Aislamiento de células endoteliales progenitoras de la sangre de cordón Umbilical humano

Varios investigadores han estudiado las características y el potencial de humano EPCs^{5,10,11,12,13}. EPCs pueden describirse como la circulación de las células que tienen la capacidad de adherirse al tejido endotelial en sitios de hipoxia, isquemia, lesiones o la formación del tumor y contribuir a la formación de nuevas estructuras vasculares^4,14. Su participación observado en neovascularización, en forma de vasculogénesis posnatal, ha conducido a una comprensión de la patofisiología de estas células y su uso en aplicaciones terapéuticas^{4,15, 16}. el número de EPC en un individuo se ha demostrado para ser correlacionado con patología cardiovascular^{9,15,16,17,18,19 ,20}. Otros estudios han también diferenciado EPCs en un fenotipo de fibroblasto-como de la válvula y que estas células podrían utilizarse para ingeniería de tejidos corazón válvulas^7,21.

Las moléculas de superficie celular particular necesarias aislar a EPCs no han sido claramente identificadas debido a las discrepancias entre las investigaciones⁴. La adhesión de las empresas multinacionales a una matriz, con la exposición a una variedad de condiciones de cultivo, se ha realizado por varios grupos^1,17,22,23, sugiriendo que EPCs putativos puede Mostrar diferentes propiedades fenotípicas. Estas propiedades incluyen la falta de capacidad phagocytotic, formación del tubo en Matrigel y la captación de lipoproteínas de baja densidad Dil-acetilado. El potencial proliferativo y clonogenic alta son dos propiedades con que EPC puede ser jerarquizada⁵. EPCs pueden también formar en vitro de túbulos cuando morfología de fibroblastos de pulmón fetal humano⁴. Se conocen estas células expresan marcadores de superficie celular endotelial y compartir algunos de los marcadores hematopoyéticos^13,24,25. Los marcadores expresados positivamente que son ampliamente aceptados para EPCs phenotyping son CD31, CD34, receptor del factor de crecimiento endotelial vascular 2 (VEGFR2), von Willebrand Factor (FvW), CD133, c-Kit y vascular endotelial cadherina (VE-cadherina)^{4 , 18}. las células que expresan Co CD90, CD45, CD14, CD115 o actinia alfa-lisa del músculo (α-SMA) no se consideran ser EPC debido a su limitada proliferativa potencial, capacidad de fagocitar bacterias e incapacidad para formar de nuevo humano vasos en vivo^4,7. Este artículo describe un protocolo modificado para el aislamiento de las células endoteliales progenitoras de la sangre de cordón umbilical humano sin necesidad de cualquier célula clasificación de protocolos. Para este artículo, utilizamos CD31, CD34 y VEGFR2 como los marcadores positivos, con α-SMA como el indicador negativo.

En este artículo, proponemos un método de aislamiento y cultivo de células endoteliales progenitoras de sangre del cordón umbilical sin clasificar usando la célula especializada medio crecimiento endotelial suplementado con factores de crecimiento (EGM). Este EGM contiene factor de crecimiento endotelial vascular (VEGF) y factor de crecimiento fibroblástico (FGF), que mejoran la supervivencia, proliferación y migración de células endoteliales²⁶. También incluye el ácido ascórbico, que es responsable de mantener la morfología de adoquines de células; insulina-como factor de crecimiento-1 (IGF-1), que proporciona angiogénicos y función migratoria; y heparina, la cual causa mayor estabilidad a largo plazo de factores de crecimiento en el medio²⁶. Otros factores de crecimiento añadidos al medio de cultivo de células endoteliales incluye la suplementación con factor de crecimiento epidérmico (EGF), que ayuda a estimular la proliferación celular y la diferenciación y la hidrocortisona, que sensibiliza las células al EGF²⁶ . Nos muestran que el uso de este medio de crecimiento produce un número mayor de EPCs en comparación con medio basal endotelial (EBM) o modificado Eagle Medium (DMEM de Dulbecco).