여성 쥐에서 난소 노화의 수명 및 건강 영향 조사를 Orthotopic 난소 이식 절차
Summary
여기에 설명 된 orthotopic 수정 난소 영향 받는 사람 마우스의 생리학에 대 한 난소 이식 프로토콜이 있습니다. 이 수술 난소 영향의 다양 한 종류를 여성 쥐를 노출 하는 데 사용 하 고 heterochronic 이식 및 이식 다양 한 비보 전 치료 받은 난소의 포함 될 수 있습니다.
Abstract
난소 이식 1963 년에 유타 주립 대학에서 처음 실시 되었다. 최근 작품에서 포유류 난소의 heterochronic 이식 젊은 여성에서 젊은 난소의 건강 보호 효과 조사 하기 위해 사용 됩니다. 현재 절차 allogenic 난소 난소 부르사에서 그들의 원래 위치에 다시 이식는 orthotopic 이식 메서드를 사용 합니다. 이것은 난소/난소 조직의 더 일반적으로 사용 되 heterotopic 이식 달리 피하 또는 신장 캡슐 아래입니다. 모든 3 개의 위치는 이식 조직의 효율적인 revascularization를 제공합니다. 그러나, orthotopic 이식 가장 자연 스러운 신호 환경으로 난소를 제공 하 고 post-operatively 자연스럽 게 재현 동물에 대 한 기회를 제공 하는 유일한 프로시저입니다. 하나 ovariectomy 절차 동안 모든 생 난소 조직을 제거를 주의 해야 합니다. 어떤 생 조직 유지 하는 경우, 하나의 난소를 제거 하는 경우에 이식된 조직을 기존 조직 노화 될 때까지 휴면 유지 됩니다. 이식 받는 상당한 양의 새로운 hypothalamic/뇌/gonadal/부 신 (HPG/A)를 축 하는 정권 관련는 이식 된 신호에 적응 하는 시간을 걸릴 수 있습니다 revascularization 이식된 난소의 매우 신속 하 게 발생 하는 동안 조직입니다. 이 일반적으로 마우스에 100 일 정도 걸립니다. 따라서, 이식 실험이 적응 기간에 맞게 설계 되어야 한다. 전형적인 결과 난소 이식으로 이식된 난소의 나이 보다는 받는 사람의 연대기 나이 반영 하는 받는 사람의 건강 변화 포함 됩니다.
Introduction
건강과 수명에 재생산의 영향력은 종종 실수로 생식 능력을 포괄 하는 기간에만 제한 된의 생각. 라이프 스타일 및 생활 스팬의 재생산으로 유능한 단계와 관련 된 고기는 쉽게 사전 및 postreproductive 단계에서 분화 된다, 하는 동안 생식 상태 수명의 모든 단계에 걸쳐 건강 영향. 생식 능력의 기간은 종종 생식 수명, 연대기 수명에서 자신을 차별화 라고 합니다. 이 용어 라는 현실에서 두 수명 지정의 인공 분리, 모두에 이벤트와 서로 밀접 하 게 묶인된에 영향을 미치는 한, 보다 더 자주는 아니지만, 뿐만 아니라 다른 영향을 미치는입니다.
지난 10 년간 증거 개인의 생식 상태 만성 건강 상태1을 개발의 위험 증가와 관련 있음을 나타냅니다. 한 연구는 남자2의 동료에 대 한 짧은 수명을 생식 실패 사이 연결을 문서화. 협회는 여성에서 더욱 눈에 띄는. 심혈 관 질환은 드문 premenopausal 여자3, 하지만 난소 실패 심장 혈관 질병5조기 난소 실패 젊은 여성, 폐 경4 에서 급격히 증가. 인슐린 저항6 와 뼈 손실 폐 경7 에 증가 하 고 거의 2/3 미국인의 Alzheimer의 질병과 여자8입니다. 난소 신호에 잘 정의 된 변화는 폐 경 후, 질병 부담 상태로 premenopausal, 질병 저항 상태에서 전환을 표시합니다. 이 안정적인 전환 메커니즘을 가속 노화 질병 위험을 식별 하는 기회를 선물 한다.
최근, cryopreserved 난소 조직 이식 생식 선 세포 화학 요법 등을 위태롭게 수 있는 의료 절차를 받아야 하는 여성 불 임 복원 사용 되었습니다. 난소 조직 이식 또한 난소 비 기반으로 불 임, 유전자 변형 마우스9를 포함 하 여 동물에 가능한 자손 생산을 사용할 수 있습니다. 난소 이식 생식 기능 또는 연대기 노화 se 당에서 생식 노화의 영향을 분리 하는 효율적인 방법입니다.
여성 건강의 여러 측면에서 난소 호르몬에 대 한 잘 설립 지원 역할에서 적극적으로 폐 경에서 위험 증가 질병의 주 원인으로 생식 세포, 순환 호르몬 생산의 손실 연루. 여성 건강에 난소 호르몬의 값은 의심, peri-및 폐 경 후 여성에서이 호르몬 대체 되었습니다 젊은 난소를 가진 젊은 여자에 의해 즐기 게 하는 효능의 복원에 신뢰할 수 있는. 이러한 건강 혜택 postreproductive 여성 쥐10,11,12,,1314젊은 난소의 heterochronic 이식 하 여 안정적으로 복원 됩니다.
