JoVE Journal > Immunology and Infection
Summary
Abstract
Introduction
Protocol
Results
Discussion
Disclosures
Acknowledgements
Materials
References
Please note that all translations are automatically generated. Click here for the English version.
免疫与感染

Naive arkadaşları için kadın ve erkek üzerinden Amerikan Tripanozomlar cinsel iletim

Published: January 27, 2019
doi:
10.3791/57985
, , , , ,
1Chagas Disease Multidisciplinary Research Laboratory, Faculty of Medicine,University of Brasilia, 2Instituto Evandro Chagas

Summary

Trypanosoma cruzi Ajan Chagas hastalığının klinik olarak tanınan patoloji aniden geliştirmek uzun ömürlü asemptomatik enfeksiyondan üretir. Aşağıdaki araştırma Protokolü cinsel üst nesneden döl için aktarılan T. cruzi enfeksiyon çözülmeye bir kısa vadede ailesi tabanlı epidemiyolojik çalışma açıklar.

Abstract

Amerikan tripanozomiyasına insanlara triatomine hata ile kirlenmiş yiyecek, sindirim kan nakli veya hastane ve araştırma laboratuvarları kaza yayın yapıyor. Buna ek olarak, Trypanosoma cruzi enfeksiyon doğuştan bir chagasic anneden onun çoluk aktarılır, ancak rahimde kirlenme erkek ortak katkısı bilinmiyor. Yuva ve kümeleri amastigotes ve trypomastigotes yumurtalık granulosa hücreleri, goniablasts ve seminifer tübüllerin lümen bulguları T. cruzi enfeksiyonları cinsel yolla bulaşan öneririz. Burada araştırma Protokolü diploit kan mononükleer hücreler ve insan denekler haploit gamet parazit nükleer DNA gösteren bir aile çalışma nüfus sonuçlarını sunar. Böylece, üç bağımsız biyolojik örnek bir yıl ayrı toplanan T. cruzi enfeksiyonları cinsel döl için iletilen doğruladı. İlginçtir, özel T. cruzi antikor yok bağışıklık toleransı parazit antijen ile delik aile Döl çoğu. İmmün tolerans embriyonik gelişim ilk hafta sonra tavuk T. cruzi için ateşe dayanıklı gösterilmiştir ve kamçılamak-aşı yumurta yumurtadan civciv spesifik antikor üretmek koyamadık. Ayrıca, insan meni korumak intraperitoneally veya saf fareler T. cruzi amastigotes epididim, Seminifer tübül, vas deferens ve inflamatuar bir yokluğu ile rahim tüp vermiştir vajina içine cinsel ilißki üreme reaksiyonlar bağışıklık ayrıcalıklı organlarında. T. cruziyetiştiriciliği-saf arkadaşları ile enfekte erkek ve dişi fareler daha sonra döl için iletilen enfeksiyonlar edinimi sonuçlandı. Bu nedenle, nüfus ve sosyal kuruluşların ilgili sağlam bir eğitim, bilgi ve iletişim programı Chagas hastalığı önlemek için gerekli olarak kabul edilir.

Introduction

Trypanosomatidae memeli ev sahibi trypomastigote ve amastigote yaşam döngüsü aşamasında uğrar ve böcek-vector’ün epimastigotes olarak var ailesine ait protozoon parazit Trypanosoma cruzi (Reduviid: Triatominae) gut ve buna axenic kültür. Son yıllarda ülkede Chagas hastalığı varlığı triatomine hata ücretsiz1,2,3,4,5, kabul dört kıtada çeşitli çalışmalar göstermiştir 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13; Amerikan Tripanozomlar dağılım Latin Amerikan kökenli göçmenlerin Kuzey Yarımküre için başlangıçta atfedilen ama olasılığını otokton Chagas hastalığı vakalarının bazıları artık3,4 engellendi , 5 , 6 , 7 , 8 , 9 , 10 , 11 , 12 , 13 , 14. T. cruzi iletim yalnızca tanınabilir endojen kaynak gebelik15; yaklaşık yüzde 10’u yavru parazit chagasic annenin transferi atfedilir sperm cinsel ilißki ile rahimde enfeksiyon erkek ortak katkısı tanınmayan kalmıştır.

