تقييم عامل إيمونوستيمولاتوري: اللمفاوية استخراج الأنسجة وحقن تنشيط الخلية الجذعية تعتمد على الطريق
Summary
يتم وصف الإجراءات التجريبية لاستخراج اللاحقة من الأنسجة اللمفاوية لاختبار تنشيط الخلايا الجذعية اللمفاوية بعد العلاج من نانوماتيريال إيمونوستيمولاتينج.
Abstract
تحليل لتنشيط الخلايا المناعية في الأنسجة اللمفاوية ضروري لتقييم عامل علاجي جديد للعلاج المناعي أو التطعيم،. هنا، نحن التحقيق في الآثار المناعية لمنبه المناعة الحمض الدهني الرواية في شكل نانوحبيبات من طرق الإدارة المختلفة في الماوس: عن طريق الفم، وداخل الآنف، وتحت الجلد، قاطع، داخل، وعن طريق الحقن الوريدي. هذه الحقن سوف تؤثر بصورة مباشرة الاستجابة المناعية، وحصاد الأنسجة اللمفاوية والتحليل لتنشيط الخلايا الجذعية (DC) في الأنسجة أجزاء مهمة من هذه التقييمات. استخراج العقد الليمفاوية الشعاعي (mLNs) هامة ولكن معقدة جداً بسبب حجم وموقع هذا الجهاز. ويرد إجراء التدرجي لحصاد العقدة الليمفاوية الاربية (إيلن)، ومعرض، والطحال وتحليل التنشيط DC بالتدفق الخلوي.
Introduction
التقدم في علم المناعة والمواد النانوية أدت إلى وفرة استراتيجيات العلاجية الجديدة المحتملة للتطبيقات في الطب الحيوي، بما في ذلك إيصال الأدوية و immunostimulation. الأمثل لمسار الإدارة أحد جوانب حيوية التي تؤثر على كفاءة وكلاء immunostimulatory. Immunostimulatory نانوحبيبات (البرنامج النووي العراقي) تتكون من الحمض النووي هو adjuvant نانو-المناعي المطورة حديثا تجميعها ذاتيا بفصل ميكروفاسي بسبب هيكل amphiphilic الحمض الدهني1. لذلك، بروتوكولات لمواده المتعلقة بالإدارة للمواد1 في فيفو عبر طرق مختلفة، وثلاثة إجراءات لقطع الأنسجة مناسبة مثل العقدة الليمفاوية الاربية (إيلن) والشعاعي LN (مليون)، والطحال، ووصف. أخيرا، تم تحليل هذه الأنسجة لتنشيط الخلايا الجذعية (DC)، خلايا مستضد-عرض أقوى في الجهاز المناعي. يمكن أيضا تطبيق هذا البروتوكول لتقييم المستضدات أو أجسام أخرى مأمونية المناعي2.
نحن اختبار صياغة البرنامج النووي العراقي لأنها عامل قد أظهرت الوعد العظيم. البرنامج النووي العراقي مستقبل مثل عدد القتلى 9 (TLR9) adjuvant المواد التي تحتوي على الأحماض النووية، أي تقييم ل immunostimulation كفاءة المطلوبة لاختبار طرق الحقن المختلفة3. وفي هذا السياق، الحث على وحدات تحكم المجال Dc نقطة قوية في فيفو التقييم. بعد أن يتم فاجوسيتوسيد جزيئات مستضد أو إيمونوستيمولاتوري بوحدات تحكم المجال Dc في الأنسجة المحيطية أو الدم، ترحيل هذه الخلايا إلى الأجهزة اللمفاوية مثل الطحال ولنس4،5. وهكذا، وقد تم تحليل التنشيط DC في الطحال وإيلن، ومعرض لحقن الحيوانات. حصاد هذه الأنسجة بشكل صحيح ذلك أيضا حاسمة لتقييم الاستجابة المناعية ل رواية أخرى الأعشاب أو مسببات الأمراض5. هذه الأنسجة حصاد مهم أيضا لوضع منهجية مناعية رواية كعلاج سرطان. وعلاوة على ذلك، يمكن استخدام هذا البروتوكول للتحقق من فعالية الأدوية الأخرى، مثل نقص المناعة البشرية المضادة الفيروسات المداواة6.
