Summary

זיהוי אוטומטי של תנודות תטא מאורגן ב Murine EEG

Published: March 10, 2017
doi:

Summary

Theta activity in the hippocampus is related to specific cognitive and behavioral stages. Here, we describe an analytical method to detect highly-organized theta oscillations within the hippocampus using a time-frequency (i.e., wavelet analysis)-based approach.

Abstract

תטא פעילות נוצרת במערכת septohippocampal וניתן להקליט באמצעות אלקטרודות intrahippocampal עמוקות electroencephalography המושתלת (EEG) גישות radiotelemetry או לקשור מערכת. פרמקולוגית, תטא בהיפוקמפוס היא הטרוגנית (ראה התיאוריה הדואליסטית) והוא יכול להיות מובחן לתוך מסוג I תטא סוג II. תת EEG הבודד אלה קשורים למדינות קוגניטיביים והתנהגותיים ספציפיות, כגון עוררת, חקר, למידה וזיכרון, פונקציות אינטגרטיבי גבוהות וכו במחלות ניווניות כמו אלצהיימר, מבני ושינויים תפקודיים של מערכת septohippocampal יכול לגרום לפעילות תטא לקוית / תנודות. ניתוח כמוני התקן של EEG בהיפוקמפוס כולל ניתוח תדיר מבוסס Fast-פורייה- טרנספורמציה (FFT). עם זאת, הליך זה אינו מספק פרטים על פעילות תטא ב תנודות תטא כלליות מאוד מאורגנות בפרט. על מנת לקבל detaמידע iled על תנודות תטא מאוד מאורגן בהיפוקמפוס, פיתחנו גישה אנליטית חדשה. גישה זו מאפשרת כימות הזמן- וחסכונית של משך תנודות תטא מאוד מאורגן ומאפיינים ותדירותם.

Introduction

תטא פעילות במוח קשורה מדינות קוגניטיביים ותפקודיות שונות, כולל עוררות, קשב, תנועה רצונית, התנהגות גישוש, התנהגות תשומת לב, למידה וזיכרון, אינטגרציה חושית, ואת תנועות עיניים מהירות (REM) לישון 1, 2. בעיקר, תטא פעילות כישות קצבית יכול להיווצר באזורים מוחין שונים והוא מאורגן מסונכרן כמו תטא תנודות. להלן נבקש להתמקד בניתוח וכימות של תטא פעילות / תנודות המופקות במערכת septohippocampal 3, 4. בתוך מחצה, GABAergic, glutamatergic, ונוירונים כולינרגית פרויקט להיפוקמפוס ולתרום ייזום ותחזוקה של תטא התנהגות תנודתית. יש דיון מתמשך על אם תנודות תטא בהיפוקמפוס מבצעים יזומים מחצה, כלומר, </em> המודל חסיד קוצב-בהיפוקמפוס במחיצה, (תורת extrahippocampal) או צרופה במבנה ההיפוקמפוס (תיאוריה intrahippocampal) 5, 6, 7.