Bir yüzyıl önce müfettişler16,17 gözlenen hücre içi T. cruzi amastigotes yumurtalık granulosa hücrelerinde ve mikrop satır akut Chagas hastalığı vakaları testis hücreleri. Yuva ve T. cruzi trypomastigotes ve amastigotes granulosa yumurtalık hücrelerinin, goniablasts ve seminifer tübüllerin (Şekil 1) ölümcül akut Chagas hastalığı vakalarının lümen kümeleri organların bağışıklık ayrıcalık geliştirmek üreme olmadığında inflamatuar infiltratlar18,19. Son yıllarda birkaç deneysel çalışmalar yuva T. cruzi yuvarlak amastigote formları Seminifer tübül, epididim ve vas deferens de rahim, tüpler ve yumurtalık gibi akut virüslü fareleri granulosa hücreleri göstermiştir 1,20,21,22. Onların soyundan gelenler, T. cruzi nükleer DNA (nDNA) için ebeveyn Chagas hastalardan mitokondrial DNA insan haploit germ hattı hücreleri23‘, doğrulanmış protozoon transferini belgelemek için Ayrıca, aile çalışmaları sırasında ve parazit yaşam döngüsü aşamaları cinsel ilißki chagasic fareler24içinde tespit edildi. Bu bulgular tarafından enfekte T. cruzi –spesifik antikor1,25,26yokluğu konaklarda Döl elde bağışıklık toleransı üzerindeki raporları ile anlaşma vardır. Ayrıca, diğer kıta3,4,5,6,7,8 için endemik Chagas hastalığı yayılmasını önerilen epidemiyolojik raporları ,9,10,11,12,13 şimdi Chagas hastalığı cinsel iletimi için gösterilen deneysel çalışmalar tarafından1 desteklenen . Mevcut soruşturma epidemiyolojik aile çalışma Protokolü sunar ve T. cruzi enfeksiyon cinsel ilişki tarafından yayar gösterir.

Protocol

İnsan ve hayvan araştırma Komiteleri Brasilia Üniversitesi Tıp Fakültesi, insan denekler ve Laboratuvar hayvanlarının, tüm yordamları sırasıyla, araştırma protokol 2500.167567 ve 10411/2011 onayladı. Kamu Vakfı Hastanesi Gaspar Vianna (iletişim kuralı n º 054/2009 ve CONEP 11163/2009) Etik Komitesi ile uzatma için Bakanlığı Sağlık Ulusal Komisyonu insan araştırma (CONEP 2585/04) saha çalışması için ücretsiz izin formları onayladı. Protokol T. cruzi DNA diploit kan mononükleer …

Representative Results

Akut Chagas hastalığı vakalarının klinik ve parasitological sınavları tarafından tespit etmek için yapılan protokole göre bu araştırma amaçlı. Venöz kan örneği doğrudan mikroskobik inceleme ve parazit büyüme için tüp bebek kültürüne tabi tutuldu. Chagas hastalığı yirmi akut durumlarda kan T. cruzi gösterdi. T. cruzi ECI1 yalıtım araştırma Protokolü güvenli-ECI21 akut Chagas hastalığı ve DNA örnekleri olumlu DNA ayak çalışma nüf…

Discussion

Burada, ister insan Chagas hastalığı cinsel yolla bulaşan ilkinde T. cruzi kaynaklanıyor soruya cevap bir aile esaslı araştırma Protokolü tartışmak enfeksiyonlar. Kullanılabilir veri ve Chagas hastalığı hakkında bilgi ayrı ayrı tek tek3,4elde edildi çünkü erken çalışmalar T. cruzi enfeksiyonların cinsel iletim kanıtı muhtemelen sağlayabilir değil, 5,6</…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Biz laboratuvar olanakları ve kritik yorum Izabela Dourado, Carla Araujo, ve zeki Gomes ve Bruno Dalago ve Rafael Andrade teknik yardım kabul edersiniz. Bilim ilerleme (FAPDF), Ulusal Araştırma Konseyi, Bakanlığı Bilim ve teknoloji (CNPq/MCT) için temel ve ajansı için eğitim insan kaynakları, Milli Eğitim Bakanlığı için borçlu olduğumuzu (burunları / beni), bunlar desteklemek için Brezilya, araştırmalar.

