Summary

דרך אמין להערכת זרע נביטה, תרדמת, ותמותה בתנאי שדה

Published: November 06, 2016
doi:

Summary

כאן אנו מציגים פרוטוקול להערכת שאירים זרע, נביטה תרדמת בתנאי שדה באמצעות קבור, רצועות זרע שכותרתו כלוריד tetrazolium בדיקות כדאיות (ט"ז).

Abstract

We describe techniques for approximating seed bank dynamics over time using Helianthus annuus as an example study species. Strips of permeable polyester fabric and glue can be folded and glued to construct a strip of compartments that house seeds and identifying information, while allowing contact with soil leachate, water, microorganisms, and ambient temperature. Strips may be constructed with a wide range of compartment numbers and sizes and allow the researcher to house a variety of genotypes within a single species, different species, or seeds that have experienced different treatments. As opposed to individual seed packets, strips are more easily retrieved as a unit. While replicate packets can be included within a strip, different strips can act as blocks or can be retrieved at different times for observation of seed behavior over time. We used a high temperature glue gun to delineate compartments and sealed the strips once the seed and tags identifying block and removal times were inserted. The seed strips were then buried in the field at the desired depth, with the location marked for later removal. Burrowing animal predators were effectively excluded by use of a covering of metal mesh hardware cloth on the soil surface. After the selected time interval for burial, strips were dug up and seeds were assessed for germination, dormancy and mortality. While clearly dead seeds can often be distinguished from ungerminated living ones by eye, dormant seeds were conclusively identified using a standard Tetrazolium chloride colorimetric test for seed viability.

Introduction

המטרה הכללית של שיטה זו היא להעריך הישרדות זרע ובמהימנות לאורך זמן בתנאי שדה.

בנק זרעי קרקע הם עתודה התפזרו, זרעי קיימא עדיין ungerminated מופצים גם על פני הקרקע, בתוך חול משטח, או בתוך פרופיל הקרקע, אשר עשוי להימשך זמני או במשך שנים רבות 1,2. כאשר שיטות קבורות זרע דומה לזו המוצגת כאן יושמו מחקר 17 שנים באמצעות כמה עשרות מינים, זרעי קיימא נמצאו רבי מהמינים נבדקו 3. תרדמת זרעים היא לחסום זרע נביטה עד השילוב המתאים של תנאי שתיל הישרדות להתעורר 4. נותרים רדומים יכול להרשות זרעים לשרוד בתנאים קשים, כגון טמפרטורות חורף נמוכות, הגבלה מזינה, או בצורה עונתית, עד טריגר חיצוני עבור תרדמת שחרור מאפשר נביטה. מפעיל עבור שחרור תרדמת יכול להשתנות כתוצאה מחשיפת תרכובות קרות, הוארכו שהותירו fזעמם, או תקיפה פיזית על קליפת הזרע דרך שחיקה או במגע עם חומצות הקיבה חיה 5. כרמזי נביטה יכולים להיות סוגים או מינים ספציפיים לעתים קרובות תוצאה של ברירה טבעית בעבר, נביטת זרעים הסתגלותי הוא המתרחש בזמן לא מתאים, ועלול לגרום לתמותת זרע או שתיל או צמיחת שתיל מסכנה. בעוד תרדמת סווגה למספר סוגים על פני המנגנונים של שחרור תרדמת (למשל, תרדמת גופנית, תרדמת פיזיולוגית), 6 תרדמת זרעים נשארת אחד לפחות הבין נושאים בביולוגית צמח. לכן, מחקרים בתחום המאפשרים הערכה על המצב של זרעים בודדים או קבוצות של זרעים בתנאים אקולוגיים רלוונטיים יש כוח הסבר גבוה יותר מענפים פשוט לסמוך על בדיקות נביטת תקן במעבדה.

