איסוף ששונה דם מן הוורידים הזנב של עכברים שאינם מרדימים עם מערכת איסוף הדם ואקום, זכוכית מגדלת מוכספת
Summary
מחקר זה דוחות דיגום הדם של וריד הזנב בעכברים באמצעות מערכת צינור שאיבת ואקום עם זכוכית מגדלת מוכספת. השיטה שלנו קל לתרגל, ניתן להשתמש עבור לקיחת דמים חוזרים בעכברים.
Abstract
איסוף דגימת דם הוא בסיס ניסיוני מחקר בבעלי חיים. זה חשוב כדי להשיג דגימות דם נאותה למטרות מחקר שונים. הורידים הזנב של עכברים קטנים, זה לפעמים קשה להשיג את נפח הדם הנדרשת על ידי שיטות לנקב קונבנציונלי. מחקר זה בוחן את העליונות של אוסף דגימת דם חוזרות ונשנות מן הורידים הזנב של עכברים באמצעות שימוש דם ואקום אוסף מערכת ומנקה מגדלת (קבוצת הניסוי) לעומת שיטות דגימה דם קונבנציונאלי (קבוצה קונבנציונלי) , המבוצעת על ידי למתחילים ולמתקדמים, בהתאמה. עם העזרה של מוכספת ‘ זכוכית מגדלת ‘, טיפ המחט פרפר מוכנס לתוך וריד הזנב העכבר כל קבוצת הניסוי. כאשר הווריד הוא שחדר בהצלחה, דגימת דם נאסף בצינור אוסף אבק על ידי החדרת בסוף גומי מחט הפרפר לתוך הצינור אוסף דם ואקום. הבוכנה משמש לאחר מכן לאסוף דם ללא העזרה של זכוכית מגדלת מוכספת בקבוצה קונבנציונלי. אחוזי ההצלחה של איסוף דגימת דם על ידי למתחילים ולמתקדמים הוצגו 70% לעומת 100% (p < 0.01) קבוצה ניסיונית, 35% לעומת 85% (p < 0.01) בקבוצה קונבנציונלי. הן למתחילים והן מומחים, ניקוב הזמנים הנדרשים להשגת דגימת דם הנדרשים היו נמוכים משמעותית בקבוצת הניסוי בהשוואה לקבוצת קונבנציונאלי (2.40 ± 0.75 לעומת 2.90 ± 0.31, 0.05 < p; 1.15 ± 0.37 לעומת 1.55 ± 0.76, p < 0.05). לסיכום, שיטת דגימה דם הציג ריאלי ופשוט לאימון ומאפשר תכופים דגימה של דם נאותה כרכים של עכברים שאינם מרדימים.
Introduction
בדיקת דם מעורב בניסויים בבעלי חיים היא טכניקה מחקר בסיסי. ישנם כמה טכניקות זמינים עבור איסוף דם של עכברים, כולל הזנב חיתוכים, ניקב הלב, מקלעת רטרו-מסלולית, ומוחלף, וריד סימטרית, ו הנבוב. באופן אידיאלי, צריך לאסוף דם בצורה פולשנית, עם השפעה מינימלית על בריאותו של בעל החיים. עם זאת, הטכניקות הנפוצות ביותר לעתים קרובות ממיטים לחץ על בעלי חיים, יכול להשפיע על תוצאות מחקר1. דם מהאוסף מקלעת רטרו-מסלולית ניתן להשיג מספיק נפח דם של עכברים2. עם זאת, הוא יכול לגרום נזק לרקמות חמור, אינו מאפשר קבלת הדם שוב ושוב ב מרווחי זמן קצר3.
הווריד סימטרית הוא מיקום מעולה עבור איסוף דם, הגורם פגיעה מינימלית על עכברים. עם זאת, הורידים הזנב של עכברים דק, זה לפעמים קשה להשיג מספיק דם דרך הטכניקה לנקב קונבנציונלי. במקרים מסוימים, דקירות חוזרות נדרשים להשיג את נפח הדם הרצויה. הרדמה מומלץ בדרך כלל גם כדי להקל על לקיחת דמים מן הורידים הזנב של עכברים. יתר על כן, האזמל, שוליים ישרים גילוח או מספריים חדות עשוי להיות נחוץ כדי להסיר את הקצוות של זנבות כדי להשיג את דגימות הדם הנדרשת4. בעבר דיווחנו איסוף דם מוצלחת מן הורידים הזנב של חולדות שאינם מרדימים על ידי מערכת איסוף דגימת דם ואקום, אשר הפחיתה את הסיכון לזיהום דם, נמנע הצורך דקירות חוזרות5. המחקר מדווח שיטה דומה של איסוף הדם בעכברים שאינם מרדימים.
Protocol
Representative Results
Discussion
המחקר הנוכחי מתאר בשיטת איסוף דם קל-כדי-ללמוד בעכברים עדיפה של טכניקות קונבנציונלי. ראשית, השיטה ניתן לשליטה בקלות עם אחוזי הצלחה גבוהים. שנית, הוא מבוסס על העיקרון לחץ שלילי ואקום ומאפשר לרישום רציף של דם עם סיכון מופחת של חשיפה ישירה דם, אשר גם מפחית את הסיכוי לזיהום וזיהום המוליזה9. שלישית, שיטה זו היא ריאלי עבור הדגימה תכופים של דם עם אמצעי אחסון נאותים של עכברים על פני תקופה קצרה של זמן למטרות מחקר שונים. יתר על כן, ההליך גורמת רק מינימלי לפציעה עכברים ולאחר איסוף דם יכול להתבצע ללא השימוש בהרדמה; לפיכך, ניתן להימנע השפעת תגובת המתח ואת חומרי הרדמה על דגימות דם.