Materials

BCIP and NBT redox system Sigma-Aldrich 681 451 001
Blood DNA Purification columns Amersham Biosciences 27-9603-01
d-ATP, [α-32P], 250 µCi.   Perkin Elmer   BLU012H
DNA, Solution Salt Fish Sperm AMRESCO 064-10G
dNTP Set, 100 mM Solutions GE Healthcare 28-4065-51
Eco RI Invitrogen 15202-021
Goat anti-human IgG- alkaline phosphatase conjugated Southern Biotech        2040-04
Goat anti-human IgG- FITC conjugated Biocompare MB5198020
Hybond – N+ nylon membrane GE Healthcare RPN303B
Hybridization oven Thomas Scientific 95-0031-02
Micro imaging software cell Sens software Olympus, Japan
Molecular probes labeling System Invitrogen 700-0030
Nsi I Sigma-Aldrich R5584 1KU
Plasmid Prep Mini Spin Kit GE Healthcare 28-9042-70
Plate reader  Bio-Tek GmBH 2015
Rabbit anti-chicken IgG-alkaline phosphatase conjugated Sigma-Aldrich A9171
Rabbit anti-chicken IgG-FITC conjugated Sigma-Aldrich F8888
Rabbit anti-mouse IgG- alkaline phosphatase conjugated Sigma Aldrich A2418 
Rabbit anti-mouse IgG-FITC conjugated Biorad MCA5787
Spin Columns for radio labeled DNA purification, Sephadex G-25, fine Sigma-Aldrich G25DNA-RO 
Taq DNA Polymerase Recombinant Invitrogen 11615-010
Thermal cycler system Biorad, USA 1709703
Vector Systems Promega A1380
DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Araujo, P. F., et al. Sexual transmission of American trypanosomiasis in humans: a new potential pandemic route for Chagas parasites. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 112 (6), 437-446 (2017).
  2. Teixeira, A. R. L., Nitz, N., Bernal, F. M., Hetch, M. M. Parasite Induced Genetically Driven Autoimmune Chagas Heart Disease in the Chicken Model. Journal of Visualized Experiments. (65), 3716 (2012).
  3. Kalil-Filho, R. Globalization of Chagas Disease Burden and New Treatment Perspectives. Journal of the American College of Cardiology. 66 (10), 1190-1192 (2015).
  4. Nunes, M. C. P., Dones, W., Morillo, A., Encina, J. J., Ribeiro, A. L. Chagas Disease: An Overview of Clinical and Epidemiological Aspects. Journal of the American College of Cardiology. 62 (9), 767-776 (2013).
  5. Pinazo, M. J., Gascon, J. Chagas disease: from Latin America to the world. Reports in Parasitology. 2015 (4), 7-14 (2015).
  6. Kessler, D. A., Shi, P. A., Avecilla, S. T., Shaz, B. H. Results of lookback for Chagas disease since the inception of donor screening at New York Blood Center. Transfusion. 53 (5), 1083-1087 (2013).
  7. Klein, N., Hurwitz, I. R. Globalization of Chagas Disease: A Growing Concern in Nonendemic Countries. Epidemiology Research International. , (2012).
  8. Pérez-Molina, J. A., Norman, F., López-Vélez, R. Chagas disease in non-endemic countries: epidemiology, clinical presentation and treatment. Current Infectious Diseases Report. 14 (3), 263-274 (2012).
  9. Hotez, P. J., et al. Chagas disease: "the new HIV/AIDS of the Americas". PLoS Neglected Tropical Diseases. 6, e1498 (2012).
  10. Schmunis, G. A., Yadon, Z. E. Chagas disease: a Latin American health problem becoming a world health problem. Acta Tropica. 115 (1-2), 14-21 (2010).
