Herpes simplex virus 1 (HSV-1) orsakar ett brett utbud av mild till svår postherpetisk sjukdomar inklusive herpes labialis, genital herpes, stromal keratit och encefalit. När smittade, upprättar viruset ett livslångt latent infektion i ganglier nervceller. Ibland kan viruset reaktiveras av olika skäl såsom feber, stress och immunsystemet¹, leder till återkommande herpesinfektion. Infekterad cell protein 0 (ICP0) är en nyckel viral regulator som är avgörande för både lytisk och latent HSV-1 infektion. Det transactivates nedströms virus gener via motverka den värd inneboende/medfödda antivirala försvar^2,3. ICP0 har en E3 ubiquitin ligase verksamhet, som riktar sig till flera cell faktorer för proteasom-beroende nedbrytning³. Det samverkar också med olika cell vägar att reglera deras verksamhet och därefter att kompensera värd antivirala begränsningar³. ICP0 är känd för att hitta på olika subcellulär fack som infektionen fortsätter^3,4,5. Proteinet har lysin/arginin-rika cellkärnelokalisering signal (NLS) ligger på rester 500 till 506⁶. Vid de novo syntes på tidiga HSV-1 infektion importeras ICP0 omedelbart in i cellkärnan. Det upptäcks först vid en dynamisk nukleära struktur kallas kärnkraftsområdet 10 (ND10)⁷. E3 ubiquitin ligase aktiviteten av ICP0 utlöser nedbrytningen av ND10 arrangör proteiner, promyeloisk leukemi (PML) protein och spräckliga protein 100 kDa (Sp100)^8,9,10. Efter förlusten av arrangör proteiner, ND10 kärn organ är spridda och ICP0 sprids för att fylla hela kärnan^4,11.

Intressant, efter uppkomsten av virala DNA-replikation försvinner ICP0 från kärnan. Det finns enbart i cytoplasman, vilket tyder på förekomsten av en kärn-till-Cytoplasmatisk flyttning sent i HSV-1 infektion^4,12. Kravet på den DNA-replikationen innebär potentiella deltagande en sena viral proteinernas att underlätta den cytoplasmiska flyttning av HSV-1 ICP0^4,12. Tydligen ICP0 människohandel bland olika fack under infektion ger ICP0 att modulera dess interaktioner till olika cellulära vägar i en spatial-temporal mode, och därför samordna dess flera funktioner till fina finjustera balansen mellan lytisk och latent HSV-1 infektion¹³. För att bättre förstå ICP0 multifunktionalitet och samordning av ICP0 funktionella domäner i hela lytisk infektionen, dissekerade vi noggrant den molekylära basen för den dynamiska ICP0 flyttning¹². För att genomföra den mekanistiska studier tidigare rapporterade¹², har vi tillämpat en Immunofluorescerande färgningsmetod för att visualisera ICP0 subcellulär lokalisering på olika infektionsstatus confocal Mikroskop. Vi har också utvecklat ett kvantitativa protokoll för att analysera nukleära vs. cytoplasmiska fördelningen av ICP0 med hjälp av confocal programvara. Befolkningen av HSV-1-infekterade celler var i tabellform i hela infektion faser och utvecklingen av ICP0 rörelse analyserades, enligt olika biokemiska behandlingar¹². Här beskriver vi de detaljerade protokollet som dokument ICP0 flyttning i HSV-1 infektion. Vi föreslår att denna metod kan antas som en generell metod att studera det nukleära vs. cytoplasmiska translokationen för andra virus eller cellulära proteiner, som kan fungera som ett alternativ till levande imaging när den levande bildteknik är tillämplig på grund problem såsom märkning metoden, signalintensitet eller protein överflöd.