بروتوكول شامل للعينة ونخاع العظام عملية قياس الأمراض المتبقية قابلة للقياس والخلايا الجذعية ليوكيميك في سرطان الدم النقوي الحاد
Summary
الكشف عن الأمراض المتبقية ضئيلة أو قابلة للقياس (MRD) هو العلامات البيولوجية تشخيصية هامة لتحسين تقييم المخاطر والتنبؤ بانتكاسة في سرطان الدم النقوي الحاد (مكافحة غسل الأموال). هذه مبادئ توجيهية شاملة وتوصيات مع أفضل الممارسات لتحديد هوية ثابتة ودقيقة واكتشاف MRD، يمكن أن تساعد في صنع قرارات علاج فعالة لمكافحة غسل الأموال.
Abstract
معايير الاستجابة في سرطان الدم النقوي الحاد (مكافحة غسل الأموال) تم مؤخرا إعادة تأسيس، مع دراسة السمات المستخدمة في تحديد ما إذا كان المرضى قد حققت مغفرة كاملة (CR). ما يقرب من نصف المرضى الكبار الذين دخلوا الجمهورية التشيكية سوف الانتكاس في غضون 12 شهرا بسبب ثمرة خلايا مكافحة غسل الأموال المتبقية في نخاع العظام. كوانتيتيشن هذه تبقى خلايا اللوكيميا، المعروفة باسم الأمراض المتبقية ضئيلة أو قابلة للقياس (MRD)، يمكن أن يكون العلامات البيولوجية قوية للتنبؤ بهذه الانتكاسات. وعلاوة على ذلك، أظهر تحليل استعادي للعديد من الدراسات أن وجود MRD في نخاع العظام من المرضى مكافحة غسل الأموال ترتبط ببقاء الفقراء. ليس فقط من مجموع السكان ليوكيميك، وتنعكس إيواء لوكيميا المرتبطة بالخلايا المناعية-النمط/الظاهري (ليب)، المقترنة بالنتائج السريرية، ولكن ذلك هو يتدنى التردد المنخفض غير ناضجة من الخلايا الجذعية اللوكيميا (المهارات)، التي يمكن أن تكون ترصد من خلال التدفق الخلوي MRD أو النهج مثل MRD. توفر فحوصات الحساسة التي تمكن من الكشف عن خلايا اللوكيميا المتبقية (الجذعية) استناداً إلى الميزات الخاصة بالمرض أو المرتبطة بالمرض (الواسمات الجزيئية الشاذ أو الشاذة إيمونوفينوتيبيس) قد تحسنت كثيرا التقييم في مجال مكافحة غسل الأموال. ومع ذلك، نظراً لعدم تجانس المتأصلة والتعقيد لمكافحة غسل الأموال كمرض، أساليب لأخذ عينات من نخاع العظم وإجراء تحليل MRD والمهارات ينبغي مواءمة عندما يكون ذلك ممكناً. في هذه المخطوطة يمكننا وصف منهجية مفصلة لنخاع العظم كافية أسبيراتي أخذ العينات، النقل، ونماذج تجهيز للتقييم الأمثل متعدد الألوان التدفق الخلوي، والنابضة استراتيجيات تقييم MRD والمهارات للمساعدة في اتخاذ القرار العلاجي للمرضى في مجال مكافحة غسل الأموال.
