下大静脈狭窄: 深部静脈血栓症のマウスモデル

動物のすべてのプロシージャは、動物福祉倫理的な調査機関および英国ホーム オフィス (イギリス、プロジェクト ライセンス 40/3745) によって承認されました。C57BL/6 背景、8-12 週齢、体重 19 25 g、両方の性別の上でマウスを使用します。 1. 動物の麻酔 誘導室にマウスを置き、5% 100% 酸素とイソフルランの混合物によって麻酔を誘導します。使用マウスは完全に移動を停止するまでの 0.5 L/min の流量を待つと呼吸の頻度は稀になります。 商工会議所からマウスを外し、電気クリッパーと腹部を剃る。腹腔内の汚染を避けるために可能な限り徹底的に腹部から髪を削除します。 仰臥位でマウスを置き、マウスの鼻に麻酔システムにリンクされている円錐を配置します。2-3% (正確な割合が動物から動物を異なる場合) にイソフルランの割合が低下します。動物は寝ているその呼吸あえぎ通常、回避よりも低くされていることを確認します。あえぎが発生した場合、0.5% イソフルランの割合を減らします。 適切な anesthetization を確認し、それが否定的な場合にのみ手術を開始するペダルの反射を確認します。乾燥を防ぐため目に獣医軟膏を適用します。 適用抗殺菌液 (1% ヒビテン) マウスの腹部とワイプ滅菌綿を使用して領域は、手術部位 (例えば、内側から循環的に外側へ) の潜在的な再汚染を除く方法で芽します。3 回繰り返します。 2. 下大静脈狭窄とマウスの回復のアプリケーション 注: すべての楽器同様 (綿棒、ガーゼ、生理食塩水等) の材料として手術領域の接触を滅菌する必要があります。オペレーターは、手術前にスクラブし、プロシージャの間に滅菌手袋とガウンを着用する必要があります。顕微鏡のハンドルは、滅菌アルミホイルでラップされます。 手術前と全体の実験期間中に、マウス抗痛み治療を与えます。たとえば、ブプレノルフィン 0.1 mg/kg 皮下 30 分前に手術、その後 12 時間毎まで動物を安楽死を使用します。この方法では血栓症は無菌性炎症に同様に成長するとは、麻酔前投薬として抗炎症薬を使用しないでください。 滅菌ドレープとマウスをカバーし、外科サイトを公開するドレープに穴をあけます。はさみを使って、腹部正中線、胸骨からダウン 1.5 cm に沿って切開を行います。綿棒を使用して、マウスの左側に腸を外在、乾燥を避けるために暖かい (37 ° C) を生理食塩水に浸した滅菌ガーゼで覆います。 下大静脈と左腎静脈と下大静脈の融合のサイトから尾側方向の側枝 (場合があります 0、1、またはそれらの 2) を特定します。として可能な限り下大静脈に近い不活性プロレン縫合を 7-0 のすべての目に見える側面枝を縛る。 鉗子と側枝ではなく、直接片手に鉗子とそれらを囲む脂肪質のティッシュを持ってそれらを引き出すし、一方で鉗子で枝の下にトンネルを作るを保持しないでください。背面枝は閉じないでください。 鉗子で周囲の組織を持ち、プルを下大静脈と左と下大静脈、大動脈正確下大静脈と左腎静脈の間の角度で小さい区域の張力を作り出します。下大静脈も 2-3 mm 以下 (尾側方向) から大動脈を区切ることは事実上不可能であることを考慮します。 右手を大動脈と下大静脈の穴鉗子先端の左右逆の動きを使用してください。覚えておいてより多くの動きを作った、容器の損傷の可能性が高く。理想的には、3 – 5 の動きの数を最小化しようとします。 約 2 cm の長さの 7-0 不活性プロレン縫合の部分を準備します。演算子の左側下大静脈に近くでマウスの腹腔内にそれを配置します。 下大静脈と左もう一度プルします。下大静脈の反対側に、ヒントが表示される大動脈と下大静脈間の穴にあなたの右の鉗子の先端を挿入します。貫通穴 (図 3A) 縫合糸とそれを引き戻すを取る。 縫合糸で仮結び目を作るが、終了しません。結び目にフックとして曲がって 30 G 針 (「スペーサー」) を配置して今閉じます (図 3B)。 スペーサー (図 3C) を削除します。 綿と腹腔内に腸の芽、それ均等にそれらを配布を返します。 連続的なループを使用して 6-0 vicryl の縫合糸で腹膜を閉じます。結び目として最初と最後のループを閉じます。 金属のステープルを使用して近い皮。 マウスを暖かい (37 ° C) の 0.5 ml 注入有機物の液体のバランスを回復する皮下グルコースを生理食塩水。 暖かい (25 ° C) 商工会議所や部屋で個々 のケージにマウスを置くし、食べ物を入れてケージの中の水をゲルします。マウスは完全に (通常、約 1 h) 回復までを観察します。