Kısmi Lobular Hepatectomy: Morfolojik karaciğer rejenerasyonu için cerrahi bir Model

Bir organ yeniden veya form ve fonksiyon, geri yüklemek için yetenek çoğunlukla evrimsel zamanla kaybolur düşünülmektedir. Yetişkin memeli karaciğer akut kimyasal veya fiziksel yaralanma sonra yeniden üretim potansiyelini hipertrofisi dalgaları ve hücre bölünmesi, işlevsel bir ama kaynaklanan kaç tur sonuçlanan tüm kalan tetkikine seferberlik dahil tespit edilmiştir mimari farklı organ^1,2,3,4,5. Son zamanlarda, yaralanma yaşam^6,7,8ayının ilk haftası içinde rejeneratif cevaben yenidoğan memeli organların karakterize etmek çalışmalar başladı. Bu çalışmalar yenidoğan geliştirme sırasında yaralı zaman bazı memeli organlar yerine telafi edici büyüme veya fibrozis^7,8morfolojik yenilenme ile yanıt göstermiştir.

Son yıllarda yapılan çalışmalarda genel yapısı ve işlevi rejenerasyon erken neonatal dönem^6,7,8sırasında oluştuğunu göstermiştir. Kimyasal yaralanma veya yönetim etanol^9,10,11, asetaminofen^{12,13,14,15 kurulan karaciğer hasarı protokolleri içerir} , karbon tetraklorür^16,17,18,19, % 70 kısmi hepatectomy^4,20,21veya sol kaldırılması ve medyan loblar. Kimyasal yönetim hepatosit hücre ölüme yol açar, ama genellikle mikro ve makro yapıları olduğu gibi bırakır. Genel olarak hepatik mimarisi değil oblitere gibi morfolojik rejenerasyon kolayca bu bağlamda okudu olamaz. % 70 kısmi hepatectomy dikiş tüp ligasyonu kanamayı durdurmak gerekli olan büyük gemilerin içerir ancak fizyolojik olmayan bir çevre damarlara kalıcı bozulma ile bırakır. Ayrıca, bu yöntem yalnızca yetişkin kemirgenler kullanılan ve yenidoğan bebeklerin onun uygulamaya Teknik olarak son derece zordur. Sol lob apeks 20-30 oranında bir yeni doğan P0 fare kaldırıldı bir yöntem bu düşünceyle geliştirdiğimiz (Şekil 1A-1B). Bu yöntem cerrahi olarak muhafazakar, minimal invaziv, teknik olarak zor ve morfoloji damarlara, rejenerasyon gerçekleşmesi için oda bırakarak ligasyonu olmadan kaybı brüt yol açar. Aşağıda açıklanan adım adım iletişim kuralı elde edilen herhangi bir araştırmacı bir kısmi lobular hepatectomy Doğum sonrası yaşam erken dönemlerinde memeli yenidoğan yenilenme eğitim için yenidoğan fareler üzerinde gerçekleştirmek izin verir. Gibi yaşamın daha sonraki evrelerinde karaciğerde kullanılabilmesi için bu yöntem aynı zamanda rejeneratif tıp ve kök hücre biyolojisi, karşılaştırmalı çalışmalar için açık uygulamaları var.

En yaygın akut karaciğer hasarı çalışmalar kimyasal kaynaklı hasar, Yetişkin karaciğer amputasyon veya % 70 kısmi hepatectomy vardır. Kimyasal hasar kez asetaminofen, karbon tetraklorür veya etanol intravenöz mayi veya sözlü yönetim içerir ve nispeten kolay ve non-invaziv yaralanma modelidir. Daha önce tartışılan, kimyasal zarar sonuçlarında hepatosit hücre ölümü, ama sık sık yaprakları stroma ve parankimi yapıları sağlam, morfolojik rejenerasyon hakkında iddiada zorlaştırır. Kimyasal zarar kez Hepatik damarları üzerinde mevcuttur ve hücre özgü yaralanma, eğitim için yararlı bir yöntem yapım merkezleri ancak aynı zamanda bütün organ düzeyinde, gemiler daha fazla–dan yer alan ve bu olabilir diğer nüfus sorgulamaya zorlaştırır yenilenmesine katkıda bulunur. Bu sınırlamaları rağmen kimyasal hasar hala bir fizyolojik açıdan son derece uygun ve faydalı yaralanma model kalır.

Yetişkin % 70 kısmi hepatectomy hepatik damarlara ligasyonu takip sol ve medyan loblar kaldırılmasını içerir. Hepatectomy cevaben de karakterize: uzvunu karaciğer 14 gün sonrası % 70 kısmi hepatectomy kalan sağ ve kaudat lob tetkikine özgün hasarsız lob bundan fena halde farklı bir mimari geliştirir hipertrofisi ve hücre bölünmesi^4,5birkaç tur tabi. Bu kayıp kitle ve fonksiyonu, yapar ama iki uzvunu loblar yeniden oluşturmak başarısız olur ve bu nedenle brüt morfoloji yerini almaz. Sonuç olarak, % 70 kısmi hepatectomy yaralanma yanıt telafi edici büyüme mekanizmaları sınırlı yenilenme ile çalışmak yararlıdır.

Burada, tam bir yenidoğan kısmi lobular hepatectomy için bir protokol açıklayın. Uygun hayvan seçimi ve hazırlık, cerrahi alan hazırlık, cerrahi ve kurtarma yordamı içerir. En iyi duruma getirme ve bu adımların her biri uyum Protokolü’nün farklı uygulamalar için gerekli olabilir.

Biz kapsamlı bir şekilde gerçekleştirilen ve bu protokol üzerinde vahşi türü C57BL/6J pups (JAX 000664) en iyi duruma getirilmiş, ancak, farklı hücre popülasyonlarının ve mekanizmaları rejenerasyon çalışmaya, ayrıca çeşitli Cre yataklık fareler de dahil olmak üzere çeşitli transjenik hayvanlar kullanılır ve CreERT2 transgenes ve/veya knock-ins (Axin2^CreERT2 JAX 018867, ve Sox9^CreERT2 JAX 018829) gibi gökkuşağı ve mTmG sistemleri (R26^VT2/GK3, floresan gazetecilere ile birlikte R26 ^mT/mG) ^{22 , 23}. sağkalım sonuçları ya da yeniden üretim potansiyeli yok farklılıkları tespit edildi gibi farklı fare suşları, bu yöntemi değiştirmek gerek yok bulduk.

Farklı hayvan suşları kullanmaya ek olarak, biz de kısmi lobular hepatectomies 4-hidroksi-Tamoksifen ve 5-ethynyl-2 ‘-deoxyuridine (EdU) gibi küçük moleküller ile tedavi yenidoğan fareler üzerinde yapılır. O Mısır yağı morbidite önemli bir sebebi bulundu gibi dimetil sülfoksit (DMSO) ve etanol solvent kullanılmıştır. Aksi takdirde küçük moleküllerin mayi yönetim hayatta kalma veya rejeneratif sonuç etkilemedi bulduk. Bu iletişim kuralı yeniden oluşturma işlemi, çeşitli açılardan sorguya çekmek için diğer küçük moleküller ile kullanmak için adapte olacağını tahmin ediyorum.

Yenidoğan fare cerrahi teknik olarak zor olabilir ve hayvan işleme ve mikroskobik diseksiyon özel uzmanlık gerektirebilir. Hayvancılık uzmanlığı anne yamyamlık önlemek için gerekli cerrahi ve acil kurtarma süresi boyunca.