ניצול של מאפייני זרע ידועים יכול לספק תובנה לתוך המנגנונים של תרדמת. פיקוח על תרדמת זרעים הוא שיתוףmplex, לרבות הבקרה הגנטית של גורמים פיזיולוגיים מורפולוגיים. בעוד הבנה מלאה של הרוחב של מנגנוני תרדמת טרם הובהרה, מודל כללי התפתח, מעורב מערכת יחסים היזון חוזר בין שני ההורמונים הצמחיים Gibberellic החומצה (GA) ו abscisic חומצה (ABA) 7. במודל כללי זו לזרעים עם מרכיב פיסיולוגי התרדמת שלהם, GA משמש אות לשחרור תרדמת, בעוד ABA משמש כדי לשמור על במצב הרדום. השפעות גנטיות אימהיות כמו גם בסביבת הגידול האימהית יכול להשפיע תרדמת ותכונות זרע אחרות, כגון גודל, דרך רקמות שנוצרו אימהי ו -8 אותות התפתחותיים. אימהי שנוצר מבנים חיצוניים (או כיסויי זרע) תהא רשאית להותיר תרדמת, לעיתים בשילוב עם רמזים פיזיולוגיים. מאז כיסויי זרע נגזר אימהי נשלטים על ידי הגנים של הצמח האם, הם עלולים שלא לשקף את ההרכב הגנטי הגרעיני בפועל של הזרע. אנחנו צריכים אותנואד achenes annuus Helianthus מתוך מערך של היברידית יבול-בר חוצה כדי להקניט את השפעות גנטיות העובר לעומת אימהי אלה על מאפייני זרע 9,10. לפיכך, עיצובי מחקר הכוללים מינים שונים, סוגי צלב, או גנוטיפים יכולים ללקט מידע על אקולוגיה וגנטיקה של זרע תרדמת, נביטה והישרדות.

דוגמא חשובה של כמה פנוטיפים נביטה והישרדות זרע יכולים להשפיע דינמיקה באוכלוסייה ניתן לראות אזורי כלאי יבול-בר. בחירה במהלך הביות של צמחי מעובדים תבטל את רוב התרדמת ומפחיתה את יכולתו של זרע לשרוד מחוץ עונת הגידול. עם זאת זרימת גנים, או הכלאה בין הסוגים המעובדים ופרועים באזורים היברידיים יבול-בר יכולה לחדש אללים יבול (או וריאנטים גנטיים) לתוך אוכלוסייה בטבע, עם השפעות אפשריות על דינמיקת בנק זרעים. כלאיים בין קרובים טפחו ופרוע נמצאים פוטנציאל אזורי כלאיים-בר יבול עשוי להחזיקמגוון של פנוטיפים תרדמת ביניים, עם רק כמה פנוטיפים צפויים לשרוד בתנאים מחוץ הטיפוח (למשל, בחודשי החורף) 11.

מטרת כתב היד הזה היא להראות כיצד, בשיטת רצועת קבורת הזרע, אנחנו יכולים להעריך נביטה, תרדמת, והישרדות של מגוון רחב של זני זרעים בתקופות זמן שונים כדי לחקור השונות הטבעיות שלהם בתנאי שדה. בדוגמא שלנו, העסקנו גרעינים מ -15 סוגי צומח פרה היברידי צלב מאז אנו מעוניינים השפעות גנטיות אימהיות העוברות על מאפייני זרע.

Protocol

1. לאסוף זרע ממינים מרובים או מבוקרת צלבים של מין יחיד הערה: זה זרע למשל בשימוש מ 15 סוגים הדדית בתוך annuus המינים Helianthus (חמניות) באמצעות פרא, היברידי, וסוגי יבול כמו (המייצר זרע) האימהי ההורה. <li style=";text-align:right;directi…

Representative Results

סוגים צלב עם אחוז אלל הורות ועל היבול אימהי מגוון (טבלה 1) שונים ברחבי תאריכי הסרה באחוזים מונבטים, ungerminated, וזרעים מתים (איור. 2 ו -3). באמצעות בדיקות TZ של זרעי ungerminated, מצאנו כמה זרעים רדומים באמת על סילוקו השני (בתחילת האביב) <st…

Discussion

כאן אנו מציגים שיטות באמצעות רצועות קבורת הזרע להתבונן זרע נביטה, תרדמת ותמותה של מלאי מקור מגוונים בתקופות זמן שנבחרו מראש בתחום. היתרונות של שימוש רצועות ולא מנות בודדות לשכב (1) מהירות רצועה ובניית תא על בריאה של מנות בודדות; ו (2) הקלות והמהירות של הסרת תאים מרובים ב…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

