β-淀粉脂质诱导纤维蛋白斑点结构异常的光谱分析

阿尔茨海默病 (ad) 是一种导致老年患者认知能力下降的神经退行性疾病, 主要源于β-淀粉样蛋白 (aβ) 的异常表达、聚集和清除障碍, 导致神经毒性^1,2. 尽管 aβ集合体与 ad³之间存在良好的联系, 但疾病病理的确切机制尚不清楚⁴。越来越多的证据表明, 神经血管缺陷在 ad⁵的进展和严重程度中起着一定的作用, 因为 aβ与循环系统的组成部分直接相互作用。aβ与纤维蛋白原^7,8有高亲和力的相互作用, 在 ad 患者和小鼠模型^9,10,11中也定位到 aβ沉积。此外, β-纤维蛋白原相互作用诱导异常的纤维蛋白凝块形成和结构, 以及对纤维蛋白溶解^的抵抗力9^,12。治疗 ad 的一种治疗方法是通过抑制 aβ和纤维蛋白原¹³, 14 之间的相互作用来缓解循环缺陷。因此, 我们通过高通量筛选和药物化学方法 13, 14, 发现了几种抑制β纤维蛋白原相互作用^的小化合物。为了测试光纤 b 系与原相互作用抑制剂的有效性, 我们优化了两种体外纤维蛋白凝块形成的分析方法: 凝块浊度分析和扫描电镜 (sem)¹⁴。

凝乳浊度测定是利用紫外可见光谱监测纤维蛋白凝块形成的一种直接快速的方法。随着纤维蛋白凝块的形成, 光线越来越分散, 溶液的浊度也在增加。相反, 当 aβ存在时, 纤维蛋白凝块的结构会改变, 混合物的浊度会降低 (图 1)。抑制化合物的效果可以评估的可能性, 以恢复凝块浊度从β诱导的异常。虽然浊度分析可以快速分析多种条件, 但它提供的关于凝块形状和结构的信息有限。sem, 其中固体物体的地形是^由电子探针揭示, 允许分析的三维结构的凝块^15,16, 17,^{18, 并}评估如何存在的 aβ和/或抑制化合物改变结构^9,14。光谱法和扫描电镜都是经典的实验室技术, 已被用于各种目的, 例如, 分光光度法用于监测淀粉样蛋白聚集^19,20。同样, sem 也被用来分析由阿尔茨海默氏症、帕金森病和血栓栓塞中风 21^{、22、23 例}患者的血浆形成的纤维蛋白凝块。这里介绍的协议是优化评估纤维蛋白凝块形成的重现性和快速的方式。

下面的协议提供了在有和没有 aβ的体外纤维蛋白凝块的制备说明。详细介绍了 aβ对纤维蛋白凝块形成和结构影响的分析方法。这两种方法测量抗β纤维蛋白原相互作用的有效性已证明使用 tdi-2760, 一种小型抑制化合物 14.这些方法, 无论是单独和共同, 允许快速和直接的分析体外纤维蛋白凝块的形成。