豚鼠耳蜗植入术

所有动物实验由地方动物福利委员会和奥地利联邦部批准了科学、研究和经济。 1. 准备手术所需的设备和设置 定位手术显微镜, 钻孔, 加热板和脉冲脉搏, 以方便和有效地处理在手术期间。根据制造商手册检查设备的功能。确保加热盘设置在38摄氏度, 以保护动物在手术中不受低温的侵害。 戴上帽子和面具。 进行手术手消毒。用肥皂精心洗手。干手, 然后使用酒精洗手液消毒手。手干后戴上手套。 准备消毒的手术器械和人工耳蜗植入所需的设备。请参阅本议定书中用于豚鼠 CI 植入手术器械和设备的材料表。 当复合动作电位 (CAP) 的测量是有意的, 准备一个约3.5 厘米长的聚四氟乙烯绝缘金丝, 小心地去除两端的绝缘部分使用微钳 (约3毫米从一端和5毫米从另一端)。准备第二块金线 (大约2.5 厘米) 与绝缘末端大约5毫米. 将准备好的电线放入酒精或消毒剂中。 2. 麻醉、药物和动物制剂 称量动物。注意: 动物使用的是女性邓肯-哈特利白化豚鼠。使用的动物的重量, 是大约4-6 星期老, 范围从300到 400 g。 根据动物的体重准备手术所需的麻醉剂和药物。准备0.72 毫升的麻醉剂混合物, 包括0.06 毫升氯胺酮 (100 毫克/毫升), 0.18 毫升 medetomidine (1 毫克/毫升), 0.12 毫升咪达唑仑 (5 毫克/毫升) 和0.36 毫升芬太尼 (50 µg/毫升) 手术的400克豚鼠。见表 1的麻醉剂的重量为基础剂量。 用27克针将氯胺酮、medetomidine、咪唑安定和芬太尼的混合物注射到动物颈部的脂肪垫上。见表 1 , 以重量为基础的剂量的麻醉剂。把笼子盖住, 在安静的地方把动物留在10分钟, 然后再继续。 润滑动物的眼睛, 让他们在整个过程中润滑。剃掉动物的头, 把注意力集中在耳后区域, 以允许足够的外科手术进入泡。 将动物放置在发热板上, 并确保该动物与加热板不直接接触以防止热烧伤。将脉冲脉搏探针放在动物的脚上。然后用一个小喉镜仔细地打开动物的嘴巴, 用吸盘把整个口腔从食物中清理干净。 用喉镜把动物的嘴巴打开。小心地将胃管插入到动物的食道中, 慢慢地将其推向胃的方向, 直到感觉到阻力。 监测动物的 O2-饱和度, 确保胃管不在气管内。如果在 O2饱和度下降, 并在动物完全氧合后再试, 请取出胃管。 用23克针将生理盐水、5% 葡萄糖和恩诺沙星的混合物注入动物颈部的脂肪垫中。 用酒精洗手液消毒手。戴上新的干净的手套。 用聚维酮碘和70% 乙醇交替磨砂制备外科手术场, 覆盖动物。使用自粘窗帘或毛巾夹, 以确保只有手术领域保持发现在过程中。 皮下注射0.1 毫升2% 利多卡因溶液到计划切口区域足够的局部麻醉和位置的动物侧身。 重新剂量的动物与¼的初始剂量的麻醉混合物每30分钟后, 第一次注射, 以保持足够的麻醉。 3. 人工耳蜗植入术 使用手术刀在耳廓后执行大约2-3 厘米皮肤切口3-5 毫米。在必要时使用双极性烧灼, 以减少出血。注: 麻醉深度应在第一次切口前缺乏踏板提取证实。这项试验应每15-20 分钟重复一次, 以监测整个过程中的麻醉深度。 在使用15手术刀或手术剪刀 palpating 听觉泡后, 小心地切开耳后区的肌肉。注: 触及听觉泡为突出的肌肉。 用 raspatory 或棉花芽轻轻地推开泡的肌肉。使用牵引器来暴露切口的全长, 并有不受阻碍地进入泡。 使用15手术刀的尖端钻一个洞到泡。仔细旋转手术刀, 直到骨头穿孔, 以便检查中耳结构。 扩大 bullostomy 的需要, 以确保耳蜗和圆形窗口利基的基础转向可以充分发挥可视化。将动物的头部定位在弯曲的位置, 以便进入这些结构。用一小块压缩 bullostomy 的面积来防止血液和胞外液在中耳内流动。注意: 头部的屈折位置可能会阻碍动物的呼吸道。因此, 需要经常检查动物的氧饱和度。 