Transuretrale Instillation Procedure in volwassen mannelijke muis
Summary
Transuretrale instillatietest is een uitdagende procedure en is niet goed beschreven in de literatuur. Het doel van dit manuscript is om een techniek voor transuretrale inbrengen van een katheter voor intravesicale levering van vloeistoffen met werkzame stoffen in de urineblaas en/of de prostaat bij volwassen mannelijke muizen te beschrijven.
Abstract
Transuretrale instillation kan worden gebruikt voor het leveren van verschillende oplossingen met werkzame bestanddelen (bijvoorbeeld drugs, chemische stoffen, bacteriën en virussen) lokaal in de urineblaas diermodellen aandoeningen van de blaas veroorzaken of evalueren de effectiviteit van intravesicale behandelingen. Meest knaagdier modellen van de lagere urinewegen (LUT) pathologieën zijn geïnduceerd in vrouwelijke muizen verschuldigd aan gebruiksgemak intravesicale instillation van de stoffen via de vrouwelijke urinebuis. Echter, als gevolg van anatomische verschillen tussen de vrouwelijke en mannelijke LUT, transuretrale instillation in een mannelijke muis heeft een zeer uitdagend procedure geacht, en het is niet eerder beschreven. In dit manuscript bieden wij een gedetailleerde beschrijving van het opstellen van polyethyleen (PE) slang voor latere inbrengen in de urinebuis van een mannelijke muis. Daarnaast bespreken we de ideale soorten PE buizen worden gebruikt afhankelijk van de gewenste plaats van inoculatie. Daarnaast beschrijven we punt door punt hoe voor te bereiden van een dier voor een succesvolle transuretrale instillation te voorkomen van schade aan de urethra en zorgen voor de levering van de oplossing naar de gewenste locatie. De procedure wordt gestart door het intrekken van de voorhuid en de eikel bloot van de opening van de urethrale neusgang. Vervolgens zijn de glans begrepen door botte niet breken pincet te stabiliseren van de penis en de PE-buis. De PE slang eerst wordt ingevoegd in de urethrale neusgang parallel aan het dierlijk lichaam, dan de hoek wordt aangepast door het kantelen van de katheter om te manoeuvreren om te volgen de natuurlijke kromming van de urinebuis. Deze techniek kan worden gebruikt om geïnduceerde lymfkliertest modellen van aandoeningen van de blaas en/of de doeltreffendheid van intravesicale behandelingen bij mannelijke muizen.
Introduction
De transuretrale instillation aanpak in eerdere studies is gebruikt als een van de methoden om knaagdieren modellen van blaas pathologieën1,2,3,4 te maken en kan worden gebruikt voor het evalueren van de effectiviteit van lokaal geleverde behandelingen in muizen. Hoewel diermodellen kunnen niet volledig menselijk pathologieën recapituleren, biedt identificatie van de onderliggende mechanismen in dierstudies een beter begrip van de menselijke LUT aandoeningen zoals interstitiële cystitis/blaas pijnsyndroom, neurogene blaasontsteking, auto-immune blaasontsteking en prostaat ontsteking5.
De transuretrale instillation procedure uitgevoerd op een volwassen mannelijke muis is meer technisch uitdagend dan intravesicale instillation in een volwassen vrouwelijke muis6. De natuurlijk gebogen anatomie van de mannelijke urethra samen met zijn kleine diameter maken het technisch moeilijk te bereiken het transuretrale inbrengen van een katheter. Daarom, gedetailleerde instructies voor de transuretrale inductie van muis urinewegen infectie6 en LUT ontsteking7,8,9,10,11 , 12 , 13 , 14 , 15 via katheter blaas-ingevoegd werden eerder geschetst voor vrouwelijke muizen alleen. Dit manuscript heeft tot doel een stapsgewijze beschrijving van de techniek voor transuretrale instillation van stoffen in mannelijke muizen met inbegrip van de videofragmenten, afbeeldingen en illustraties. Transuretrale instillation procedures in een volwassen mannelijke muis kunnen worden uitgevoerd met variabele inoculates vergelijkbaar met die eerder beschreven in de vrouwelijke muis7 en samengevoegd met aanvullende technieken zoals electromyogram opnames van visceromotor Reacties (VMR)16.
Protocol
Representative Results
Discussion
Dit manuscript wordt een methode van transuretrale instillation in volwassen mannelijke muis in detail beschreven. Differentiële primaire seeding gebied kan worden bereikt met behulp van PE leidingen van verschillende diameters. PE-50 wordt aanbevolen voor het succesvol bereiken van de urineblaas lumen, terwijl een grotere diameter die PE-10 wordt gebruikt voor het bereiken van de AP en SV (figuur 3A-B). Naast de keuze van de grootte van PE buizen en doel orgel voor inocula…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De auteurs hebben niet alle bevestigingen.
