小鼠血睾丸屏障完整性的一种活体研究方法

哺乳动物精子发生被认为是一个高度结构化的过程, 包括精原体自我更新和分化, 通过精母细胞成为单倍体精子通过有丝分裂, 减数分裂, 和精子细胞生成, 在此期间戏剧性发生生化和形态变化。发育中的生殖细胞逐渐从精子管的底部向腔内输送。这个过程是由生殖细胞和塞尔托利细胞^1,2之间的细胞接触调节的。相邻的塞尔托利细胞形成位于生精小管基部附近的 Sertoli。btb 物理上将上皮分为基底和肾上腺室。在上皮周期的第八-ix 期, 基底隔间的前瘦素精母细胞通过 btb 迁移, 进入内皮隔间 3.因此, btb 的功能是为完成减数分裂和精子发生 4,^5,6提供免疫诊断的微环境^.与其他仅由紧密连接点 (tj) 组成的血组织屏障 (如血脑屏障) 不同, btb 由四个不同的连接点 (tj、外质化专业、缝隙连接点和中间丝状连接点) 组成。) 塞尔托利细胞之间 1^,7。

许多研究使用转基因小鼠、病毒感染和环境毒物来研究 btb 完整性^{的机制 7,8, 9.}btb 破坏会导致精子发生和不孕不育受损。由于 Sertoli 的形成和完整性已被证实受到塞尔托利细胞⁸之间接触的影响, 基于分离的塞尔托利细胞原代培养的体外模型已被用于 Sertoli 研究。然而, 该模型不能准确地模拟 btb 动态在体内。此外, 没有建立这种与塞尔托利细胞共同培养的方法, 能够反映 Sertoli^{10、11 的}所有相关结构和功能成分。

一般来说, btb 完整性检测通常基于小分子, 如 ez-link sulfo-nhs-lc-biopin 和 fitc 共轭菊粉 (inulin-fitc). 通常情况下, 生物素或 inulin-FITC 从基底隔间的扩散被 btb 结构阻断。因此, 我们能够使用这种方法来评估 btb 损伤与对照组相比的程度。虽然 btb 可能会受到某些类型的刺激的影响, 例如使用氯化镉 (cdcl₂)¹²的治疗, 但小分子可以接触到 btb, 这些分子最终会作为指标进入肾上腺隔间。

早期体内 btb 完整性检测包括将生物素或 inulin-FITC 注入颈静脉, 这涉及手术, 具有侵入性、复杂性和耗时性。此外, 由于记者的物质通过循环在全身扩散, 在精子管中的生物素或伊努林-fitc 的局部浓度是有限的。此外, 全身接触可能会诱发免疫反应。在这里, 我们提出了一个简单而有效的体内btb 完整性检测, 使直接注射少量的 inulin-FITC 到睾丸间质。使用荧光标记法, 染色过程方便, 因为不需要二级抗体。在这里, 荧光染料进入睾丸的过程是可视化的。