Polikistik over sendromu çalışmaya Hyperandrogenic fare modeli
Summary
Biz bir yalın PCOS gibi fare modeli ile PCOS ve belgili tanımlık çoluk çocuk bu PCOS benzeri baraj üzerinden Patofizyoloji çalışmaya dihidrotestosteron Pelet gelişimi tanımlamak.
Abstract
Hyperandrogenemia kadın üreme ve metabolik işlevinde önemli bir rol oynar ve Polikistik over sendromu özelliğidir. PCOS kadınlarla taklit eden bir yalın PCOS gibi fare modeli geliştirmek klinik olarak anlamlı demektir. Bu protokol için böyle bir model açıklar. DHT (dihidrotestosteron) kristal toz Pelet 4 mm uzunluğunda ekleyerek (Pelet toplam uzunluğu ise 8 mm) ve aylık değiştirmek yerine, biz bir PCOS gibi fare modeli ile serum DHT seviyeleri 2 kat DHT (no-DHT) ile implante değil fareler daha yüksek üretmek mümkün. Biz üreme ve metabolik fonksiyon bozukluğu vücut ağırlığı ve vücut kompozisyonu değiştirmeden gözlenen. Süre kısırlık yüksek derecede sergilenmesi, küçük bir alt kümesi bu PCOS benzeri dişi fareler hamile kalabilir ve yavrularını gecikmeli ergenlik ve artan Testosteron yetişkin olarak gösterir. Bu PCOS benzer yalın fare modeli PCOS ve belgili tanımlık çoluk çocuk bu PCOS benzeri baraj üzerinden Patofizyoloji eğitim için yararlı bir araçtır.
Introduction
Hyperandrogenism polikistik over sendromu (PCOS) NIH kriterleri göre ve androjen fazlalığı ve PCOS (AE-PCOS) toplumun özelliğimizdir. PCOS ile kadın hamile zorluk ve gebelik komplikasyonları1riski artmıştır. Onlar hamile bile, dişi yavrularını bir olumsuz sağlık sonuçları2,3var. Hayvan modelleri çeşitli stratejileri4,5,6,7,8,9,10,11 ile geliştirilmiş , 12 ve PCOS (anovulation, ve/veya bozulmuş glukoz ve insülin dayanıklılık) birçok özellikleri artan vücut ağırlığı ve genişlemiş adipocyte boyut ve artan adipocyte ağırlık ile ilişkili obezite ile sergilenmesi. PCOS incelemek için kullanılır hayvan modelleri üretmek için iki büyük strateji vardır. Doğum13den sonra tedavi androjenler doğrudan (eksojen androjen enjeksiyon/ekleme) ya da dolaylı olarak (örneğin, androjen dönüşüm için östrojen aromataz inhibitörü ile engelleme) düzeyi yüksek olan biri. Başka androjenler fetal hyperexposure tarafından gebelik14,15 sırasında belgili tanımlık çoluk çocuk incelemektir. Örneğin, al yanaklı maymun16,17, koyun18ve intrauterin dönemde androjen erkek düzeyde maruz kemirgenler dişi yavru sonraki hayatında PCOS benzeri özellikleri geliştirmek. Bu modeller önemli ölçüde yükseltilmiş androjen etkileri ve fetal programlama ve rahim çevresel etkileri bizim anlayış gelişmiş. Ancak, bu modeller kendi sınırlamaları vardır: 1) hayvanlar obezite geliştirmek ve bu nedenle indüklenen obezite üreme ve metabolik fonksiyon bozukluğu; hyperandrogenemia etkilerini ayırt etmek zordur 2) daha önce gebelik, kadın PCOS ile zaten androjen yüksek düzeyde sergi, böylece yumurta androjen fertilizasyon önce aşırı maruz kalmış; 3) farmakolojik dozlarda testosteron (T) veya doğumdan sonra veya gebelik sırasında kullanılan dihidrotestosteron (DHT) PCOS androjen ortamının yansıtmıyor olabilir. Yumurtalık foliküler sıvı ve/veya serum testosteron ve DHT seviyeleri ölçüldü ve 1.5-3,9 kat PCOS5,19,20,21 olan kadınlarda daha yüksek testosteron ve DHT seviyeleri ,22,23 etkilenmemiş kadınlara kıyasla. Üreme ve metabolik fonksiyon bozukluğu bir Pelet ekleme 4 mm uzunluğu ile kronik DHT maruz inisiyasyon iki hafta içinde gelişen bir yetişkin fare modeli23,24,25 yarattık Kristal DHT toz (Pelet toplam uzunluğu 8 mm’dir). Bu model hakkında (2xDHT anılacaktır) 2 kat daha yüksek serum DHT seviyeleri kontrol fareler DHT tedavi olmadan daha üretir. 2xDHT fareler değişiklik bazal serum östradiol, testosteron, LH ve sergi değil değil obezite geliştirmek ve benzer yumurtalık ağırlık, kolesterol, serbest yağ asitleri, leptin, serum düzeyleri göster TNFα ve Il-623,24, bile ilâ 3,5 ay sonra DHT ekleme23,24,25 25 göreli olarak denetler. Ayrıca, zaten PCOS özelliklerini geliştirdik dişiler çiftleşme tarafından15yavru bir hyperandrogenic anne tarafından çevre-metabolik ve üreme sağlığı üzerinde etkisini eğitim görebilirsiniz.