לא משנה מוצאם, תנודות תטא בהיפוקמפוס כבר במוקד העניין במשך שנים, במיוחד במודלים עכבר מהונדס. מודלים אלה מאפשרים להשתלה של אלקטרודות EEG עמוקה עבור ההקלטה של תנודות תטא בהיפוקמפוס תחת משימות ספציפיות קוגניטיביים והתנהגותיים 8. תנודות בהיפוקמפוס תטא הם הטרוגניים בטבע. בהתבסס על התיאוריה הדואליסטית כביכול של תטא תנודות, אפשר להבדיל בין סוג רגיש-אטרופין השנייה תטא אטרופין רישיות מסוג I תטא 9, 10, 11. האחרון יכול להיגרם בדרך כלל על ידי M מוסקריניים 1 / M <sUB> 3 אגוניסטים לקולטן, למשל, arecoline, pilocarpine, ו urethane. עם זאת, urethane היא תרופה רב-יעד, מלבד הפעלת מוסקריניים, גם מפעילה אפקטים מורכבים על גופי ערוץ יון אחרים. לקבלת תטא מסוג II, מסלול מוסקריניים כולל את ההפעלה של M 1 / M 3 ו עוקבות G q / 11 (Gα) הפעלת בתיווך של פוספוליפאז C β 1/4 (PLCβ 1/4), אינוזיטול טריפוספט (Insp 3) , diacylglycerole (DAG), Ca 2 +, וחלבון קינאז C (PKC). תפקידיו של PLCβ 1 ו PLCβ 4 thetagenesis יאומתו במחקרים נוק-אאוט באמצעות PLCβ1 – / – ו PLCβ4 – / – עכברים מפגינים אובדן מוחלט או הנחתה משמעותית של תטא תנודה 12, 13, 14. M 1 נוסף, M 3, ו- M 5 מטרות במורד הזרם (צ'הnnels / זרמים) של מפל איתות מוסקריניים כוללים conductances שונה, כגון K M-הסוג + ערוץ (K M) באמצעות K תלוי מתח + ערוץ (K v 7); איטי לאחר K + ערוץ hyperpolarization (Ks אח"פ); לדלוף K + ערוץ (דליפת K), כנראה באמצעות TWIK הקשורים K חומצה רגיש + ערוץ (TASK1 / 3); הנוכחי קטיון (CAT I), כנראה באמצעות ערוץ דליפה Na + (NALCN); ואני h באמצעות hyperpolarization וערוצי מגודרת מחזוריים נוקלאוטיד (HCN). בנוסף, M 2 / M קולטני אצטילכולין 4 (AChRs) דווחו להפריע מיישר פנימה K + לתעל 3.1 (K IR 3.1) ופנימה מיישר K + לתעל 3.2 (K IR 3.2) 15.

נכון לעכשיו, התוכנה האנליטית-זמינים מסחרית המאפשרת ניתוח תדירות FFT מבוסס מהר, למשל, ניתוח של כוח (P, mV 2)או צפיפות ספקטרום ההספק (PSD, mV 2 / Hz). כוח או צפיפות ספקטרום ההספק (PSD) ניתוח מתחום התדרים תטא רק נותן סקירה עולמית של פעילותה. עם זאת, על מנת לקבל תובנה מפורטת פעילות תטא קוגניטיביים הקשורים בהתנהגות, הניתוח של תנודות תטא מאוד מאורגנות הוא חובה. ההערכה של תנודות תטא מאוד מאורגן היא בעלת חשיבות מרכזית בתחום של מחלות ניווניות של מערכת העצבים נוירופסיכיאטריות. רוב מחקרי מחל ניסיוני מתבצעים במודלי עכבר מהונדסים תוך שימוש בגישות נוירו-מאוד-מתוחכמות להקליט משטח אפידורל ואת לתרשים אק"ג תוך-מוחי עמוק. טכניקות אלו כוללות שתי מערכות לקשור 16 ו setups radiotelemetric 17, 18. ניתן להקליט תנודות תטא כמו תנודות תטא ספונטניות בהתנהגויות הקשורות בתנאי הקלטה לטווח ארוכים. בנוסף, תטא תנודות יכולות להיות recorded הבא אינדוקציה תרופתית אלא גם בעקבות חשיפת בעלי חי משימות התנהגותיות או קוגניטיביות או לגירויים חושיים, כגון צביטת זנב.

מוקדם גישות לאפיין תטא תנודות תוארו על ידי Csicsvari et al. 19. המחברים מתכננים כלי חצי אוטומטי לניתוח תטא לטווח קצר (15 – 50 דקות) כי אינו מתאים קלטות EEG ארוך זמן. השיטה שלנו, המתוארת כאן, מאפשר ניתוח של הקלטה ארוך טווח EEG> 48 שעות 20. Csicsvari et al. 10 התייחס גם יחס תטא-דלתא, אבל אין סף לקביעת תנודות תטא מאוד מאורגן מסופק. ההגדרות המגוונות דלתא תטא להתאים הגדרות טווח תדרים שלנו. כמו כן, הוא לא הזכיר במפורש, אנו מניחים כי שיטת FFT מבוסס משמש Csicsvari et al. כדי לחשב את הכוח של התדרים-דלתא תטא. זֶהשוב שונה בבירור מן השיטה שלנו, מאז אנו מחשבים אמפליטודות מבוסס ידווה על מספר רב של סולמות תדר (תדירויות צעדי Δ (f) = 0.05 הרץ), וכתוצאה מכך הדיוק גבוה בהרבה. משך תקופת EEG בנפרד נתחה דומה הגדרתנו.