  11. Franco-Paredes, C., Bottazzi, M. E., Hotez, P. J. The Unfinished Public Health Agenda of Chagas Disease in the Era of Globalization. PLoS Neglected Tropical Diseases. 3 (7), e470 (2009).
  12. Teixeira, A. R. L., Vinaud, M., Castro, A. M. . Emerging Chagas Disease. In: Chagas Disease: – A Global Health Problem. 3, 18-39 (2009).
  13. Lee, B. Y., Bacon, K. M., Bottazzi, M. E., Hotez, P. J. Global economic burden of Chagas disease: a computational simulation model. Lancet Infectious Diseases. 13 (4), 342-348 (2013).
  14. Teixeira, A. R. L., Hecht, M. M., Guimaro, M. C., Sousa, A. O., Nitz, N. Pathogenesis of Chagas Disease: Parasite Persistence and Autoimmunity. Clinical Microbiology Review. 24 (3), 592-630 (2011).
  15. Murcia, L., et al. Risk factors and primary prevention of congenital Chagas disease in a nonendemic country. Clinical Infectious Diseases. 56 (4), 496-502 (2013).
  16. Chagas, C. New human trypanosomiasis. Morphology and lifecycle of Schizotrypanum cruzi, the cause of a new human disease. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 1, 159 (1909).
  17. Vianna, G. Contribution to the study of the Pathology of Chagas disease. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 3, 276 (1911).
  18. Teixeira, A. R. L., Roters, F., Mott, K. E. Acute Chagas disease. Gazeta Médica da Bahia. 3, 176-186 (1970).
  19. Teixeira, A. R. L., et al. Prevention and Control of Chagas Disease – An Overview. International STD Research, Reviews. 7 (2), 1-15 (2018).
  20. Rios, A., et al. Can sexual transmission support the enzootic cycle of Trypanosoma cruzi?. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 113 (1), 3-8 (2018).
  21. Lenzi, H. L., et al. Trypanosoma cruzi: compromise of reproductive system in acute murine infection. Acta Tropica. 71 (2), 117-129 (1998).
  22. Carvalho, L. O. P., et al. Trypanosoma cruzi and myoid cells from seminiferous tubules: Interaction and relation with fibrous components of extra cellular matrix in experimental Chagas’ disease. International Journal of Experimental Pathology. 90 (1), 52-57 (2009).
  23. Hecht, M. M., et al. Inheritance of DNA transferred from American trypanosomes to human hosts. PLoS One. 12, e9181 (2010).
  24. Alarcon, M., et al. Presencia de epimastigotes de Trypanosoma cruzi en el plasma seminal de ratones con infección aguda. Boletín Malariología y Salud Ambiental. 51, 237 (2011).
  25. Teixeira, A. R. L., et al. Trypanosoma cruzi in the Chicken Model: Chagas-Like Heart Disease in the Absence of Parasitism. PLoS Neglected Tropical Diseases. 5 (3), e1000 (2011).
  26. Guimaro, M. C., et al. Inhibition of Autoimmune Chagas-Like Heart Disease by Bone Marrow Transplantation. PLoS Neglected Tropical Diseases. 8 (12), e3384 (2014).
  27. Oliveira, C. I., et al. Leishmania braziliensis isolates differing at the genome level display distinctive features in BALB/c mice. Microbes and Infection. 6 (11), 977-984 (2004).
  28. Mendes, D. G., et al. Exposure to mixed asymptomatic infections with Trypanosoma cruzi, Leishmania braziliensis and Leishmania chagasi in the human population of the greater Amazon. Tropical Medicine, International Health. 12, 629 (2007).
