适合与天然化合物库的探索抗生物试验的平台

细菌可以两种非常不同的生活方式，浮游和固着，其中生物膜是最常见的例子之间进行切换。在生物膜，细菌形成嵌入在自产矩阵¹结构化的社区。此自产矩阵是细菌，它们的外部环境之间的屏障，它保护了的微生物细胞，使它们在接近。生物膜基质的组合物之间，甚至在物种而异，但它主要是由脂多糖，胞外DNA和蛋白质的紧密网。基质用作物理屏障抑制有害剂的入口，但它也可以防止脱水生物膜并防止营养物质逸出的小区^2。

生物膜被视为现代生物医学的最具挑战性的课题之一，它们是对抗生素耐受感染³超过80％的据称负责。他们disp已铺设针对外部威胁的固有的高耐受性：湿度，渗透压，机械应力^4，热，紫外线辐射^5，消毒剂，抗菌剂，和宿主免疫系统^1。例如，为了杀死生物膜所需的所需的抗微生物剂的浓度已显示相比较，以杀死浮游细菌所需的要高的1000倍。此更高公差的解释似乎是多因素的。基质提供了降低抗生素渗透到生物膜的物理屏障。另外，生物膜内的细胞表型多样;他们由于氧，营养物，和生物膜⁶的内和外部分之间的代谢物的现有梯度不同的代谢状态之间转变。因此，在一些生物膜地区，如核心，细菌被剥夺氧气和营养，生活在一个代谢活性较低或完全休眠状态<suP> 7。完全休眠细胞被称为持留细胞，它们是不易于常规抗微生物治疗^8。因此，它很可能是生物膜的韧性源自的当前建议等，未知，机制的组合。 葡萄球菌属。仍然是最有问题的革兰氏阳性菌中，引起严重的，通常生物膜相关的，感染^4。有人建议，所有的细菌高达99％的生物膜内的关联，使得它的主要细菌生活方式^3。但是，所有的现有的抗生素已经开发针对单小区（浮游）细菌。迄今，分子的一个非常有限的剧目存在可在成熟生物膜选择性作用。这种情况已经在推动药物发现一个渐进的转变，其中的抗生物膜搜索已敦促占据了更加突出的位置。

从methodologiCal中的角度来看，额外的挑战存在，因为只有生物膜的方法有限数目已经由标准制定组织，特别是那些适用于化学文库的高通量筛选开发的。所有的标准化测定（只有一个例外）都基于生物膜反应器中，并且这些方法需要大量的工作容积和大量的化合物进行测试，这通常是在早期研究性阶段^9-12不可用。现有的唯一标准筛选适用的测定法是所谓的卡尔加里生物膜的装置，从该商购的最小生物膜消除浓度（MBEC）系统的开发^13-15。然而，该测定的限制是该生物膜生长在钉，并且不是所有的细菌物种或同一物种内甚至菌株能够形成这个装置上生物膜。而且，可以特别适用于天然化合物的探索方法必要的。天然产品已经在抗菌药物发现在过去的¹⁶世纪创新的主要来源。它们可提供具有独特的作用机制也可以是针对持留细胞有效新颖抗生物化合物。因此，自然和自然的启发库的探索有前途的生产和独特的抗生物引线的高机会。

这里，我们提出测定的一个平台，是为使用三个测定法来测量上的可行性，总生物量，和金黄色葡萄球菌生物膜基质的影响抗生物化合物的化学筛选开发的实验细节。第一测定测量生物膜的可行性，并且它是基于刃天青染色。刃天青是氧化还原染色是蓝色和非荧光在其氧化态和由细菌的代谢活性降低时变为粉红色，高荧光试卤灵。这是一个非常简单和快速米ethod适合初级筛查^17-20。第二个实验中，根据结晶紫染色，测量总质量的生物膜。结晶紫为在生物膜^19,21-23研究细菌和细菌广泛使用的污点。该测定法是基于廉价的试剂和具有简单的吸光度端点读数。最后，第三个测定目标通过小麦胚凝集素生物膜（WGA），其特异性结合聚-N-乙酰葡糖胺残基（PNAG）存在于葡萄球菌生物膜²⁴的基体的胞外聚合物物质（EPS） -矩阵。 WGA的结合有可使用荧光强度读者²⁵被检测的荧光团。我们在座的基本原理和我们开发，包括示例应用程序的平台的详细信息。