA)를 죽이 세균성 구조 또는 기능 변경 이후의 변화 면역 반응 및 기능에 연결 하기 위한 중요 한 도구입니다. 이와 같이, 그것 자주 면역 기반 항 체 치료, 백신 후보자, 효소 최적화 등의 효능을 결정 하기 위해 분석 결과 보완으로 사용 됩니다. Vivo에서 분석 실험 공간이 세균 감염 모델에 보호를 결정 하는 데 필요한 반면는 OPKA 평가 세균성 세포 죽음에 면역 기여 가장 기본적인 구성 요소를 사용할 수 있습니다: 박테리아, 면역 세포, 및 실험 치료입니다. 이전 연구는 OPKAs 수정 하 고 다양 한 박테리아와 serotypes, 연쇄 상 구 균 균1,2 포도 상 구 균, 녹 농 균3를 포함 하 여 사용할 수 있습니다 나타났습니다. 또한, 이러한 최적화 된 분석 실험 박테리아를 더 개선 보완-중재 면역 세포4 및 항 체 치료에 액세스할 수 있도록 하는 효소의 기능을 포함 하 여 다른 실험적 치료를 평가 하기 위해 사용할 수 있습니다. opsonization5. 고전적인, OPKA 분석 결과 성공적으로 사용 되었다 기초 및 임상 연구에서 병원 체 특정 항 체6,,78,9에 의해 유도 된 보호에 대 한 강력한 표시기로 설정 .
Opsonophagocytic 살해의 평가 대 한 면역 세포의 다른 종류를 사용할 수 있습니다. 1 일반적으로 사용 되 phagocytic 인구는 HL-60 인간 leukemic 세포 라인. 이 셀 라인 배양에서 사 promyelocytes로 유지 될 수 있다 그러나, 그들은 다른 약물 치료10,11을 통해 다양 한 활성화 상태에 분화 될 수 있다. HL60 n의 처리, N dimethylformamide 강한 phagocytic 활동11활성화 된 호 중구에 셀 라인을 차별화합니다. HL-60 셀 최적화 되어10이 먹어서 분석 실험 위해 자주 사용 하는 동안 다른 기본 polymorphonuclear 백혈구 면역 실험12팔으로 사용할 수 있습니다.
또한, 이러한 분석 실험 또는 단순화 된13 수 다중화14 테스트할 박테리아의 여러 항생제 내성 변종에 보고. 멀티플렉스 메서드는 더 효율적으로 한 접시15자리 당 단위 (CFUs)를 형성 하는 세균성 식민지를 셀 수 있는 소프트웨어의 개발을 통해 실현 하였습니다. 여기, 하나의 세균, HL-60 셀, 아기 토끼 보완, 긴장과 혈액 한 천 배지를 사용 하 여 효율적인된 방안을 설명 합니다. 이 방법으로 여러 치료 세균성 감염에 타고 난 면역 반응 수 변조 하는 방법에 대 한 특정 연구 질문을 해결 하기 위해 신속 하 게 평가 될 수 있다.
Protocol
Representative Results
Discussion
OPKAs 예방 접종6,8에 의해 유도 된 항 체 중재 면역 반응 평가에 필수적인 역할을 제공 합니다. 이 단순화 된 OPKA의 주요 중요성은 테스트할 조건에 (즉, 항 체, 효소 치료, 등.). 이런이 의미에서이 분석 결과에 먹어서, opsonins (즉, 항 체)의 기여를 테스트를 사용할 수 있는 동안 그것은 또한 사용할 수 있습니다 일반적으로 phagocytic 경로 억제 하는 독성 요소…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
우리는 우리의 실험실에서 OPKA 분석 실험에서 그의 귀중 한 원조에 대 한 박사 문 남 (알라바 마의 대학 버밍엄) 감사 합니다. 이 작품은 국가 학회 건강 그랜트 1R01AI123383-01A1 FYA에 의해 지원 되었다.
Materials
| Annexin V (APC conjugated) | BioLegend | 640919 | |
| anti-CD35, human (PE conjugated) | BioLegend | 333405 | |
| anti-CD71, human (PE conjugated) | BioLegend | 334105 | |
| bacterial strain to be used (ie, Streptococcus pneumoniae, WU2) | Bacterial Respiratory Reference Laboratory (Dr. Moon Nahm) | ||
| blood agar plates | Hardy Diagnostic | A10 | |
| Fetal Clone serum | HyClone | SH30080.03 | |
| glycerol | Sigma | G9012-1L | |
| HL-60 cells | ATCC | CCL-240 | |
| IgG Isotype Control (PE conjugated) | BioLegend | 400907 | |
| N,N-dimethylformamide (DMF) | Fisher Chemical | UN2265 | |
| propidium iodide | Sigma | P4864 | |
| RPMI media with L-glutamine | Corning | 10-040-CV |
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