基于荧光的淋巴细胞检测适用于小分子的高通量筛选

高通量筛选（HTS）是一个久经考验的战略新的治疗分子的鉴定或为新的医学指征FDA批准的药物重新定位广泛采用。 ¹到目前为止，取得HTS成功可以通过的先前发现的药物过多测定。例如，用于乳腺癌，西他列汀的治疗酪氨酸激酶抑制剂拉帕替尼;一个二肽基肽-4（DPP-4）抑制剂用作抗高血糖药物，以及用于治疗慢性髓细胞性白血病的治疗口服的Bcr-Abl的酪氨酸激酶抑制剂达沙替代表批准的药物最初由发现的一长列的几个例子HTS。 ²虽然制药业的生产力近来从缺乏的新化学实体的发现遭受的，成功的药物发现的可能性可以通过增加在临床前念珠菌的数量提高TES显示调节生物学/生物化学特性。因此，适于表型筛选新HTS测定法的发展可以提供为新药命中的发现提供了重要的药理学工具的潜力。 ^{3，4，5，6}此外，高温超导现在可以以更快的速度，由于近年来显著技术改造包括定制设计的灵活的机器人装置，新颖读出的技术和大量的小型化进行。 ^2,7在有助于在使用表型筛选（又名向前药理学）的日益增长的兴趣的因素是人们认为着眼于功能效应，而不是关于分子靶（基于目标的筛选/生化反应）过于简化的还原假设是更有可能以翔瓦特临床疗效。因此，表型筛选持有的承诺，发现新的潜在的治疗化合物和目前无法治疗的疾病的分子途径。 ²

适当地识别一个给定的分子靶标或细胞功能抑制剂或活化剂，高度敏感的，可靠的检测是必需的，以便真正命中和误报之间进行区分。那么，是什么使一个良好的试验？一个给定的测定法的质量必须由信噪比（通过为Z因子反射的）首先判断。 ⁸其次，有针对性的效果或屏幕的目标应明确规定。例如，功能性的基于细胞的方法可以用于受体的筛选提供显著优点，而不是专门设计来评估配体 – 受体结合的测定法。这样做的原因是，在后一种方法不能激动剂和拮抗剂配体之间区分。SS =“外部参照”> 9相反，基于细胞的方法很可能是作为受体功能可以在一个生物的表型被直接评估更为有效（增殖，细胞周期停滞，细胞凋亡，和/或分化）。然而，必须指出的是，生物化学测定可在表型测定中提供显著优点，因为它们违反在一个特定的细胞内靶标。一个精心优化的生化检测通常会有比表型筛选数据散射少，同时简化后的相关行动的药物分子机制的研究。然而，目标为基础的或生物化学分析的主要缺点是扩增在生物系统（最初在生物化学测定法研究了特异性的损失）测试时，可能会影响非特定目标的假阳性命中率的机会。 ¹⁰虽然阴性和阳性之间命中一个完善的分界点可以最大限度地减少误报的数量我n中的初步筛选，使用了生理学相关的系统模拟天然细胞环境如完整细胞，完整的组织或整个动物仍然测定设计钟摆的核心。因此，表型筛选使铅发现与对于没有标识的药物靶标疾病期望生物/表型效应，而无需化合物的活性或作用模式的先验知识。 ¹¹

在本文中研究涉及基于两个重要部件的优化和可再现的表型筛选的开发和测试：市售小鼠模型和化学化合物的聚集亚家族。对于动物模型，测定法依赖于在其中绿色荧光蛋白 （GFP）的表达是由第驱动用来自小鼠品系（Nur77 ^GFP）带有含一个盒的细菌人工染色体衍生的淋巴细胞ËNur77子。 ¹²这种刺激的标志是基于这样的事实，Nur77是立即早期基因上调下列T细胞受体（TCR）或B细胞受体（BCR）刺激。 ¹²对于筛选方法本身，使用的方法，以帮助避免琐碎类似物的筛选，同时最小化，以评估一个大化学文库（> 10 ⁵的化合物）所需的时间。这样做，通过使用虚拟筛选工具药物化学家选择的化学化合物的数据库利用来识别使用已知活性种子的结构作为参考拓扑类似的化合物。这个方法允许我们筛选较136000化学实体的整体库4398的化合物。