Dysfunksjon av dopamin striatal er involvert i utviklingen av kliniske symptomer i flere nevrokognitive sykdommer. Dopamin D1 reseptorer finnes i prefrontal cortex (PFK) og striatal områder av hjernen og påvirke tungt kognitive prosesser¹, inkludert minne, timelige behandling og lokomotiv atferd^{2,3 , 4 , 5 , 6 , 7}. forrige studier belyst at endringer av dopamin D1 reseptorer var knyttet til utviklingen av oppmerksomhet underskudd hyperaktivitet disorder (ADHD)⁸nevrokognitive symptomene i schizofreni^{9, 10} og stress mottakelighet¹¹. Spesielt i schizofreni indikerte fantes et positron utslipp tomografi (PET) studier at bindingen evne til dopamin D1 reseptorer i prefrontal halvdelene var svært knyttet til kognitiv underskudd og tilstedeværelsen av negative symptomer¹¹. Dendrittiske veksten av eksitatoriske nerveceller i prefrontal cortex regulert av dopamin D1 reseptoren lindrer stress mottakelighet. Videre kan knockdown D1 reseptoren i mediale prefrontal kortikale (mPFC) neurons forbedre de sosiale nederlag stress-indusert sosiale unngåelse¹².

Her introduserer vi en teknikken av RNA i situ hybridisering visualisere enkelt RNA molekyler i en celle med frisk-frosne vevsprøver. Nåværende teknikken har flere fordeler fremfor metoder som finnes i gjeldende litteratur. Først gjeldende prosedyre bevarer romlige og morfologiske sammenheng av vev og ble utført på frisk-frosne vevsprøver slik at andre prosedyrer krever friske, ikke-innebygd vev kan kombineres med gjeldende metoder. Lignende fremgangsmåter i formalin-fast og parafin-embedded vev har illustrert at enkelt transkripsjon oppløsning kan oppnås ved hjelp av en RNA i situ hybridisering teknikk¹³. Påvisning av RNA på enkelt transkripsjon nivå gir overlegen følsomhet til lav kopi talluttrykk samt muligheten til å sammenligne genuttrykk nivået av individuelle celler som kan oppnås ved andre nukleinsyre gjenkjenningsmetoder som polymerase kjedereaksjon (PCR) teknikker. I tillegg opprettholder det aktuelle metoden bilder med høy signal-til-støy forholdet gjennom svært spesifikke RNA sonder som hybridiserte til enkelt mål RNA transkripsjoner, og sekvensielt bundet med en kaskade av signal forsterkning molekyler i deteksjon system. Til slutt gir den nåværende teknologien mulighet til å vurdere flere biologiske systemer med sin mål-spesifikke proprietære sonder, i stedet for å begrense våre undersøkelser bare én klasse av systemrelaterte markører som proteinet oppdagelsen av immunohistochemistry metoder.

I vår studie brukte vi denne romanen RNA i situ hybridisering for å evaluere Drd1α reseptor uttrykk i nucleus accumbens (NAc) og tyrosin hydroksylase (TH) uttrykk i substantia nigra (SNR) av både mannlige og kvinnelige F344/N rotter. Nyskapende RNA i situ hybridization aktivert vi mekanismer påvirke både DA opptak og DA utgivelsen samtidig, forbedre vår forståelse av striatal DA systemets kompleksiteten. Her beskriver vi prosedyren for frisk-frosne hjernen skiver og gir metoder for analyse for ulike flekker mønstre: “diskret dot” eller “klynger”.