Introduction
سرطان الدم النقوي الحاد (مكافحة غسل الأموال) خبيثة من نخاع العظام تتسم بعيوب في البرنامج النضج، مع انتشار غير طبيعي وتراكم الخلايا السلف النقوي، تثبيط هيماتوبويسيس العادية، وفي نهاية المطاف فشل نخاع العظم . هذا المرض متغايرة جداً فيما يتعلق مورفولوجيا، إيمونوفينوتيبي، سيتوجينيتيكس، الانحرافات الجزيئية، والتوقيعات تعبير الجينات، وكذلك الاستجابة للمعالجة، ومعالجة نتائج1،2. الإدارة الحالية ويشمل العلاج الكيميائي التعريفي بهدف تحقيق مغفرة كاملة (CR)، تليها مغفرة بعد انتهاء العلاج، التي تسترشد بنتائج الجزيئية والخلوية الوراثية إلى حد كبير، والدراسات إيمونوفينوتيبيك وتتكون من أما عدة دورات من العلاج الكيميائي إضافية أو زرع الخلايا الجذعية (ذاتي أو متمكنة)3. على الرغم من معدلات عالية مغفرة الانتكاس بعد العلاج الكيميائي المكثف لتصل إلى 90%، البقاء على قيد الحياة 5 سنوات في البالغين فقط حوالي 30-40 ٪، أساسا بسبب تطوير التي هي عادة مقاومة للعلاج الكيميائي وصعبة جداً مما يؤدي علاج. نتائج في الأطفال أفضل، على الرغم من أن ما يقرب من ثلث أيضا الانتكاس. ولذلك، الكشف المبكر عن الانتكاس وشيك ستسد حاجة غير ملباة إلى طبية وقد توجه العلاج مغفرة بعد4.
الأمراض المتبقية بعد العلاج قد يعكس مجموع جميع التشخيص والتشخيص بعد انتهاء المقاومة آليات/العوامل؛ وبالتالي قد تكون قياس تشخيصية ومفيداً لتوجيه العلاج. إمكانية المرض defining المتبقية (كان يسمى سابقا الأمراض المتبقية ضئيلة والأمراض المتبقية المشار إليها الآن على أنها قابلة للقياس أو MRD) أقل بكثير من المعيار المورفولوجية للخلايا انفجار 5% هو تغيير المناظر الطبيعية من خطر classification. حاليا طريقتين تستخدم في الغالب للكشف عن MRD تدفق المستندة إلى الخلوي والجزيئي، القائم، هذا الأخير يجري تقييمها بعكس المنتسخة بكر (RT-qPCR)5 ، أو أن كان في مرحلة سابقة لأوانها، من الجيل التالي التسلسل (خ ع). أثبتت دراسات عديدة في البالغين، وكذلك كما هو الحال في الأطفال أن مختلف MRD النهج معلومات تشخيصية قوية في مكافحة غسل الأموال على حد سواء بعد التوجيهي وتدعيم العلاج6،7، وتعريفاً جديداً لعبء المرض ( متفوقة على الجمهورية التشيكية المورفولوجية) يظهر الآن8. وهذا يوحي بأن MRD المقررة بالتدفق و/أو التقنيات الجزيئية وينبغي أن تصبح، وفي الواقع الفعل أصبحت، القياسية في كل التجارب السريرية في مجال مكافحة غسل الأموال.
ويناقش هذه المخطوطة الإجراء الخلوي تدفق تفصيلية للحصول توصيف إيمونوفينوتيبيك دقيقة واستنساخه من MRD في عينات نخاع العظام، بما في ذلك أخذ عينات نخاع العظم وتجهيز الإجراءات السابقة للتدفق الخلوي. توافر عينات نخاع العظام ذات نوعية جيدة في التشخيص والمتابعة أمر حاسم لنجاح هذا القياس عبر المواقع السريرية والتجارب السريرية. في الواقع، هذه الاعتبارات التحليلية السابقة أيضا النهج MRD الأهمية الحيوية الجزيئية (PCR وخ ع). لوصف إيمونوفينوتيبيك MRD، تقترن علامات أبيررانتلي أعرب عادي النقوي وعلامات السلف، لتعريف إيمونوفينوتيبي المرتبطة بسرطان الدم (لايب)9. التدابير الناتجة عن ذلك للعديد من العوامل التي تؤثر على استجابة للعلاج، مثل مقاومة العقاقير اللوكيميا المتأصلة أو المكتسبة والدوائية وحركية من العلاج والترصد المناعي والامتثال. ولذلك، MRD معلمة تنبؤاتها قوية جداً بعد تشخيص المقترنة بالنتائج السريرية عند ديتشوتوميزيد على مستوى إنتاج يحدده تحليل خصائص التشغيل المتلقي (ROC). لأعمالنا فوج مكافحة غسل الأموال الكبار من هوفن 42a الدراسة، يتم تعيين مستوى وقف إنتاج المواد الانشطارية في 0.1% خلايا الدم البيضاء إيجابية إلى مجموع الخلايا ليب. باستخدام هذا المعيار لتحديد مركز MRD إيجابية مقابل السلبية، مجموعة من المرضى يمكن التعرف على الذين لديهم حالات الانتكاس أسوأ بكثير، والبقاء خالية من الانتكاس والإجمالية6. بالإضافة إلى ذلك، يصف لنا قياس خلايا اللوكيميا غير ناضجة، ومقاومة المخدرات مع ميزات مثل الخلايا الجذعية (CD34 + CD38-لوكيميا الخلايا الجذعية، أو المهارات)، الذي يقدم مؤشرا قويا لنتائج المريض10. معا ليب واحلركه نهج نموذج النهج MRD سيتوميتريك التدفق. والنهج ليب مناسبة لما يقرب من 90 في المائة المرضى، بينما يمكن تطبيق النهج احلركه في حوالي 80% من المرضى. معا لأكثر من 95% المرضى ويمكن تقييم معلمة واحدة أو على حد سواء.
وأخيراً، يقدم هذا المنشور وصفاً مفصلاً تشغيلية لتقييم MRD بالتدفق الخلوي. وهذا يشمل: 1) مواءمة و/أو توحيد إجراءات أخذ العينات نخاع العظم، 2) نموذج النقل التوجيه 3) الوصف المفصل للكشف عن الخلايا ليوكيميك مع نظام مراقبة الأصول الميدانية باستخدام لوحات جسم عدة بما في ذلك النهج أنبوب خلية مفردة وصف المهارات، 4) إنشاء نظام مراقبة الأصول الميدانية آلات لتوحيد القياسات، 5) برامج تحليلية للقياسات MRD و 6) برامج تحليلية للكشف عن المهارات.
ونحن نهدف إلى إظهار جميع جوانب الإجراء بما في ذلك إعداد عينة حيث أنه نادراً ما تناقش في حين أنها مسألة هامة للنوعية للنتيجة النهائية. تطلع نخاع العظام وخزعة هي الإجراءات السريرية المستخدمة لتقييم الخلايا المكونة للدم داخل نخاع العظام. وتجري هذه مع تعداد الدم الكامل (CBC) وتشهير الدم. الأسلوب الأمثل لتطلع نخاع العظام أمر حاسم لتشخيص دقيق ومتابعة للقياس. وبالإضافة إلى ذلك، ينبغي أن تتضمن aspirate ناجح نخاع العظام خلايا كافية لإجراء تحليل تدفق ليب والمهارات (خلايا قابلة للتطبيق على الأقل 10 مليون). هنا، يمكننا وصف طريقة أداء مطمح نخاع العظام، وتوفر المبادئ التوجيهية التي ينبغي أن يسفر كافية خلية أخذ العينات (وحدود إمكانات تخفيف الدم) اللازمة لتشخيص دقيق وإجراء بحوث إضافية. هذه الاعتبارات التحليلية السابقة أيضا النهج MRD الأهمية الحيوية الجزيئية (PCR وخ ع). ينبغي معالجة جميع العينات إيمونوفينوتيبينج تفضيلي ضمن 24 ساعة جمع. على الرغم من غير المستحب، عينات الدم ونخاع العظام يمكن لا تزال معالجتها وتحليلها عند الاحتفاظ تصل إلى 72 ساعة في درجة حرارة الغرفة. وبالإضافة إلى ذلك، ينبغي إجراء جميع هاندلينجس مع المواد تحت ظروف معقمة، تمكينا لتجميد خلايا عقيمة لأحدث البحوث/نوعية التقييم إلخ.