Protocol
Representative Results
Discussion
لقد تحققت العديد من أوجه التقدم في تكنولوجيا النانو وعلم المناعة من خلال الأبحاث العلاجية لإيصال الأدوية و immunostimulation. الاختيار الدقيق لأسلوب الحقن المعروف أن المهم بالنسبة immunostimulation، الذي كان محور هذه الدراسة.
تم تقييم طرق الحقن المختلفة بطبيعة الحال غير السامة والقابلة ل?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
هذا البحث كان يدعمها “البرنامج اكتشاف المواد الإبداعية” عن طريق الوطنية بحوث مؤسسة من كوريا (جبهة الخلاص الوطني) تمول وزارة العلوم وتكنولوجيا المعلومات والاتصالات و “تخطيط المستقبل” (جبهة الخلاص الوطني-2017M3D1A1039421)، و “برنامج التكنولوجيا الحيوية البحرية” تموله وزارة من المحيطات ومصائد الأسماك، وجمهورية كوريا ومنحة (20150220).
Materials
| Material | |||
| phosphate buffer saline | Corning | 21-040-CVR | Washing organs |
| (PBS, pH 7.4) | |||
| isoflurane solution | Aesica Queenborough limited | 26675-46-7 | Anesthesia process |
| Tuberculin 1mL syringe – | Junglim | N/A | Injection |
| 50 mL conical tube | S.P.L | 50050 | Anesthesia process |
| 1mL Insulin Syringe | (BD Ultra-FineTMII)_short needle | 324826 | Intramuscular Injection |
| DMEM High Glucose | Hyclone | SH30081.01 | Storing organs |
| Histopaque | Sigma-Aldrich | 10771 | FACS analysis |
| Ethyl alcohol anhydrous 99.5 % | Daejung | 4022-4110 | Disinfectant |
| Equipments | |||
| FineCycler C100 (Thermocycler) | Ssufine | – | Anealing |
| Centrifuge | Centrifuge | ||
| FACS tube | FALCON | 2052 | FACS analysis |
| Automated High-performance Flow Cytometer | BD (USA), FACSVerse | – | FACS analysis |
References
- Park, H. . Preparation of dodecynyl modified DNA nanoparticles with unmethylated CpG adjuvant and ovalbumin for immunostimulation. , (2016).
- Jin, J. O., Park, H., Zhang, W., de Vries, J. W., Gruszka, A., Lee, M. W., Ahn, D. R., Herrmann, A., Kwak, M. Modular delivery of CpG-incorporated lipid-DNA nanoparticles for spleen DC activation. Biomaterials. 115, 81-89 (2017).
- Pal, I., Ramsey, J. D. The role of the lymphatic system in vaccine trafficking and immune response. Advanced Drug Delivery Reviews. 63 (10-11), 909-922 (2011).
- Jin, J. O., Kwak, M., Xu, L., Kim, H., Lee, T. H., Kim, J. O., Liu, Q., Herrmann, A., Lee, P. C. W. Administration of soft matter lipid-DNA nanoparticle as the immunostimulant via multiple routes of injection in vivo. ACS Biomaterial Science & Engineering. 3 (9), 2054-2058 (2017).
- Worbs, T., Hammerschmidt, S. I., Förster, R. Dendritic cell migration in health and disease. Nature Review Immunology. 17 (1), 30-48 (2017).
- Milling, S. W. F., Jenkins, C., MacPherson, G. Collection of lymph-borne dendritic cells in the rat. Nature Protocols. 1 (5), 2263-2270 (2006).
- Desormeaux, A., Bergeron, M. G. Lymphoid tissue targeting of anti-HIV drugs using liposomes. Methods in Enzymology. 391, 330-351 (2005).
- Machholz, E., Mulder, G., Ruiz, C., Corning, B. F., Pritchett-Corning, K. R. Manual restraint and common compound administration routes in mice and rats. Journal of Visualized Experiments. (67), (2012).
- Turner, P. V., Brabb, T., Pekow, C., Vasbinder, M. A. Administration of substances to laboratory animals: routes of administration and factors to consider. Journal of the American Association for Laboratory Animal Science. 50 (5), 600-613 (2011).
- . . General anesthesia of mice and rats. , (2016).
- . . Guidelines for the Euthanasia of Animals. , (2013).
- . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration I. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
- . JoVE Science Education Database. Lab Animal Research. Compound Administration III. Journal of Visualized Experiments. , (2018).
- Mebius, R. E., Kraal, G. Structure and function of the spleen. Nature Review Immunology. 5 (8), 606-616 (2005).