  29. Moser, D. R., Kirchhoff, L. V., Donelson, J. E. Detection of Trypanosoma cruzi by DNA amplification using the polymerase chain reaction. Journal of Clinical Microbiology. 27 (7), 1477-1482 (1989).
  30. Da Silva, A. R. . Sexual transmission of Trypanosoma cruzi in mus musculus [MsD thesis]. , (2013).
  31. Ribeiro, M., et al. Can sexual transmission support the enzootic cycle of Trypanosoma cruzi?. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz. 113 (1), 3-8 (2018).
  32. Billingham, R. E., Brent, L., Medawar, P. B. Actively acquired tolerance of foreign cells. Nature. 172 (4379), 603-606 (1953).
  33. Burnet, F., Fenner, F. . The production of Antibodies. , (1949).
  34. Hasek, M. Parabiosis of birds during their embryonic development. Chekhoslovatskaia Biology. 2 (1), 29-31 (1953).
  35. Coura, J. R., Junqueira, A. C. V., Fernades, O., Valente, S. A., Miles, M. A. Emerging Chagas Disease in Amazonian Brazil. Trends Parasitology. Trends Parasitology. 18 (4), 171-176 (2002).
  36. Teixeira, A. R. L., et al. Emerging Chagas disease: Trophic network and cycle of transmission of Trypanosoma cruzi from palm trees in the Amazon. Emerging Infectious Diseases. 7 (1), 100112 (2001).
  37. Hazebroek, M., Dennert, R., Heymans, S. Idiopathic dilated cardiomyopathy: possible triggers and treatment strategies. Netherland Heart Journal. 20 (7-8), 332-335 (2012).
  38. Arimura, T., Hayashi, T., Kimura, A. Molecular etiology of idiopathic cardiomyopathy. Acta Myologica. 26 (3), 153-158 (2007).
  39. Dec, W. G., Fuster, V. Idiopathic Dilated Cardiomyopathy. New England Journal of Medicine. 33, 1564-1575 (1994).
  40. Niederkorn, J. Y. See no evil, hear no evil, do no evil: the lessons of immune privilege. Nature Immunology. 7 (4), 354-359 (2006).
  41. Smith, B. E., Braun, R. E. Germ cell migration across Sertoli cell tight junctions. Science. 338 (6118), 798-802 (2012).
  42. Garth, A., Wilbanks, J., Streilein, W. Fluids from immune privileged sites endow macrophages with the capacity to induce antigen-specific immune deviation via a mechanism involving transforming growth factor-β. European Journal of Immunology. 22 (4), 1031-1036 (1992).
  43. Meng, J., Anne, R., Greenlee, C., Taub, J., Braun, R. E. Sertoli Cell-Specific Deletion of the Androgen Receptor Compromises Testicular Immune Privilege in Mice. Biology of Reproduction. 85 (2), 254-260 (2011).
  44. Fujisaki, J., et al. In vivo imaging of Treg cells providing immune privilege to the haematopoietic stem-cell niche. Nature. 474 (7350), 216-219 (2011).
  45. Wood, K. J., Sakaguchi, S. Regulatory T cells in transplantation tolerance. Nature Review Immunology. 3 (3), 199-210 (2003).

Tags

Trypanosoma CruziChagas DiseaseSexual TransmissionBlood SamplesCell CulturePCR AnalysisDNA Extraction

Play Video
PDF
DOI
DOWNLOAD MATERIALS LIST
Cite This Article
Almeida, A. B., Araújo, P. F., Bernal, F. M., Rosa, A. d. C., Valente, S. A., Teixeira, A. R. Sexual Transmission of American Trypanosomes from Males and Females to Naive Mates. J. Vis. Exp. (143), e57985, doi:10.3791/57985 (2019).
Download Citation
Reprints and Permissions

View Video

✖

To prove you're not a robot, please enter the text in the image below

CAPTCHA Image
Play CAPTCHA Audio
Refresh Image