이식 또는 ovariectomy 절차 이전 전후 모두 기증자와 받는 사람 쥐의 생식 상태를 결정 합니다. 나이의 12 개월에 수술 전에 gonadal 입력의 흔적을 표시 하는 추정 postreproductive 쥐이 실험에서 제외 됩니다. Gonadal 입력 질 세포학에 의해 결정 됩니다. 데이터 질 세포학에 적어도 10 일 연속 사전 수술 받는 사람 마우스에서 postreproductive 국가 기증자 쥐에서 난소 적극적으로 자전거를 위해 수집 됩니다. 날 로부터 기간 nucleated 상피 세포로 estrous 주기 정의 하나 표시 (즉, proestrus)는 leukocytic의 기간이 질 얼룩에 nucleated 상피 세포의 다음 모습을 앞에 존재 (즉, diestrus) 사이. 발 정기는 큰, 편평 상피 세포, 또는 핵 없이 존재에 의해 결정 됩니다. 전에 10 일 동안 또는 수술 했다 동안 gonadal 입력을 결정 후 마우스는 순환 활동이 표시 됩니다. 전에 10 일 동안 또는 수술 했다 동안 gonadal 입력을 결정 한 후 마우스를 하나 이상 전체 estrous 주기 표시 합니다. 여성 쥐 남성 쥐의 존재 유 숙 하거나 주기 유도 하는 자극에 일관 된 노출 되도록 남자의 케이지에서 더럽혀진된 침구에 노출 해야 합니다.
이러한 이식 절차는 기증자와 받는 사람 마우스에 동시에 작동 하는 두 명의 외과로 가장 효율적으로 수행 됩니다. 그러나, 절차는 쉽게 수행 한 외과 의사에 의해 가장 자주 받는 사람 마우스에서 ovariectomy 프로시저를 시작 하기 전에 복구 기증자 난소와 함께. 이 프로토콜에서는 단일 외과 의사에 대 한 절차를 설명합니다. 생식 관의 노출 및 사이트의 폐쇄는 일반적으로 없이 이루어집니다 현미경, 반면 제거 및 교체는 난소의 현미경으로 이루어집니다. 와 학습 어떤 수술, 절 개 사이트 더 큰 수 있습니다 수술 절차를 학습 하면서 더 오래 걸릴 수 있습니다 및 일반적으로 것입니다 경험을 가진 감소.
Protocol
Representative Results
Discussion
Ovariectomy 및 손상과 세균 세포 고갈 난소 이식 18 개월 21 일에서 배열 하는 생쥐에 실시 되었습니다. 수행 된 ovariectomy 난소 부르사를 그대로 유지 하는 것은 때 incising bursal 조직 배려를가지고 한다. 쥐 나이의 6 개월 이상, 부르사의 많은 액세스를 위해 사용할 수 있는 영역을 제한 하는 지방 패드와 중첩 된다. 이러한 경우에, 그것은 종종 지방 패드 국경 거의 오픈 부르사 눈물을. 이 메서드는 종종 …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
노화, 세 쥐 식민지 (낸시 Nadon) 국립 연구소에서 14 개월 여성 CBA 생쥐의 관대 한 선물에 의해 그리고 유타 주립 대학, 수의학의 학교, 학과의 동물, 유제품이이 간행물에서 보고 된 연구 지원 고 수의 과학입니다.
Materials
| Dissecting microscope | Any dissecting scope with an adjustable working distance. | ||
| Warm Water Recirculator and appropriate pad for your size surgical/recovery field. | Stryker/Gaymar | TP700 | Circulating water pads produce even and consistent temperature operating and recovery fields. |
| Surgical instruments-dissection instruments for access to the reproductive tract | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Surgical instruments-fine instruments for the transplantation procedure. | Choice of specific surgical instruments is highly surgeon-specific | ||
| Suture material for abdominal wall | eSutures | G3756K: 6-0 MILD CHROMIC GUT 18" HE-7 CUTTING, DOUBLE ARMED | |
| Suture material for ovarian bursa | eSutures | 2809G: 9-0 or 2810G: 10-0 ETHILON BLACK 5" BV130-5 TAPER | 10-0 suture can be difficult to locate if dropped on the surgery field. |
| Absorbable gelatin sponge | PFIZER. | Gelfoam- PFIZER 09-0315-08. | cut into small (~2mm) pieces under sterile conditions. |
| Staples for skin closure | Becton Dickinson | MikRon Autoclip 9mm (BD 427631) | |
| Eye ointment. | MWI Veterinary Supply Co. | Puralube sterile opthalmic ointment | |
| Syringes for anesthesia, analgesia and epinephrine | MWI Veterinary Supply Co. | BD 305536 | 27g x 3/8in,Intradermal Bevel 1/2ml |
| Syringes for saline. | MWI Veterinary Supply Co. | BD 309657. | 3ml syringe, luer-lok tip, 27g needle |
| Clippers/blade | Andis | Super AGR+™ Cordless Detachable Blade Clipper and a CeramicEdge® #40 blade. | Any clippers with a fine blade. |
| Ethanol | University chemical supply | dilute to 70% for use. | |
| Betadine solution | MWI Veterinary Supply Co. | 003233 | |
| 2×2 gauze pads | MWI Veterinary Supply Co. | 003073 | autoclaved with surgery packs |
| Borosilicate glass beads | Sigma-Aldrich Co. | Z273619 | Autoclave in sintilation vials |
| 4-vinylcyclohexene diepoxide | Sigma-Aldrich Co. | 94956 | |
| Sesame oil | Sigma-Aldrich Co. | S3547 |
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