Очистка отсеке мембраны эндоплазматического ретикулума связаны деградации Экзогенные антигены в кросс презентация

MHC I молекулы выражаются на поверхности всех ядерных клеток, с короткие антигенные пептиды, производный от эндогенные антигены, которые обрабатываются системой убиквитин протеасом в цитозоль¹. После обработки, антигенные пептиды переносятся в эндоплазматический ретикулум (ER) просвета пептида перевозчика крана. В просвете ER ряд конкретных сопровождающих помочь загрузки пептидной и правильный складывающиеся MHC I комплекс. Эта серия молекул называется загрузки пептидной комплекс (PLC), указав, что ER является центральный отсек для пептида, загрузки на MHC². После загрузки, пептид MHC I молекулы переносятся на поверхности клеток и играть ключевую роль в адаптивной иммунной системы как самостоятельной маркеры и позволяет CD8⁺ цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL) для выявления раковых клеток или инфекционные агенты по антигенной пептиды от белков несамоуправляющихся³.

В антиген представляющих клеток (APC), антигенные пептиды из Экзогенные антигены, также представлены на MHC^4,5,6,,78 через CP, который осуществляется главным образом по DCs^9,10,11. CP имеет важное значение как для активации наивно CD8⁺ T памяти CD8 и клетки⁺ T клеток в борьбе с инфекционными и анти опухолевых ЦТЛ^12,13и в поддержании иммунной толерантности путем инактивации из автоматическими наивные Т-клеток^14,15. CP играет много важных ролей в адаптивной иммунной системы, однако молекулярных механизмов CP еще должны быть подробно описаны. Предыдущие исследования CP показали, что Экзогенные антигены были локализованы в ER и endosome и были обработаны ERAD, предполагая, что Экзогенные антигены транспортируются от endosome ER для обработки ERAD-как и пептида загрузки¹⁶ . Однако накапливая данные свидетельствуют, что загрузки пептидной CP осуществляется не в ER, но скорее в неклассической endocytic отсеках, которые также имеют отличительные черты ER (рис. 1)^{17,18 ,19,,2021}. Чтобы избежать деградации антигенные пептиды прекурсоров, высокой активности aminopeptidase²² в цитозоле, обработки и пептида, погрузка в CP происходит в области проксимальных этих Неклассические endocytic отсеков (рис. 1). Хотя характеристики этих endocytic отсеками являются спорными, есть нет существующих конкретных молекул помимо Экзогенные антигены в этом отсеке.

ERAD является сотовой путь, который специально удаляет смятых протеинов от ER. В ERAD пути смятых протеинов retrogradely транспортируются через мембраны ER в цитоплазму и обработаны убиквитин протеасом системы^23,24,25. Когда большие молекулы, такие как белки, транспортируются через липидный бислой, эти молекулы проходят через молекулярные аппарат, под названием translocon, как Sec61 комплекс и Дерлена комплекс в ER²⁶и том комплекс и Тим комплекс в Митохондрии²⁷. При экзогенно Добавлено антигены перевозятся через мембрану ER, они должны проникнуть липидного бислоя в комплексе с translocons, например Sec61 комплекс. Метод, описанный здесь очищенного целевых везикул, используя эти мембраны проникновение молекул как маркеры для endocytic отсеков.

Метод, описанный здесь-это новый протокол очистки пузырек с помощью DC-подобных клеток линии DC2.4²⁸ и биотинилированным овальбумина (Бова) как экзогенные антигена. Endocytic отсеках были очищены по стрептавидина (SA)-магнитные шарики с помощью мембраны проникая Бова как производитель. В этом очищенная микросомы, некоторые экзогенно добавлены Бова до сих пор сохранились в мембраны фракций, но были перевезены в наружной части микросомы, а затем убиквитинированных и обрабатываются в vitro²⁹. Это очищенный микросомы содержатся не только endocytic отсек специфических белков, но и ER-резидентов белков для ERAD и пептида, Загрузка комплекса; предположить, что отсеке сотовой перспективных endocytic отсек для CP²⁹. Этот протокол не зависит от вида Экзогенные антигены и применяется также для других подмножеств DC и другие типы клеток, макрофагов, лимфоцитов и эндотелиальных клеток, уточнить точный молекулярный механизм DCs для опытным CP.