株マウス一次運動ニューロンによるシャルコー ・ マリー ・ トゥース病の in Vitroモデル化

神経筋疾患には、様々 な筋肉や神経系の変化によって特徴付けられる臨床的に、遺伝的に異なる病態が含まれます。最後の十年の間に識別された何百ものこれらのまれな疾患の責任遺伝子の配列の技術が進歩したため (筋疾患センターで利用可能なリスト http://neuromuscular.wustl.edu/index.html)。識別された突然変異の様々 な異なった表現型と疾患^1,2,3単一の遺伝子の異なる変異が発生することし、異なる遺伝子の突然変異が類似した表現型を作り出すことができることを示します^4,5します。 このコンテキストでは、突然変異の結果、病理学的メカニズムを分析するための強力なツールになることができる細胞モデルの開発に取り組む。

脊髄 MNs 脊髄、骨格筋を対象と神経筋接合部におけるアセチルコリンのリリースを通して自主的な動きを可能にするフォーム長い軸索の腹側の角にある大きな細胞体があります。MNs は筋萎縮性側索硬化症などの神経筋疾患によって影響を受ける、同僚博士ヘンダーソンと脊髄性筋萎縮症、シャルコー ・ マリー ・ トゥース病 (CMT)、開発の耕作のために許可されて最初のプロトコル⁶in vitro における因子 GDNF⁷ (グリア細胞派生神経栄養因子) の脊髄 MNs と神経栄養因子の発見。脊髄 MNs と FACS⁸を使用してそのサブタイプのより正確な浄化のため許可されているそれ以来、技術的な改良が密度勾配による濃縮のまま強力かつ広く使用されているプライマリ脊髄 MNs 作業は現在研究所^{9,10,11,12,13,14}します。 その後、表面マーカー p75^{(NTR)15,16,17}を利用して immunopanning を通じて高い MN 精製グレードを得ることが可能ですも。

脊髄前角の背腹軸内の位置によって異なる中央と外側のモーター列だけでなく、胸椎、頸椎・腰椎の MNs の異なるサブタイプが含まれているし、目標の中で、彼らは^8,を支配します。¹⁸. プライマリ MN 文化は生理学的な割合でこれらの MN のサブタイプのすべてを回復できます。この手法の主な制限は、MNs のプロシージャの終わりに取得数が少ない実際には、それが顕微鏡が生物化学実験用を制限することに適している六つの胚から約 10⁵ MNs を取得する期待できます。標準化されたサブタイプと豊富な MNs 実験を行う (> 10 の⁶セル)、胚性幹細胞由来の MNs は、¹⁸を考慮すべき。

プライマリ MNs に野生型・変異遺伝子のノックダウンの内因性遺伝子トランスフェクションは、マウスモデルを使用できないときに特に physiopathological 経路を解読するための迅速かつ便利なツールです。Magnetofection は、株の一次ニューロンは、リポフェクション関連毒性なしと同様の技術のひとつです。さらに、いくつかの日に体外エレクトロポレーション⁹に基づく技術とは異なり、成熟したニューロンのトランスフェクションを実行できます。ただし、この方法の欠点の 1 つは、ビーズが文化、DAPI のラベル付けでノイズの原因で核酸をバインドです。ウイルス感染は株 MNs; の最も効率的な方法で可能性が高いしかし、magnetofection では、ウイルスの生産および細胞の感染に必要な特定の安全手順は必要ありません。