把动物放在俯卧的位置。通过执行矩形切口和去除皮肤来暴露动物的顶点。用手术刀解剖骨膜, 从任何其他组织或血液中清除骨。 当盖帽测量意欲时, 完成 3.5 cm 聚四氟乙烯绝缘的金导线的准备通过形成一个小钩与微型钳在导线的末端, 已经绝缘了3毫米。 当盖帽测量意欲时, 指南末端的金线, 已经被绝缘了5毫米, 被皮下到顶点通过一个 18 G 外周静脉导管使用一个微型钳。另一只手用另一个微钳将导线的钩端仔细地引导到中耳。 当盖帽测量意欲时, 活用动物的头通过 bullostomy 想象圆的窗口适当位置的区域。使用另一只手钩金线的骨突出的圆形窗口利基使用微钳。 在金丝上保持温和的张力, 并将其固定到 bullostomy 的颅骨边缘, 用 10-15 µL 的组织胶水, 使用1毫升注射器, 用27克针。避免将胶水移入中耳。看图 1为一张圆的窗口区域的一个术中图片与金子导线原位。 当帽测量是有意的, 连接绝缘端的黄金线的设备用于测量听觉电位和执行基线上限测量。见 Honeder 等, 2016, 详细描述的上限测量例行执行在我们的实验室。12 把动物放在俯卧的位置。钻2孔1毫米前的 lambda 缝合使用1毫米毛刺, 而不造成损坏的硬脑膜。植入2不锈钢螺丝2mm 入头骨。注: 螺钉用作电极连接器的固定点。根据接头尺寸调整螺钉之间的距离。 使用18克外周静脉导管引导电极从连接器到泡在组织层尽可能接近头骨。 根据制造商手册, 将牙科水泥粉与用于牙科水泥粉的液体混合使用刮刀。 用刮刀将 0.5-0.7 毫升的半流体牙科水泥放在螺钉之间。将电极的接头放置在螺钉之间。 保持连接器的位置, 直到牙科水泥硬化。确保螺钉被水泥包裹, 以使接头稳定固定。 把动物放在侧面。小心地钻 cochleostomy 1 毫米从圆窗口利基使用0.5 毫米金刚石毛刺在自转率5000回合每分钟。 小心地将电极插入到 scala 索的深度4毫米。取出电极并重复插入。见图 2用于豚鼠耳蜗植入电极。 使用直针, 用一小块肌肉封住 cochleostomy 区域。用1毫升注射器, 用27克针将电极固定在 bullostomy 的颅骨边缘, 用10µL 的组织胶水。 准备3.14 中提到的牙科水泥。用刮刀仔细关闭 bullostomy 约0.3 毫升的牙科水泥。用5-0 可吸收缝线关闭耳后切口。 把动物变成俯卧的位置。 当盖帽测量意欲时, 用组织钳抓住在动物的顶点的长方形切口的后缘。用剪刀与另一只手做一个皮下隧道约2厘米长在动物的颈部。 当 CAP 测量的目的, 植入2.5 厘米金线皮下到动物的颈部使用镊子。将较短的绝缘端焊接到动物顶点上的连接器的指定销上。 当盖帽测量意欲时, 焊料圆的窗口小生境电极 (金导线) 到连接器的适当的别针在动物的顶点。 在连接器顶部涂上更多的牙科水泥, 以充分覆盖绝缘销和电极。 当 CAP 测量是有意的, 根据研究协议执行术后测量。 4. 术后护理 应用 atipamezole 和马西尼皮下手术和测量, 以对抗麻醉。 应用生理生理盐水作为液体替代物, 以支持动物从手术中恢复。 将动物置于加热灯下, 直到它完全从麻醉中恢复, 并开始在笼子内移动。 通过将加热灯放在大约50厘米的动物上防止热疗或烧伤。确保动物的体温始终介于37.5 摄氏度和39摄氏度之间。 检查动物的前庭损伤的症状, 如眼球震颤, 盘旋或滚动。13,14 在术后两天内, 应用丁丙诺啡止痛, 每天二次镇痛。注: 在第一次应用丁丙诺啡术后, 请确保该动物已完全恢复, 并有稳定的呼吸。这种药物的应用, 而动物仍然在麻醉下可能导致呼吸道抑郁症。 在手术后的头3天内, 对动物进行称重, 以检测在这段时间内可能会造成的体重减轻。注: 在手术后的头3天内, 体重损失约为 10%, 应该被认为是常见的。这种减肥是暂时的, 将在几天内恢复。