仿生纳米羟基磷灰石的快速混合制备生物医学应用
Summary
本文介绍了高品质的仿生纳米羟基磷灰石的快速制造的新方法。该生物材料是在一个广泛的骨科，颅面外科和牙科临床应用提供创新的医疗设备制造具有重要意义。
Abstract
羟基磷灰石（HA）已被广泛地用作医疗陶瓷由于其良好的生物相容性和骨传导性。最近有关于使用仿生纳米羟基磷灰石（NHA）的兴趣。然而，生物磷灰石是已知的钙缺乏和碳酸取代的纳米级片状的形态。仿生羟基磷灰石具有刺激最佳骨组织再生的潜力，因为它相似骨和牙齿珐琅质矿物。许多方法目前用来制造磷灰石在实验室和商业上，涉及冗长过程和复杂的设备。因此，本研究的目的是开发一种快速，可靠的方法来制备高品质的仿生纳米羟基磷灰石。开发的快速混合方法是基于涉及氢氧化钙和磷酸的酸 – 碱反应。简言之，磷酸溶液倒入氢氧化钙溶液中，接着搅拌，洗涤和干燥阶段。批料的一部分混合物在1000℃在为了研究产品的高温稳定性烧结2小时。 X射线衍射分析显示成功形成的HA，其显示热分解为β-磷酸三钙的高温处理中，这是典型的钙缺乏HA之后磷酸盐。傅里叶变换红外光谱表明碳酸酯基团的在沉淀出的产品的存在。芽颗粒与50×30纳米的大致尺寸，接近生物磷灰石的尺寸低纵横比。该材料也是钙缺乏与钙：1.63 P摩尔比，这样生物学磷灰石比1.67的化学计量的HA比率低。因此，这种新方法是用于制造仿生羟基磷灰石的，克服了冗长滴定和复杂的设备需要一个可靠的和更方便的过程。所得仿生HA产品是适用于各种用途医疗和消费保健应用。
Introduction
有为了提高患者的生活质量，并减少全球人口老龄化的医疗负担很大的临床需要与增强功能先进的生物材料。羟基磷灰石已广泛，由于其良好的生物相容性应用于多年医疗应用。最近，已在使用纳米级的羟基磷灰石（羟基磷灰石）的兴趣增加，特别是用于医学和牙科矿化组织再生。在骨骼和牙齿的釉质中发现的矿物是缺钙，多取代的，纳米级羟基磷灰石。生物纳米羟基磷灰石血小板的大小估计报告的50纳米×30纳米×2纳米的1维，在不成熟的骨2所述更小的结构。与此相反，在牙齿珐琅质的矿物比在长度和宽度3,4骨组织中发现的大10至100倍。合成纳米羟基磷灰石可能会更好地称为仿生，而不是仿生，因为我们正在寻求翻译关于自然材料的特性与性能改进医疗技术的意见。它已被提出，仿生羟基磷灰石可以是骨骼和牙齿的组织再生应用更有利的，因为它相似于天然存在的矿物5。
有已报道以制备羟基磷灰石包括热液6，喷雾干燥7和溶胶-凝胶8技术的各种方法。这些中，湿式沉淀法被认为是用于制备羟基磷灰石的相对方便的方法。公布的羟基磷灰石湿沉淀方法一般包括一个滴定步骤混合的钙和磷的化学前体9，10，11时，裁判“> 12，13，14，但是，这些方法都具有许多缺点，包括冗长和复杂的过程结合在某些情况下，与需要昂贵的设备相关联。商业生产可能更复杂，专利描述用于复杂的反应器高品质的医疗级磷灰石15的制造。尽管这样，氢氧化钙和磷酸之间的中和反应是有利的，由于副产物的缺乏有毒化学品。
加工条件和磷灰石产物的形态之间的关系已被报道用于缓慢滴定反应。具体地，对于涉及氢氧化钙和磷酸滴定方法中，升高的温度似乎赞成粒子具有低纵横比13的制备。这项工作得到了大大代扩展瓷砖等。 16谁表现出对羟基磷灰石的产品从广泛的方法的质量温度等加工条件的关系。他的结论是，普拉卡什13的湿化学沉淀法制造的高质量的产品，但应注意的是，结果是依赖于技术上的挑战和慢/混合过程。原始普拉卡什滴定步骤接管一小时。然而，更长的滴定时间可能需要要制备大批量。
为了总结，而几个因素，包括温度的影响现在已经广泛地在减少复杂性的研究，几乎没有关注已指示和相关联的执行基于滴定的方法所需要的时间。因此，这项研究的目的是探讨应用快速混合方式，以仿生纳米羟基磷灰石制造的影响，并充分characteri泽所得到的材料。如果成功的话，简单的快速混合的方式将对实验室的研究人员和业界的一致好评，其中制造成本可以不包括质量大幅减少很大的好处。
Protocol
Representative Results
Discussion
天然磷灰石是由具有钙10-XY的近似化学式[（HPO 4）（PO 4）] 6-X（CO 3）Y（OH）2-X型非化学计量碳酸羟磷灰石纳米颗粒。于天然存在的矿物已经报道了生产接近化学相似的生物材料，以促进最佳的生物反应。例如，在仿生缺钙碳酸磷灰石的研究已经表明，它是能刺激增殖和鼠前成骨细胞的细胞的碱性磷酸酶活性更大程度比常规磷灰石19。
在这项研究中，HA的这表明局部热分解在1000℃（ 图2）的析出建议缺钙的HA的生成。用X射线荧光光谱数据获得的P比（1.63）（T：这是由比化学计量的Ca下部支承能1）。可以理解的是一个减小的Ca：P比与较低的热稳定性20，21，22，23相关联。在该方法中，迅速加入磷酸溶液急剧降低反应悬浮液的pH以产生HPO 4离子。 HPO存在4组促进钙缺乏的HA的沉淀，用分子式为Ca 10-X（HPO 4）×（PO 4）6-X（OH）2-x，其中0 <X <1。
因此，迅速加入磷酸对反应的沉淀动力学有显着影响。如前所述，涉及在室温下进行的氢氧化钙和磷酸滴定反应倾向于具有高的纵横比13，以产生颗粒。对于titratioÑ涉及这些反应物的反应，有必要使用升高的温度，以产生具有较低纵横比这更类似于生物磷灰石13的颗粒。当晶体成核速率比晶体生长速率24慢的高纵横比的颗粒产生。在这项研究中开发的新方法，迅速加入磷酸溶液可能提供这导致小的圆形颗粒的存在增加，而不是更少的粒子具有较大的长宽比成核位点的更大的数字。如作者还没有充分研究的缓慢浇注磷酸成氢氧化钙悬浮液中，以达到一致的结果的影响，我们建议的磷酸在视频（大约100毫升/显示与相称的速率倾S）。