Bu yeni paradigma (NIH ve AE-PCOS toplum kriterlerine uygun) hastalık nispeten benzer bu kadınların androjenler ile PCOS 2 – 3 kat daha yüksek testosteron düzeylerini veya etkilenmemiş kadınlara kıyasla DHT seviyeleri üreterek modelleri. Bununla birlikte, DHT içine kapanık bir kez bu model programlanmış endojen hyperandrogenism değil ve sürekli eksojen DHT tarafından korunur. Bu makalede genel amacı 1 odaklanmaktır) nasıl DHT Pelet; 2) nasıl bir yalın PCOS gibi fare modeli oluşturmak için; 3) stratejileri bu barajlar gelen kadın çoluk çocuk değerlendirmek için. Diğer ölçümler ve fenotipleri değerlendirilmesi bu el yazması ele değil ama5,15,23,24,25,26içinde bulunabilir.
Protocol
Representative Results
Discussion
Hyperandrogenism PCOS önemli bir özelliktir. Bu protokol için kullanılan (iki yüksek no-DHT farelerde DHT farelerde kat) serum DHT seviyeleri bu önceki çalışmalarda diğer müfettişler tarafından bildirilen daha düşüktür ve PCOS5,19kadınlarla orantılı olarak taklit etmek için kalibre, 20,21. Diğer modelleri farklı olarak, vücut ağırlığı ve 3.5 ay sonra DHT ekleme<sup…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Bu eser Ulusal Sağlık Enstitüleri (hibe S.W. için R00-HD068130) ve Baltimore diyabet araştırma merkezi tarafından desteklenmiştir: pilotlar ve fizibilite Grant (için S.W.).
Materials
| Crystalline 5α-DHT powder | Sigma-Aldrich | A8380-1G | ||
| Dow Corning Silastic tubing | Fisher Scientific | 11-189-15D | 0.04in/1mm inner diameter x0.085in/2.15mm outer diameter | |
| Medical adhesive silicone | Factor II, InC. | A-100 | ||
| Goggles, lab coats, gloves and masks. | ||||
| 10 µL pipette tips without filter | USA Scientific | 11113700 | ||
| Microscope slide for smear | Fisher Scientific | 12-550-003 | ||
| Diff Quik for staining cells | Fisher Scientific | NC9979740 | ||
| Lancet | Fisher Scientific | NC9416572 | ||
| 3 mL Syring | Becton, Dickinson and Company (BD), | 30985 | ||
| attached needle: 20G | BD | 305176 | ||
| Ruler: any length than 10cm with milimeter scale. | ||||
| Xylazine | Vet one AnnSeA LA, MWI, Boise | NDC13985-704-10 | 100mg/ml | |
| Ketamine Hydrochloride | Hospira, Inc | NDC 0409-2051-05 | 100mg/ml | |
| Surgical staple | AutoClip® System, Fine Science Tool | 12020-00 | ||
| Insulin syringe | BD | 329461 | 1/2 CC, low dose U-100 insulin syringe | |
| Trochar | Innovative Research of America | MP-182 | ||
| Microscope | Carl Zeiss Primo Star | 415500-0010-001 | Germany | |
| Ear punch | Fisher Scientific | 13-812-201 | ||
| Testosterone rat/mouse ELISA kit | IBL | B79174 | ||
| DHT ELISA kit | Alpha Diagnostic International | 1940 | ||
| One touch ultra glucometer | Life Scan, Inc. | |||
| One touch ultra test stripes | Life Scan, Inc. | |||
| Eppendorf tube | Fisher Scientific | 05-402-18 | ||
| Razor blade | Fisher Scientific | 12-640 | ||
| Clidox | Fisher Scientific | NC0089321 | ||
| surgical underpad | Fisher Scientific | 50587953 | 
|
|
| Betadine Antiseptic Solution | Walgreens | |||
| 3M Vetbond (n-butyl cyanoacrylate) | 3M Science. Applied to Life | |||
| Animal tattoo ink paste | Ketchum manufacturing Inc. | Brockville, Ontario, Canada | ||
| Scale | Ohaus Corporation | HH120D | Pine Brook, NJ | |
| Electronic digital caliper | NEIKO Tools USA | 01407A | available from Amazon |
References
- Palomba, S., de Wilde, M. A., Falbo, A., Koster, M. P., La Sala, G. B., Fauser, B. C. Pregnancy complications in women with polycystic ovary syndrome. Hum. Reprod. Update. 21 (5), 575-592 (2015).