Protocol
Representative Results
Discussion
وافرة من البيانات المتاحة التي تظهر الأدلة الإيجابية MRD يجري المرتبطة ببقاء الفقراء، وذلك التقييم MRD قد يحسن نتائج المريض بتوفير معلومات تشخيصية إضافية يمكن أن يكون أساسها القرارات السريرية. ومن ثم، طريقة متسقة ومنسقة لتقييم المناعية المظهرية MRD أمر أساسي لتحسين علاج المرضى في نهاية المطاف. هذا مهم أيضا عند مقارنة الدراسات السريرية عبر مختلف المواقع السريرية، وربما في نهاية المطاف المقرر مساعدة في السريرية مما يجعل وتخدم كنقطة نهاية مركب سريرية للبقاء على قيد الحياة عموما. فكرة أن هناك ما يبرر صلبة من المبادئ التوجيهية للقياسات MRD دقيقة ومتسقة أدى إلى عمل متضافر من شبكة اللوكيميا الأوروبية (جيش التحرير الوطني) لتصميم أحدث المبادئ التوجيهية. هذه الوثيقة الشاملة سيتم نشرها أواخر عام 2017، وسوف تكون مفيدة للعديد من مجموعات الدراسة والمختبرات التي تتحرك إلى الأمام.
الخطوات الحاسمة في إطار البروتوكول
هو جانبا هاما، وكثيراً ما يغفل التحليل MRD أثر نوعية العينة على تحديد دقيق ل MRD. هذا أكثر وضوحاً عندما بنقلها إلى المعاهد الأخرى في التجارب السريرية العالمية نظراً للاعتبارات التشغيلية الإضافية التي يجب أن تؤخذ في الاعتبار عند إعداد هذه المواد. للحد من خطر الخلط بين المريض المعلومات وتسليم إدارة العينات الكافية في الوقت المناسب أمر حاسم. مرة أخرى، في هذه المرحلة للنقل أشكال الصحيح و/أو استيراد نظم المستشفى الإلكترونية مع مهام واضحة للتحليل المطلوب المطلوب. مشيراً إلى مرحلة العلاج لأخذ العينات MRD هي أيضا حاسمة نظراً لأنها قد تكون ذات صلة للقرارات السريرية (على سبيل المثال بعد الدورة الثانية من العلاج) وذلك أن تعرف تعريفاً واضحا. استخدام بيانات وهمية (مثل على سبيل المثال 1 يناير كل سنة الميلاد) يزيد من خطر الخلط بين المرضى أو تحليلات. إذا كان ذلك مطلوباً بموجب القانون، ينبغي أن تستخدم طريقة مجهولة المصدر بديل لتحديد الهوية.
ينبغي معالجة جميع العينات إيمونوفينوتيبينج تفضيلي ضمن 24 ساعة جمع. على الرغم من غير المستحب، عينات الدم ونخاع العظام يمكن لا تزال معالجتها وتحليلها عند الاحتفاظ تصل إلى 72 ساعة في درجة حرارة الغرفة. وبالإضافة إلى ذلك، جميع هاندلينجس بالمادة يمكن أفضل إجراء تحت ظروف معقمة، حيث نعد المزيد من الخلايا في المصارف الأحيائية (المحلية) ما زالت ذات الصلة: العديد من الدراسات السريرية أن تحاليل إضافية لمواصلة التحقيق خلايا سرطان الدم مع احترام للسمات الجزيئية والمناعية المظهرية والوظيفية المراد تنفيذها في مرحلة لاحقة. إلا أن تفاصيل بيوبانكينج ليست ضمن نطاق هذه المخطوطة.
استخدام MRD كأداة تشخيص يعني أنها بحاجة إلى مختبرات معتمدة، ليس فقط لقياس التدفق، ولكن أيضا فيما يتعلق بمراقبة الجودة لتقييم MRD. وقد يتطلب توزيع العينات إلى مختبرات مرجعية محددة أو (إعادة) تحليل تدفق الملفات مع القياسات MRD فرق إشارة.