תקחי את הזנב הוא מיקום מעולה עבור לקיחת דמים לפי פרוטוקול שאושרו7. עם זאת, זה לא תמיד קל להשיג נפח מספיק דם מן הוורידים זנב דק עם זרימות דם נמוך. במקרה זה, העור הוא בדרך כלל לפתוח וריד, הוא חודר אזמל מנתחים, או סוף הזנב יוסר במהירות על ידי סכין גילוח.
פרוטוקול זה נועד לשפר את המתודולוגיה של איסוף דם של עכברים באמצעות מערכת איסוף דם ואקום, המחייב של דם ואקום מדגם אוסף שפופרת פרפר, ומחט מוכספת זכוכית מגדלת. מערכת זו דגימה דם ואקום משמש בדרך כלל לאיסוף דגימות דם מחולים יומי הקליני10. עם העזרה של מוכספת ‘ זכוכית מגדלת ‘, נקודת חדירה מושלמת של וריד הזנב קל לאיתור. כאשר קצה מחט מוכנס לתוך הווריד של הזנב, דם יזרום באופן אוטומטי לתוך שפופרת הואקום בלחץ שלילי. לאחר נסיגתה המחט מן הווריד של הזנב, דם חסום הקטטר יזרום לתוך שפופרת הואקום איסוף בשל הוואקום.
העצות הבאות חשובים עבור יישום מוצלח של השיטה. קודם כל, משקל הגוף של כל עכבר צריך להיות 40 g או גבוה יותר כדי להקטין את הקושי ניקב וקבלת מספיק דם. שנית, במקרה של איסוף דם שנכשלו, ניסויים צריך לנסות למשוך את המחט לאט עד הדם ממשיך לזרום החוצה. שלישית, זה חיוני כדי להרחיב את הזנב למנוע כל תנועה במהלך לקיחת דמים. אוחז את המחט בעדינות יכול לעזור לשמור את מחט בווריד כמו המהלכים זנב העכבר. רביעית, אם הדם יפסיק לזרום החוצה במהלך איסוף דם, צריך להיות מותאם הזווית המחט מבעוד. כדי למנוע קרישת דם במחט, והאחר לנקב צריך לבחור אם הדם יפסיק לזרום החוצה לאחר 15 s. בסופו של דבר, שיתוף הפעולה של שני אופרטורים מומלץ תוך שימוש בטכניקה זו כדי לאסוף דם של עכברים.
בקיצור, השיטה אוסף דם ואקום המאומץ עבור שימוש בעכברים הוא בטוח, ריאלי וקל להתאמן. שיטה זו מאפשרת בתדירות דגימה של דם עם כמויות דם נאותה של עכברים שאינם מרדימים.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי המענק למדע הטבע של הוביי, סין [מענק מס 2018CFB761].
Materials
| Double-pointed needle | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 20163151718 | 22G (0.7 mm x 25 mm) |
| Eyeglass magnifier | Vergroberung | 1.5x | |
| Normal salt diet for mice | Mice received a normal salt diet (0.3% NaCl) throughout the study. | ||
| Plastic holder | Shanghai Kang Nong medical instrument co., LTD, China | 35-45 g rat hoder | |
| SPSS software for statistical analysis | SPSS Inc, Chicago; USA | Version 17.0. | |
| Syringe | Shandong wego Medical polymer products co. LTD., China | 20160911A | 1 mL (Matching needle size: 0.45×16RW LB) |
| Vacuum blood collection system | Wuhan Zhi Yuan, medical science and technology co., LTD, China | 20171222 | 1 mL (Φ12.4×L75) |
References
- Grouzmann, E., et al. Blood sampling methodology is crucial for precise measurement of plasma catecholamines concentrations in mice. European Journal of Physiology. 447 (2), 254-258 (2003).
- Heimann, M., Roth, D. R., Ledieu, D., Pfister, R., Classen, W. Sublingual and submandibular blood collection in mice: a comparison of effects on body weight, food consumption and tissue damage. Lab Animal. 44 (4), 352-358 (2010).
- Heimann, M., Kasermann, H. P., Pfister, R., Roth, D. R., Burki, K. Blood collection from the sublingual vein in mice and hamsters: a suitable alternative to retrobulbar technique that provides large volumes and minimizes tissue damage. Lab Animal. 43 (3), 255-260 (2009).
- Hoff, J. Methods of blood collection in the mouse. Lab Animal. 29 (10), 47-53 (2000).
- Zou, W., et al. Repeated Blood Collection from Tail Vein of Non-Anesthetized Rats with a Vacuum Blood Collection System. Journal of Visualized Experiments. (130), (2017).
- Kilkenny, C., Altman, D. G. Improving bioscience research reporting: ARRIVE-ing at a solution. Lab Animal. 44 (4), 377-378 (2010).
- Parasuraman, S., Raveendran, R., Kesavan, R. Blood sample collection in small laboratory animals. Journal of Pharmacology and Pharmacotherapeutics. 1 (2), 87-93 (2010).
- Diehl, K. H., et al. A good practice guide to the administration of substances and removal of blood, including routes and volumes. Journal of Applied Toxicology. 21 (1), 15-23 (2001).
- Wollowitz, A., Bijur, P. E., Esses, D., John Gallagher, E. Use of butterfly needles to draw blood is independently associated with marked reduction in hemolysis compared to intravenous catheter. Academic Emergency Medicine. 20 (11), 1151-1155 (2013).
- Eder, J. M., Cutter, G. R. A new device for collecting cord blood. Obstetrics and Gynecology. 86 (5), 850-852 (1995).