- Doherty, D. A., Newnham, J. P., Bower, C., Hart, R. Implications of polycystic ovary syndrome for pregnancy and for the health of offspring. Obstet. Gynecol. 125 (6), 1397-1406 (2015).
- de Wilde, M. A., et al. Cardiovascular and Metabolic Health of 74 Children From Women Previously Diagnosed With Polycystic Ovary Syndrome in Comparison With a Population-Based Reference Cohort. Reprod. Sci. , (2018).
- Caldwell, A. S., et al. Characterization of reproductive, metabolic, and endocrine features of polycystic ovary syndrome in female hyperandrogenic mouse models. Endocrinology. 155 (8), 3146-3159 (2014).
- van Houten, E. L., Kramer, P., McLuskey, A., Karels, B., Themmen, A. P., Visser, J. A. Reproductive and metabolic phenotype of a mouse model of PCOS. Endocrinology. 153 (6), 2861-2869 (2012).
- Cardoso, R. C., Puttabyatappa, M., Padmanabhan, V. Steroidogenic versus Metabolic Programming of Reproductive Neuroendocrine, Ovarian and Metabolic Dysfunctions. Neuroendocrinology. 102 (3), 226-237 (2015).
- Dumesic, D. A., Abbott, D. H., Padmanabhan, V. Polycystic ovary syndrome and its developmental origins. Rev. Endocr. Metab Disord. 8 (2), 127-141 (2007).
- Kauffman, A. S., et al. A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice. Biol Reprod. 93 (3), 69 (2015).
- Kelley, S. T., Skarra, D. V., Rivera, A. J., Thackray, V. G. The Gut Microbiome Is Altered in a Letrozole-Induced Mouse Model of Polycystic Ovary Syndrome. PLoS One. 11 (1), e0146509 (2016).
- Kafali, H., Iriadam, M., Ozardali, I., Demir, N. Letrozole-induced polycystic ovaries in the rat: a new model for cystic ovarian disease. Arch. Med. Res. 35 (2), 103-108 (2004).
- Maliqueo, M., Benrick, A., Stener-Victorin, E. Rodent models of polycystic ovary syndrome: phenotypic presentation, pathophysiology, and the effects of different interventions. Semin. Reprod. Med. 32 (3), 183-193 (2014).
- Yanes, L. L., et al. Cardiovascular-renal and metabolic characterization of a rat model of polycystic ovary syndrome. Gend. Med. 8 (2), 103-115 (2011).
- Kauffman, A. S., et al. A Novel Letrozole Model Recapitulates Both the Reproductive and Metabolic Phenotypes of Polycystic Ovary Syndrome in Female Mice. Biol. Reprod. 93 (3), 69 (2015).
- Filippou, P., Homburg, R. Is foetal hyperexposure to androgens a cause of PCOS?. Hum. Reprod. Update. 23 (4), 421-432 (2017).
- Wang, Z., Shen, M., Xue, P., DiVall, S. A., Segars, J., Wu, S. Female Offspring From Chronic Hyperandrogenemic Dams Exhibit Delayed Puberty and Impaired Ovarian Reserve. Endocrinology. 159 (2), 1242-1252 (2018).
