組織学的分析のための豚CNSの露出：斬首、スカルオープニングのためのマニュアル、および脳の取り外し
Summary
本論文や教育ビデオの目標は、その後の肉眼および組織学的分析に適したそのままの状態で死後のブタの脳と下垂体を露出して削除する方法を説明することです。
Abstract
ブタは、ヒト以外の霊長類への経済的かつ倫理的に実現可能な代替品として大動物翻訳の神経科学研究でますます人気となっています。豚の大規模な脳の大きさは、従来の臨床脳イメージャーを使用すると、人間の診療所から脳神経外科手順および装置を直接使用してテストすることができます。さらに巨視的および組織学的分析は、しかし、豚、中枢神経系（CNS）の死後露光およびその後の脳の除去を必要とします。豚CNSが厚く、骨、頭蓋骨や脊柱によってカプセル化されているので、これは、簡単な作業ではありません。本論文や教育ビデオの目標は、死後のブタの脳とそれに続く肉眼および組織学的分析に適したそのままの状態で下垂体を露出して削除する方法を説明することです。
Introduction
ブタにおけるトランスレーショナル神経科学の研究では、過去20年間の間に、ますます人気となっています。ブタの脳の大サイズは、従来の臨床脳イメージャと直接使用及びヒト臨床1、2、3、4、5、6、7、8から神経外科手順および装置の試験の使用を可能にします。過去20年間で、豚、特にミニブタ（ 例えば、ゲッティンゲンのミニブタ）、などの幹細胞移植などの神経調節治療法を、調べるために使用されています。ウイルスベクターのトランスフェクション。パーキンソン病、肥満、うつ病、およびアルツハイマー病2、6、に向けおよび脳深部刺激= "XREF"> 9、10、11、12、13、14、15、16、17。これは、ミニブタCNS 3、18、19、20、21を操作するために定位手術的アプローチの開発が続いてきました。制定CNSの変化は脳撮像（PET 10、13、22、24及びMR 23）、膀胱内圧測定11、12、25、歩行分析を用いて、生きた動物で評価されています17、神経学的評価9、17、及び組織学および立体解析14、15、17、26、27、31に基づいて死後検査。しかし、死後分析が厚く、骨の頭蓋骨と繊維状硬膜カバーは、豚の脳を囲むように、簡単な作業ではありません豚の脳の露出および除去を必要とします。
本論文や教育ビデオの目標は、死後のブタの脳と下垂体は、非電動式手術器具を使用して15〜20分で完全な状態で露出して除去することができる方法を記述することです。ミニブタ下垂体の解剖学的研究のために使用教育ビデオや写真のイラストは、オスのミニブタ（20〜25キロ：6ヶ月、体重、年齢）を示します。
Protocol
動物の麻酔とeuthanesiaは（NIH公開番号86から23まで、1985年改訂）および動物研究倫理のためのデンマークの理事会で承認された「実験動物のケアの原則」に従って行われました。 1.楽器ビデオで提示楽器を収集し、 材料の表に記載されています。 2.斬首注：麻酔は、ミダゾラムの5mLの（を5mg / mL）およびケ?…
Representative Results
乾燥から組織材料を防止するためには、巨視的分析が行われた直後の固定剤又は等張食塩水で満たされたジャー中で除去し、脳および下垂体を保管することが推奨されます。組織材料は、等張食塩水に貯蔵に対し、年間の固定液に保存することができるにも冷蔵庫に、経時的に組織崩壊につながります。 無傷のブタの脳?…
Discussion
ほとんどの実験的神経科学の研究は、CNSへのアクセスが薄いskull-と硬膜の厚さによって促進されるマウスおよびラットのような小さな動物種、で実行されています。しかし、ブタ1、4、8、羊32、および非ヒト霊長類のような、より大きな実験動物において、これらの構造のかなりの厚さは、堅牢な器具（?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は感謝の気持ちで夫人トリーン・W・ミッケルセン、夫人リセM.継手、およびPåskehøjgaardのスタッフの巧みな支援を認めます。デンマーク医学研究評議会、ルンドベック財団、ノボノルディスク財団が財政的に研究を支持しました。
Materials
| Heavy Scalpel Handle #4 | FST (Fine Science Tools) | 10008-13 | Good for skin incision and soft tissue removal |
| Non-Sterile Scalpel Blades #23 | FST | 10023-00 | |
| Scalpel Handle #7 | FST | 10007-12 | Optimal for dural incision and precision work |
| Non-Sterile Scalpel Blades #11 | FST | 10011-00 | |
| Surgical Forceps | FST | 11024-18 | The tip of the surgical forceps ensure a firm grip |
| Kerrison Bone Punch | Aesculap Neurosurgery | FF713R | Must be robust, bite size 3-5 mm |
| Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | MD615 | Must be robust, bite size 15 x 5 mm |
| Bone Rongeur | Aesculap Neurosurgery | FO551R | Must be robust, bite size 25 x 15 mm |
| Bone Chisel | Lawton | 67-0335 | The size of the chisel head should not exceed 20 mm |
| Mallet (Hammer) | Millarco | 5624108 | Weigth 300 g, length 30 cm, head hit area size 2 x 2 cm |
| Micro-Scissor | FST | 14002-14 | |
| Dissector | Aesculap Neurosurgery | OL165R | |
| Göttingen minipigs | Ellegaard Göttingen Minipigs A/S, Denmark | ||
| Euthanimal | pentobarbital | ||
| Ketamine | Pfizer | ||
| Midazolam | Hameln Pharmaceuticals |
References
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Cite This Article
Bjarkam, C. R., Orlowski, D., Tvilling, L., Bech, J., Glud, A. N., Sørensen, J. H. Exposure of the Pig CNS for Histological Analysis: A Manual for Decapitation, Skull Opening, and Brain Removal. J. Vis. Exp. (122), e55511, doi:10.3791/55511 (2017).