توضح هذه المقالة الإجراءات أهم من جمع aspirate نخاع العظام تصميم MRD في العينات السريرية-التي تحتاج إلى فريق كامل من الخبراء بمهام محددة، المسؤوليات، ومع كثرة الاتصالات فعالة الوصف والتحليل. نظراً لكل مهمة حاسمة بالنسبة للإجراء، من المستحسن أن يكون الصوت اللوجستية بما في ذلك البروتوكولات في كل مختبر وكافية أفراد الاحتياطي الذين تدربوا على وجه التحديد للمهمة. وبالإضافة إلى ذلك، أن هناك بعض الخطوات ذاتية نسبيا في جزء من الإجراءات (على خاصة ليب واحلركه تحديد علامة الشاذة)، أنها ضرورية لإجراء مناقشات حول النتيجة النهائية بالفريق، وقد أذنت بها فريق من التقرير النهائي المشرفين. الجهود المبذولة حاليا نسعى لتطوير برامج الكمبيوتر التي ستساعد على توحيد التحليل (ليب والمهارات).
التعديل واستكشاف الأخطاء وإصلاحها
يمكن أن يكون لكل مختبر مجموعتها الخاصة من الأجسام المضادة التي يمكن استخدامها لتعريف مختلف الفئات السكانية الفرعية على الرغم من أن وجود العمود الفقري موحدة من علامات ضروري لنتائج مماثلة، كما ورد في المبادئ التوجيهية للدولة من الفن جيش التحرير الوطني للوثيقة القياسات MRD المشار إليها أعلاه. بصرف النظر عن علامات المختار وهناك بعض القضايا التي يمكن أن يجعل من الصعب تحليل النتائج وينبغي أن تؤخذ في الاعتبار.
القيود المفروضة على هذه التقنية
أولاً هو تحديد التعبير علامة الشاذة ليب والمهارات المقررة في التشخيص ورصدها مع مرور الوقت (أثناء وبعد العلاج) لتوصيف دقيق للنمط الظاهري MRD. في حين أن ما يزيد على 95% المرضى يمكن تقييمها عبر ليب أو المهارات (أو كليهما)، لا يزال بعض المرضى قد لا ليبس محددة أو لا CD34 + CD38-أو يقدم مع الانفجارات السلبية CD34، أو عينة تشخيص مفقودة. وفي هذه الحالات، أنها لا تزال جديرة بالاهتمام في محاولة لقياس MRD مع فريق من الأجسام المضادة واسعة كما يسمح عدد الخلايا المتوفرة ثم قم بتحديد الأكثر موثوقية (التمييز أقوى من الخلايا ليوكيميك إعطاء) ليب. وإذ ترى أن نسبة المرضى الذين الانتكاس في نهاية المطاف لا تشبه تماما إيمونوفينوتيبي التشخيص، نظراً لعدم تجانس المرض مكافحة غسل الأموال، وقياس فريق واسع من الأجسام المضادة في MRD يوصي على أية حال. هذه التحولات إيمونوفينوتيبيك وتشمل انفجار الخلايا ولسكس وقد ثبت أن تحدث أثناء العلاج16 ويمكن أن يستند هذا المرض measureable هؤلاء السكان القادمة ما يسمى. في هذا الوقت ومع ذلك، لا تقرر ما إذا كان جميع السكان الفرعية إيمونوفينوتيبيك سوف تؤدي إلى انتكاس المرض، وهو ذلك ممارسة غير شائعة تقرير العلاج مصممة على MRD استناداً إلى هذه الخلايا في التجارب السريرية. من المهم ملاحظة أن يتم تقليل مخاطر احلركه في عداد المفقودين بسبب التحولات السكانية بأنبوب واحد النهج التي هي أهم العلامات المميزة أبيرانسي في واحدة من التدفق الخلوي (PE) قناة14.