在该方法的发展，作者INVestigated一些增量变化的基础上普拉卡什等人芽制备方法。 13，包括与缓慢滴定并迅速加入磷酸溶液25的所生产的产品的比较。我们发现的磷酸的缓慢滴定入氢氧化钙悬浮液导致与氢氧化钙残基的产物。我们建议，所造成的快速加入磷酸的pH变化鼓励氢氧化钙的溶解，因此，允许对成功转化的反应物到羟基磷灰石。的产品的比较使用在室温和升高的温度（60℃）快速混合方法制备发现升高的温度导致更高的导电性的反应完成后。这表明，残留的氢氧化钙存在这很可能是由于氢氧化钙中的溶解度较低温度升高。残留的氢氧化钙的存在是不希望的，该化合物的基本性质可能危及生物相容性。
红外探测用HA（ 图3）相关联的特性磷酸酯和羟基基团的活性。有人指出，对于烧结产品的光谱显示更清晰磷酸盐和羟基峰。这些变化已经与一个更大的产品结晶度26，27提供的B型碳酸替代，其中碳酸根离子已经取代磷酸基团的证据.The烧结谱有关。这是相对于A型的取代，其中碳酸根离子可以取代的羟基17。据报道，B型碳酸盐替代在生物磷灰石3发生。然而，Tampieri 等。报告说，虽然B型取代是predomin蚂蚁在骨头青年，A型碳酸盐替代是老年人28骨头越来越呈现。碳酸盐替代已发现减小磷灰石的结晶度和热稳定性，而增加其溶解度。这些变化已经提出向碳酸取代的HA 29的增加生物活性。还已知的生物的HA含有一些记录在X射线荧光分析（ 表1）的其他元素，如镁，钠，锶30的。这些元素的存在也可能有助于提高生物效力。今后的工作应在这些纳米取代磷灰石的制备被引导，并且还制品具有增加的生物功能如掺杂银的磷灰石31。为了制备取代的羟基磷灰石，该元件可以与相应的减少预期的元素与substitut被引入e表示， 例如 ，在钙化合物的量减少时锶，镁或锌置换尝试32。可替代地，另一种方法可以是与提供“掺杂”离子是存在的羟基磷灰石的表面上，而不必有意的元件替换到HA晶格31的意图添加元素。对于这些修改的方法是可能的制备混合溶液，例如氢氧化钙和硝酸银，并作为此处所描述的进行该反应的相同方法。
总之，本文报道了仿生羟基磷灰石的制备新颖快速和基本上改进方法。对于这种方法，化学品的快速混合时间不超过5秒，这是在时间上的显着减少相比滴定反应通常需要仔细监测小时。它有在使用BIOMAT潜力巨大erial发展，由于其相对简单和低成本相比目前使用的工业磷灰石的制造方法，其中的当前商业系统的结果在长期的研究和开发时间的固有的复杂性，并大大提高了制造成本。特别是，这种新方法是优于连续流动过程或者由于显著下启动设备投资需求热液技术。
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由协同Ceramisys有限公司的EPSRC CASE助学金和支持也与米德求新，EPSRC中心相关于医疗器械[授权号EP / K029592 / 1]创新制造。笔者也想在谢菲尔德哈勒姆大学，感谢罗伯特·伯顿的XRF分析。
Materials
| Calcium hydroxide (purity of ≥ 96%) | Sigma Aldrich UK | 31219 | Good laboratory practise should be used at all times including the use of appropriate personal protective equipment. |
| Phosphoric acid (85 %) | Sigma Aldrich UK | 345245 | Safety goggles and a faceshield should be used when handling this product (see safety data sheet from Sigma Aldrich for further information). |
| STOE IP x-ray diffractometer | Phillips | ||
| International centre for diffraction data (ICDD) PDF4+ database | International Centre for Diffraction Data | ||
| Holey carbon films on 300 mesh grids | Agar Scientific | S147-3H | |
| Tecnai G2 Spirit transmission electron microscope | FEI | ||
| Lithium tetraborate | ICPH, Malzéville, France | ||
| PW2440 XRF spectrometer | Philips | ||
| ThermoScientific Nikolett Spectrometer | Unicam Ltd | ||
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