- Abbott, D. H., Barnett, D. K., Bruns, C. M., Dumesic, D. A. Androgen excess fetal programming of female reproduction: a developmental aetiology for polycystic ovary syndrome?. Hum. Reprod. Update. 11 (4), 357-374 (2005).
- Abbott, D. H., Dumesic, D. A., Franks, S. Developmental origin of polycystic ovary syndrome – a hypothesis. J. Endocrinol. 174 (1), 1-5 (2002).
- Padmanabhan, V., Veiga-Lopez, A. Sheep models of polycystic ovary syndrome phenotype. Mol. Cell. Endocrinology. 373 (1-2), 8-20 (2013).
- Pierre, A., et al. Dysregulation of the Anti-Mullerian Hormone System by Steroids in Women With Polycystic Ovary Syndrome. J. Clin. Endocrinol. Metab. 102 (11), (2017).
- Dumesic, D. A., et al. Hyperandrogenism Accompanies Increased Intra-Abdominal Fat Storage in Normal Weight Polycystic Ovary Syndrome Women. J. Clin. Endocrinol. Metab. 101 (11), 4178-4188 (2016).
- Fassnacht, M., Schlenz, N., Schneider, S. B., Wudy, S. A., Allolio, B., Arlt, W. Beyond adrenal and ovarian androgen generation: Increased peripheral 5 alpha-reductase activity in women with polycystic ovary syndrome. J. Clin. Endocrinol. Metab. 88 (6), 2760-2766 (2003).
- Dikensoy, E., Balat, O., Pence, S., Akcali, C., Cicek, H. The risk of hepatotoxicity during long-term and low-dose flutamide treatment in hirsutism. Arch. Gynecol. Obstet. 279 (3), 321-327 (2009).
- Ma, Y., et al. Androgen Receptor in the Ovary Theca Cells Plays a Critical Role in Androgen-Induced Reproductive Dysfunction. Endocrinology. , en20161608 (2016).
- Andrisse, S., et al. Low Dose Dihydrotestosterone Drives Metabolic Dysfunction via Cytosolic and Nuclear Hepatic Androgen Receptor Mechanisms. Endocrinology. , en20161553 (2016).
- Andrisse, S., Billings, K., Xue, P., Wu, S. Insulin signaling displayed a differential tissue-specific response to low-dose dihydrotestosterone in female mice. Am. J. Physiol.Endocrinol. Metab. 314 (4), E353-E365 (2018).
- van Houten, E. L., Visser, J. A. Mouse models to study polycystic ovary syndrome: a possible link between metabolism and ovarian function?. Reprod. Biol. 14 (1), 32-43 (2014).
- Caligioni, C. S. Assessing reproductive status/stages in mice. Curr. Protoc. Neurosci. , (2009).
- Wu, S., et al. Conditional knockout of the androgen receptor in gonadotropes reveals crucial roles for androgen in gonadotropin synthesis and surge in female mice. Mol. Endocrinol. 28 (10), 1670-1681 (2014).
- Nelson, J. F., Felicio, L. S., Randall, P. K., Sims, C., Finch, C. E. A longitudinal study of estrous cyclicity in aging C57BL/6J mice: I. Cycle frequency, length and vaginal cytology. Biol. Reprod. 27 (2), 327-339 (1982).
- Dinger, K., et al. Intraperitoneal Glucose Tolerance Test, Measurement of Lung Function, and Fixation of the Lung to Study the Impact of Obesity and Impaired Metabolism on Pulmonary Outcomes. Journal of Visualized Experiments. (133), (2018).
- Nilsson, M. E., et al. Measurement of a Comprehensive Sex Steroid Profile in Rodent Serum by High-Sensitive Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry. Endocrinology. 156 (7), (2015).
- McNamara, K. M., Harwood, D. T., Simanainen, U., Walters, K. A., Jimenez, M., Handelsman, D. J. Measurement of sex steroids in murine blood and reproductive tissues by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 121 (3-5), 611-618 (2010).
- Klein, S. L., Bird, B. H., Glass, G. E. Sex differences in Seoul virus infection are not related to adult sex steroid concentrations in Norway rats. J. Virol. 74 (17), 8213-8217 (2000).
- Siracusa, M. C., Overstreet, M. G., Housseau, F., Scott, A. L., Klein, S. L. 17beta-estradiol alters the activity of conventional and IFN-producing killer dendritic cells. J. Immunol. 180 (3), 1423-1431 (2008).