Klausberger et al. 21 גם לעשות שימוש יחסי דלתא-תטא לניתוח הקלטות ארוך טווח EEG. עם זאת, ישנם שלושה הבדלים עיקריים לעומת הגישה שלנו: i) משך תקופת EEG הוא הרבה יותר, כלומר, לפחות 6 שעות; ii) יחס תטא-דלתא מוגדר 4, וזה הרבה יותר גבוה מאשר סף ביתנו, והיא קשורה להגדרות טווח תדרים שונות; ו- III) הגדרת הכח צפויה להתבסס על גישת FFT, אשר חסר דיוק גבוה, במיוחד עבור חלונות זמן קצרה מאוד (2 s, כלומר, 5 מחזורים עבור תנודות בתדירות של 2.5 הרץ). במקרים כאלה, הליך מבוסס ידווה הוא מומלץ יותר.מחקר שנערך על ידי קפלן ואח '. 22 אך ורק מחושב הכוח תטא תוך התעלמות יחס כוח דלתא-תטא. לפיכך, קפלן להתקרב 22 לא יכולים להבדיל בין תהליכים תטא עשירית קוגניטיבי מלווים דלתא גבוהה או נמוכה.

בפרוטוקול הבא, נוכל להציג גישה אדוה מבוססי האנליטית שלנו לנתח באופן מהימן תנודות תטא מאוד מאורגן בהקלטות EEG בהיפוקמפוס מעכברים. מאז הליך זה עובד באופן אוטומטי, זה יכול להיות מיושם על ערכות נתונים גדולות ומדידות ארוך טווח EEG.

Protocol

כל הניסויים בבעלי-חיים בוצעה על פי הנחיות המועצה המקומית ומוסדיים על טיפול בבעלי חיים (מאוניברסיטת בון, BfArM, LANUV, גרמניה). בנוסף, כל הניסויים בבעלי-החיים בוצעו בהתאם לחקיקה מעולה, למשל, הוראת מועצת הקהילות האירופיות מיום 24 בנובמבר 1986 (86/609 / EEC), או חקיקה מחוזית וארצי ?…

Representative Results

תטא הפעילות ניתן להקליט במגוון רחב של אזורים מערכת העצבים המרכזית (CNS). כאן, אנו מציגים ניתוח של תטא תנודות מן ההיפוקמפוס בעכברים. תנודות כאלה יכולים להתרחש במהלך מצבים התנהגותיים וקוגניטיביים שונים. מומלץ מאוד לנתח תטא תנודות תחת שני תנאים הספונ…

Discussion

תטא פעילות רלוונטית מרכזיים לנוירופיזיולוגיה מערכתית. ניתן לראות באזורי מוח שונים, במיוחד בהיפוקמפוס, שם היא קשורה מדינות התנהגותיים וקוגניטיביים ספציפיים. בנוסף, תטא בהיפוקמפוס יכול להיות מובחן פרמקולוגית לתוך סוג אטרופין רגיש תטא שאני סוג ב 'ו אטרופין רישיות. ס…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

The authors would like to thank Dr. Christina Ginkel (German Center for Neurodegenerative Diseases, DZNE) and Dr. Robert Stark (DZNE) for their assistance with animal breeding and animal healthcare. This work was financially supported by the Federal Institute for Drugs and Medical Devices (Bundesinstitut für Arzneimittel und Medizinprodukte, BfArM), Bonn, Germany.