أهمية فيما يتعلق بالأساليب القائمة
الطريقة الموصوفة في هذا البروتوكول يعتمد على تعريف ليبس أو أكثر، الخلايا التي يتم اتباعها أثناء العلاج. عيوب هذا الأسلوب أن أنه تم مؤخرا أظهرت أن ليب قد تتغير أثناء العلاج. وبهذه الطريقة قد غاب بعض السكان القادمة مع علامات شاذة مختلفة. للالتفاف على هذا، سيكون من الأفضل لقياس كافة علامات شاذة بدلاً من فقط تلك التي عثر عليها في التشخيص. ثم هذا سيكون مماثلاً للنهج “مختلفة من العادية” التي يتم استخدامها من قبل عدة مختبرات17.
التطبيقات المستقبلية
في الآونة الأخيرة، تلقت MRD اهتمام إضافي لرواية تصميم التجربة السريرية. في العصر من خيارات العلاج المتخصص والعلاج بالعقاقير المستهدفة، باستخدام MRD كتدبير نتائج سوف يقلل الوقت اللازم لإقامة فعالية العلاجات الرواية، في نهاية المطاف مما يتيح إدخال أسرع من حاجة ملحة إلى العلاج السريري خيارات إلى العيادة. أهمية الخدمات اللوجستية المناسبة، وتنفيذ عملية تقييم MRD منسقة ذات أهمية حاسمة لنجاح العلاج مكافحة غسل الأموال في المستقبل كإدارة الأغذية والعقاقير حاليا بالتحقيق في إمكانية استخدام MRD كنقطة نهاية مركب بدلاً من البقاء على قيد الحياة عموما التدابير18.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
دعمت هذه البحوث “سرطان المجتمع الهولندي” (الب 2013-6371) ومؤسسة اجبيرس فونك. ونشكر الفريق الهولندي مكافحة غسل الأموال-MRD للتعاون وإجراء مناقشات مثمرة للتحسين المستمر، والتوحيد القياسي لمكافحة غسل الأموال-.
Materials
| BD Biosciences | 120995496,060996589 and 013729 | FACS Canto II | |
| BD Biosciences | 555360 | CD7 FITC | |
| DAKO | F076701 | CD2 FITC | |
| Sanquin | M1613 | CD36 FITC | |
| BD Biosciences | 332778 | CD15 FITC | |
| BD Biosciences | 335039 | CD45RA FITC | |
| BD Biosciences | 345810 | CD56 PE | |
| BD Biosciences | 337899 | CD22 PE | |
| BD Biosciences | 345785 | CD14 PE | |
| Miltenyi Biotec | 130-080-801 | CD133 PE | |
| BD Biosciences | 562566 | Clec12a PE | |
| BD Biosciences | 565568 | Tim-3 PE | |
| BD Biosciences | 332774 | CD7 PE | |
| BD Biosciences | 333142 | CD11b PE | |
| BD Biosciences | 337899 | CD22 PE | |
| BD Biosciences | 345810 | CD56 PE | |
| BD Biosciences | 347222 | CD34 PERCP-CY5.5 | |
| BD Biosciences | 558714 | CD123 PERCP-CY5.5 | |
| Beckman Coulter | B49221 | CD117 PE-CY7 | |
| BD Biosciences | 562854 | CD33 BV421 | |
| BD Biosciences | 345791 | CD19 APC | |
| BD Biosciences | 333143 | CD11b APC | |
| BD Biosciences | 345800 | CD33 APC | |
| BD Biosciences | 345807 | CD38 APC | |
| BD Biosciences | 641411 | HLA-DR APC-H7 | |
| BD Biosciences | 560532 | CD44 APC-H7 | |
| BD Biosciences | 562596 | CD13 BV421 | |
| BD Biosciences | 348811 | CD34 PE-CY7 | |
| Beckman Coulter | A96416 | CD45 Krome Orange | |
| BD Biosciences | 655873 | CD45 HV500c | |
| BD Biosciences | 655051 | CST beads | |
| BD Biosciences | 555899 | Pharm lysing solution | |
| BD Biosciences | 644204 | Multicolor CompBeads | |
| BD Biosciences | 655051 | CST beads | |
| BD Biosciences | FACSDiva software | ||
| Cytognos | Infinicyt | ||
| Spherotech | Euroflow RCP-30-5a | ||
| Sigma-Aldrich | Tuerk solution | ||
| Spherotech | BCP-100-5 | Blank Calibration Particles Beads | |
| HSA | |||
| Azide | |||
| ddH2O |
References
- Döhner, H., et al. Diagnosis and management of AML in adults: 2017 ELN recommendations from an international expert panel. Blood. 129 (4), 424-447 (2017).