Materials
| BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 10 | BD Medical | 63019-004 | |
| BD INTRAMEDIC Polyethylene Tubing/ PE 50 | BD Medical | 63019-048 | |
| BD Insyte-N Autoguard/ Angiocath | BD Medical | 311411 | |
| Ethanol (EtOH) | Fisher Scientific | BP2818500 | |
| BD Needle Only 22 Gauge (G) 1 inch | Becton Dickson | 205155 | |
| BD Needle Only 27 Gauge (G) 1/2 inch | Becton Dickson | 305129 | |
| Luer stub, 22 G X 0.5 in / Blunt Needle | Instech | LS22 | |
| Luer stub, 27 G X 0.5 in / Blunt Needle | Instech | LS27 | |
| 6" Long x 2" Wide x 1" Thick, Aluminum Oxide Sharpening Stone / Oil Stone | Norton | 40204034 | |
| Surgical Lubricant Sterile Bacteriostatic Folilpac | Surgilube | 281020543 | |
| Isoflurane | Fluriso | 13985-528-60 | |
| SomnoSuite Low-Flow Anesthesia System | Kent Scientific | SS-01 | |
| Dissecting Forceps, Curved | vwr | 82027-392 | |
| BD 1 ml Syringe | BD Medical | 309626 | |
| India Ink Solution., 0.2% in PBS buffer | Alfa Aesar | J61007 | |
| 8~12 weeks old male C57B/6 Mice | Jackson Lab | #000664 |
References
- Lee, S., Yang, G., Bushman, W. Prostatic inflammation induces urinary frequency in adult mice. PLoS One. 10 (2), e0116827 (2015).
- Wong, L., Hutson, P. R., Bushman, W. Prostatic inflammation induces fibrosis in a mouse model of chronic bacterial infection. PLoS One. 9 (6), e100770 (2014).
- Elkahwaji, J. E., Zhong, W., Hopkins, W. J., Bushman, W. Chronic bacterial infection and inflammation incite reactive hyperplasia in a mouse model of chronic prostatitis. Prostate. 67 (1), 14-21 (2007).
- Boehm, B. J., Colopy, S. A., Jerde, T. J., Loftus, C. J., Bushman, W. Acute bacterial inflammation of the mouse prostate. Prostate. 72 (3), 307-317 (2012).
- Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Bushman, W. Models of inflammation of the lower urinary tract. Neurourol Urodyn. 30 (5), 673-682 (2011).
- Thai, K. H., Thathireddy, A., Hsieh, M. H. Transurethral induction of mouse urinary tract infection. J Vis Exp. (42), (2010).
- Bjorling, D. E., Wang, Z. Y., Boldon, K., Bushman, W. Bacterial cystitis is accompanied by increased peripheral thermal sensitivity in mice. J Urol. 179 (2), 759-763 (2008).
- Hopkins, W. J., Gendron-Fitzpatrick, A., Balish, E., Uehling, D. T. Time course and host responses to Escherichia coli urinary tract infection in genetically distinct mouse strains. Infect Immun. 66 (6), 2798-2802 (1998).
- Dinis, P., Charrua, A., Avelino, A., Cruz, F. Intravesical resiniferatoxin decreases spinal c-fos expression and increases bladder volume to reflex micturition in rats with chronic inflamed urinary bladders. BJU Int. 94 (1), 153-157 (2004).
- Cayan, S., et al. Botulinum toxin type A may improve bladder function in a rat chemical cystitis model. Urol Res. 30 (6), 399-404 (2003).
- Jerde, T. J., Bjorling, D. E., Steinberg, H., Warner, T., Saban, R. Determination of mouse bladder inflammatory response to E. coli lipopolysaccharide. Urol Res. 28 (4), 269-273 (2000).
- Saban, M. R., et al. LPS-sensory peptide communication in experimental cystitis. Am J Physiol Renal Physiol. 282 (2), F202-F210 (2002).
- Schilling, J. D., Mulvey, M. A., Vincent, C. D., Lorenz, R. G., Hultgren, S. J. Bacterial invasion augments epithelial cytokine responses to Escherichia coli through a lipopolysaccharide-dependent mechanism. J Immunol. 166 (2), 1148-1155 (2001).
- Saban, M. R., et al. Discriminators of mouse bladder response to intravesical Bacillus Calmette-Guerin (BCG). BMC Immunol. 8, 6 (2007).
- Bjorling, D. E., et al. Acute acrolein-induced cystitis in mice. BJU Int. 99 (6), 1523-1529 (2007).
- Sadler, K. E., Stratton, J. M., Kolber, B. J. Urinary bladder distention evoked visceromotor responses as a model for bladder pain in mice. J Vis Exp. (86), (2014).