Materials

Carprofen (Rimadyl VET – Injektionslösung) Pfizer PZN 0110208208 20ml
binocular surgical magnification microscope Zeiss Stemi 2000 0000001003877, 4355400000000, 0000001063306, 4170530000000, 4170959255000, 4551820000000, 4170959040000, 4170959050000
Dexpanthenole (Bepanthen Wund- und Heilsalbe) Bayer PZN: 1578818
drapes (sterile) Hartmann PZN 0366787
70% ethanol Carl Roth 9065.5
0.3% / 3% hydrogene peroxide solution Sigma 95321 30% stock solution
gloves (sterile) Unigloves 1570
dental glas ionomer cement KentDental /NORDENTA 957 321
heat-based surgical instrument sterilizer F.S.T. 18000-50
high-speed dental drill Adeor SI-1708
Inhalation narcotic system (isoflurane) Harvard Apparatus GmbH 34-1352, 10-1340, 34-0422, 34-1041, 34-0401, 34-1067, 72-3044, 34-0426, 34-0387, 34-0415, 69-0230
Isoflurane Baxter 250 ml PZN 6497131
Ketamine Pfizer PZN 07506004
Lactated Ringer's solution (sterile) Braun L7502
Nissl staining solution Armin Baack BAA31712159
pads (sterile) ReWa Krankenhausbedarf 2003/01
Steel and tungsten electrodes parylene coated FHC Inc., USA UEWLGESEANND
stereotaxic frame Neurostar 51730M ordered at Stoelting
(Stereo Drive-New Motorized Stereotaxic)
tapes (sterile) BSN medical GmbH & Co. KG 626225
TA10ETA-F20 DSI 270-0042-001X Radiofrequency transmitter 3.9 g, 1.9 cc, input voltage range ± 2.5 mV, channel bandwidth (B) 1-200 Hz, nominal sampling rate (f) 1000 Hz (f = 5B) temperature operating range 34-41 °C warranted battery life 4 months
TL11M2-F20EET DSI 270-0124-001X Radiofrequency transmitter 3.9 g, 1.9 cc, input voltage range ± 1.25 mV, channel bandwidth (B) 1-50 Hz, nominal sampling rate (f) 250 Hz (f = 5B) temperature operating range 34-41 °C warranted battery life 1.5 months
Vibroslicer 5000 MZ Electron Microscopy Sciences 5000-005
Xylazine (Rompun) Bayer PZN: 1320422
Matlab Mathworks Inc. programming, computing and visualization software
SPSS IBM statistical analysis software