- Zwaan, C. M., et al. Collaborative Efforts Driving Progress in Pediatric Acute Myeloid Leukemia. J Clin Oncol. 33 (27), 2949-2962 (2015).
- Cornelissen, J. J., et al. The European LeukemiaNet AML Working Party consensus statement on allogeneic HSCT for patients with AML in remission: an integrated-risk adapted approach. Nat Rev Clin Oncol. 9 (10), 579-590 (2012).
- Grimwade, D., Freeman, S. D. Defining minimal residual disease in acute myeloid leukemia: which platforms are ready for "prime time"?. Hematology. 2014 (1), 222-233 (2014).
- Krönke, J., et al. Monitoring of minimal residual disease in NPM1-mutated acute myeloid leukemia: a study from the German-Austrian acute myeloid leukemia study group. J Clin Oncol. 29 (19), 2709-2716 (2011).
- Terwijn, M., et al. High prognostic impact of flow cytometric minimal residual disease detection in acute myeloid leukemia: data from the HOVON/SAKK AML 42A study. J Clin Oncol. 31 (31), 3889-3897 (2013).
- van der Velden, V. H. J., et al. Clinical significance of flowcytometric minimal residual disease detection in pediatric acute myeloid leukemia patients treated according to the DCOG ANLL97/MRC AML12 protocol. Leukemia. 24 (9), 1599-1606 (2010).
- Ossenkoppele, G., Schuurhuis, G. J. MRD in AML: time for redefinition of CR?. Blood. 121 (12), 2166-2168 (2013).
- Feller, N., et al. MRD parameters using immunophenotypic detection methods are highly reliable in predicting survival in acute myeloid leukaemia. Leukemia. 18 (8), 1380-1390 (2004).
- Terwijn, M., et al. Leukemic stem cell frequency: a strong biomarker for clinical outcome in acute myeloid leukemia. PLoS One. 9 (9), e107587 (2014).
- Kalina, T., et al. EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols. Leukemia. 26 (9), 1986-2010 (2012).
- Paietta, E. Assessing minimal residual disease (MRD) in leukemia: a changing definition and concept?. Bone Marrow Transplant. 29 (6), 459-465 (2002).
- Loken, M. R., et al. Residual disease detected by multidimensional flow cytometry signifies high relapse risk in patients with de novo acute myeloid leukemia: a report from Children’s Oncology Group. Blood. 120 (8), 1581-1588 (2012).
- Zeijlemaker, W., et al. A simple one-tube assay for immunophenotypical quantification of leukemic stem cells in acute myeloid leukemia. Leukemia. 30 (2), 439-446 (2015).
- . Guidance for Collection, Transport and Submission of Specimens for Ebola Virus Testing Available from: https://www.cdc.gov/vhf/ebola/healthcare-us/laboratories/specimens.html (2017)
- Bachas, C., et al. The role of minor subpopulations within the leukemic blast compartment of AML patients at initial diagnosis in the development of relapse. Leukemia. 26 (6), 1313-1320 (2012).
- Ravandi, F., et al. Persistence of minimal residual disease assessed by multiparameter flow cytometry is highly prognostic in younger patients with acute myeloid leukemia. Cancer. 123 (3), 426-435 (2017).
- Hourigan, C. S., et al. Measurable residual disease testing in acute myeloid leukaemia. Leukemia. 31 (7), 1482-1490 (2017).
