接种<em>冈比亚按蚊</em>珠蚊子诱发和测量黑化免疫反应

昆虫依靠免疫反应，以保护自己免受寄生虫和致病菌^{1 – 3，}通过他们的角质层或他们的肠上皮细胞⁴突破口。在蚊子，这些反应是对细菌^5，6病毒，线虫丝虫⁷和疟原虫^1,8,9高效。在蚊子，一个关键的免疫应答是外来颗粒与黑色素¹⁰的封装^{– 12。 12 –}此封装可以在肠或血淋巴循环系统¹⁰发生。此黑化反应是亲酚的结果级联^{10 – 12，}并且它可以导致寄生虫死亡或它们的吞噬作用。在成蚊，其中血细胞的细胞的数量是有限的，黑化是体液应答，如针对疟原虫寄生虫或丝虫线虫^7。在其他一些昆虫，它直接是围绕寄生虫聚集melanize他们⁷血细胞的细胞。此外，黑色素也像鸡蛋的生产和表皮伤口愈合⁷其他几个生理过程是必不可少的。

免疫反应的刺激作为一种工具来研究昆虫干扰的几个农业和公共健康模型系统^{13 – 18。}它在使用按蚊冈比亚蚊子，在非洲疟疾的主要载体，研究宿主-寄生虫的相互作用^{14 – 16,19。}这些技术是基于昆虫以检测与它们的模式识别受体^（PRR）2寄生虫的能力。蚊子也可以检测其他分子与其生物学如病原体相关分子模式（PAMP）的干扰，或检测由于胶原蛋白和核酸的释放自己的受损细胞。蚊子免疫细胞S，从而作为血细胞用于检测^{20 – 23。}主免疫信号途径是Imd信号，收费，JAK / STAT ²⁴和核糖核酸干扰^{（RNAi）25,26。}这两种收费和IMD的途径影响黑色素的反应，并与亲酚互动级联^{10 – 12。}

用于刺激黑色素响应的标准工具是用小珠进入胸腔的血淋巴蚊子的接种。黑色素包封的程度可以然后通过蚊子的解剖检索胎圈后测量^19。在大多数研究中，只有一个小珠被每蚊^15,16,27注入，但注入多珠是可能的，以研究在黑化响应¹⁹的限制。这些珠粒使用注射液（生理血清）来限制蚊子生理学紊乱注入和蚊子^15,16,27的干燥。的染料加入到该溶液中，以缓解珠选择。它是用于检索珠子^15,16,27解剖溶液是相同的。

用非致病性刺激接种昆虫的优点是把重点放在对免疫应答的直接作用的能力。有因寄生虫致病^28，免疫抑制²⁹没有复杂影响^{– 31，}或免疫逃避^{31 – 34。}此外，与其他生活史性状，如长寿或繁殖力的刺激所造成的后果，也可以研究。因此，研究人员在研究进化生态学可能需要这样的工具^2,35,36。例如，免疫挑战黄蜂有饥饿状态下寿命缩短。免疫刺激和部署类似的负面影响已经在不同的无脊椎动物模型中观察到，往往导致在很短的呃寿命或更少的繁殖成功^13,27,37。这些研究可以在不同的环境中^2,4,38进行。刺激免疫力也感兴趣的那些直接专注于免疫病理学^39,40。

这个协议是基于珠子的接种的蚊子刺激黑化反应，并直接测量黑色素的量。这使得在不同的实验设置黑化反应的定量和定性研究。这样的工具可以扩展到其它的免疫反应，如抗菌响应于刺激热灭活细菌^41。它也可以在许多生态设置进行。