References

  1. Vanderwolf, C. H. Hippocampal electrical activity and voluntary movement in the rat. Electroencephalogr Clin Neurophysiol. 26, 407-418 (1969).
  2. Kahana, M. J., Seelig, D., Madsen, J. R. Theta returns. Curr Opin Neurobiol. 11, 739-744 (2001).
  3. Varga, V., et al. The presence of pacemaker HCN channels identifies theta rhythmic GABAergic neurons in the medial septum. J Physiol. 586, 3893-3915 (2008).
  4. Takano, Y., Hanada, Y. The driving system for hippocampal theta in the brainstem: an examination by single neuron recording in urethane-anesthetized rats. Neurosci Lett. 455, 65-69 (2009).
  5. Goutagny, R., Manseau, F., Jackson, J., Danik, M., Williams, S. In vitro activation of the medial septum-diagonal band complex generates atropine-sensitive and atropine-resistant hippocampal theta rhythm: an investigation using a complete septohippocampal preparation. Hippocampus. 18, 531-535 (2008).
  6. Manseau, F., Goutagny, R., Danik, M., Williams, S. The hippocamposeptal pathway generates rhythmic firing of GABAergic neurons in the medial septum and diagonal bands: an investigation using a complete septohippocampal preparation in vitro. J Neurosci. 28, 4096-4107 (2008).
  7. Hangya, B., Borhegyi, Z., Szilagyi, N., Freund, T. F., Varga, V. GABAergic neurons of the medial septum lead the hippocampal network during theta activity. J Neurosci. 29, 8094-8102 (2009).
  8. Siwek, M. E., et al. Altered theta oscillations and aberrant cortical excitatory activity in the 5XFAD model of Alzheimer’s disease. Neural Plast. 2015, 781731 (2015).
  9. Buzsaki, G. Theta oscillations in the hippocampus. Neuron. 33, 325-340 (2002).
  10. Buzsaki, G., et al. Hippocampal network patterns of activity in the mouse. 神经科学. 116, 201-211 (2003).
  11. Buzsaki, G., Moser, E. I. Memory navigation and theta rhythm in the hippocampal-entorhinal system. Nat Neurosci. 16, 130-138 (2013).
  12. Shin, J. Theta rhythm heterogeneity in humans. Clin Neurophysiol. 121, 456-457 (2010).
  13. Shin, J., et al. Phospholipase C beta 4 in the medial septum controls cholinergic theta oscillations and anxiety behaviors. J Neurosci. 29, 15375-15385 (2009).
  14. Shin, J., Kim, D., Bianchi, R., Wong, R. K., Shin, H. S. Genetic dissection of theta rhythm heterogeneity in mice. Proc Natl Acad Sci U S A. 102, 18165-18170 (2005).
  15. Brown, D. A., Adams, P. R. Muscarinic suppression of a novel voltage-sensitive K+ current in a vertebrate neurone. Nature. 283, 673-676 (1980).
  16. Senkov, O., Mironov, A., Dityatev, A. A novel versatile hybrid infusion-multielectrode recording (HIME) system for acute drug delivery and multisite acquisition of neuronal activity in freely moving mice. Front Neurosci. 9, 425 (2015).
  17. Lundt, A., et al. EEG Radiotelemetry in Small Laboratory Rodents: A Powerful State-of-the Art Approach in Neuropsychiatric, Neurodegenerative, and Epilepsy Research. Neural Plast. 2016, 8213878 (2016).
  18. Papazoglou, A., et al. Non-restraining EEG radiotelemetry: epidural and deep intracerebral stereotaxic EEG electrode placement. J Vis Exp. (112), (2016).
  19. Csicsvari, J., Hirase, H., Czurko, A., Buzsaki, G. Reliability and state dependence of pyramidal cell-interneuron synapses in the hippocampus: an ensemble approach in the behaving rat. Neuron. 21, 179-189 (1998).
  20. Muller, R., et al. Atropine-sensitive hippocampal theta oscillations are mediated by Cav2.3 R-type Ca2+ channels. 神经科学. 205, 125-139 (2012).
  21. Klausberger, T., et al. Brain-state- and cell-type-specific firing of hippocampal interneurons in vivo. Nature. 421, 844-848 (2003).
  22. Caplan, J. B., Madsen, J. R., Raghavachari, S., Kahana, M. J. Distinct patterns of brain oscillations underlie two basic parameters of human maze learning. J Neurophysiol. 86, 368-380 (2001).
  23. Montgomery, S. M., Buzsaki, G. Gamma oscillations dynamically couple hippocampal CA3 and CA1 regions during memory task performance. Proc Natl Acad Sci U S A. 104, 14495-14500 (2007).
  24. Kronland-Martinet, R., Morlet, J., Grossman, A. Analysis of sound patterns through wavelet transform. Int J Pattern Recognit Artif Intell. 1, 29 (1987).
  25. Buzsaki, G., Wang, X. J. Mechanisms of gamma oscillations. Annu Rev Neurosci. 35, 203-225 (2012).
  26. Goutagny, R., Jackson, J., Williams, S. Self-generated theta oscillations in the hippocampus. Nat Neurosci. 12, 1491-1493 (2009).
  27. Bland, B. H. The physiology and pharmacology of hippocampal formation theta rhythms. Prog Neurobiol. 26, 1-54 (1986).
  28. Leung, L. S. Generation of theta and gamma rhythms in the hippocampus. Neurosci Biobehav Rev. 22, 275-290 (1998).
  29. Shin, J., Talnov, A. A single trial analysis of hippocampal theta frequency during nonsteady wheel running in rats. Brain Res. 897, 217-221 (2001).
  30. Shin, J. A unifying theory on the relationship between spike trains, EEG, and ERP based on the noise shaping/predictive neural coding hypothesis. Biosystems. 67, 245-257 (2002).
  31. Kramis, R., Vanderwolf, C. H., Bland, B. H. Two types of hippocampal rhythmical slow activity in both the rabbit and the rat: relations to behavior and effects of atropine, diethyl ether, urethane, and pentobarbital. Exp Neurol. 49, 58-85 (1975).
  32. Lu, B. L., Shin, J., Ichikawa, M. Massively parallel classification of single-trial EEG signals using a min-max modular neural network. IEEE Trans Biomed Eng. 51, 551-558 (2004).
  33. Robinson, T. E., Kramis, R. C., Vanderwolf, C. H. Two types of cerebral activation during active sleep: relations to behavior. Brain Res. 124, 544-549 (1977).
check_url/cn/55089?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Müller, R., Papazoglou, A., Soos, J., Lundt, A., Wormuth, C., Henseler, C., Ehninger, D., Broich, K., Weiergräber, M. Automatic Detection of Highly Organized Theta Oscillations in the Murine EEG. J. Vis. Exp. (121), e55089, doi:10.3791/55089 (2017).

View Video