This work was supported by Biotech Risk Assessment Grant Program competitive grand no. 2006-39454-17438 to A. Snow, K. Mercer, and H. Alexander from the United States Department of Agriculture, National Institute of Food and Agriculture. Experiments using this method were conducted at and supported by the University of Kansas Field Station, a research unit of the Kansas Biological Survey and the University of Kansas. The authors would like to thank P. Jourdan and E. Regnier for helpful reviews on earlier versions of this manuscript. Additionally, this work was aided by the contributions of the staff at the University of Kansas Field Station, Waterman Farm at the Ohio State University (OSU), the USDA Ornamental Plant Germplasm Center at OSU, and the Seed Biology Lab in the Department of Horticulture and Crop Science at OSU, especially E. Renze, S. Stieve, A. Evans, and E. Grassbaugh, for technical support.

Materials

Small coin envelopes Any
Large coin envelopes Any
fine meshed polyester mosquito netting Any
high-temperature glue gun Any
high-temperature glue stick refills Any
Industrial permenant markers Any
plastic garden labels Any
scissors Any
Shovel Any
Metal mesh hardward cloth Any
Surveyor's flags, multiple colors Any
Wet newspaper Any
cooler Any
blotter paper Any
petri dishes Any
Temp. controlled growth chamber Any
razor blades Any
petri dishes Any
Tetrazolium chloride Any
water Any
heat incubator Any

References

  1. Walck, J. L., Baskin, J. M., Baskin, C. C., Hidayati, S. N. Defining transient and persistent seed banks in species with pronounced seasonal dormancy and germination patterns. Seed Sci Res. 15 (3), 189-196 (2005).
  2. Alexander, H. A., Schrag, A. M. Role of soil seed banks and newly dispersed seeds in population dynamics of the annual sunflower. Helianthus annuus. J Ecol. 91, 987-998 (2003).
  3. Burnside, O. C., Wilson, R. G., Weiseberg, S., Hubbard, K. Seed longevity of 41 weed species buried 17 years in eastern and western. Weed Sci. 44 (1), 74-86 (1996).
  4. Baskin, C. C., Baskin, J. M. . Seeds: Ecology, biogeography, and evolution of dormancy and Germination. , (2001).
  5. Finch-Savage, W. E., Leubner-Metzger, G. Seed dormancy and the control of germination. New Phytol. 171, 501-523 (2006).
  6. Baskin, J. M., Baskin, C. C. A classification system for seed dormancy. Seed Sci Res. 14 (1), 1-16 (2004).
  7. Donohue, K., et al. Environmental and genetic influences on the germination of Arabidopsis thaliana in the field. Evolution. 54 (4), 740-757 (2005).
  8. Roach, D. A., Wulff, R. D. Maternal effects in plants. Ann Rev Ecol Syst. 18, 209-235 (1987).
  9. Pace, B. A., Alexander, H. M., Emry, J. D., Mercer, K. L. Seed fates in crop-wild hybrid sunflower: crop allele and maternal effects. Evol Appl. 8 (2), 121-132 (2015).
  10. Alexander, H. M., Emry, D. J., Pace, B. A., Kost, M. A., Sparks, K. A., Mercer, K. L. Roles of maternal effects and nuclear genetic composition change across the life cycle of crop-wild hybrids. Am J Bot. 101 (7), 1176-1188 (2014).
  11. Stewart, N. C., Matthew, J., Halfhill, D., Warwick, S. I. Transgene introgression from genetically modified crops into their wild relatives. 遗传学. 4, 806-817 (2003).
  12. Mercer, K. L., Shaw, R. G., Wyse, D. L. Increased germination of diverse crop-wild hybrid sunflower seeds. Ecol Appl. 16, 845-854 (2006).
  13. Delouche, J. C., Still, T. W., Rapset, M., Lienhard, M. The tetrazolium test for seed viability. Mississippi Sta Uni Ag Exp Sta Techn Bull. 51, 1-63 (1962).
  14. Association of Official Seed Analysts. . Tetrazolium Testing Handbook. , (2010).
  15. Alexander, H. M., Emry, D. J., Pace, B. A., Kost, M. A., Sparks, K. A., Mercer, K. L. Roles of maternal effects and nuclear genetic composition change across the life cycle of crop-wild hybrids. Am J Bot. 10 (7), 1176-1188 (2014).
  16. Weiss, A. N., Primer, S. B., Pace, B. A., Mercer, K. L. Maternal effects and embryo genetics: germination and dormancy of crop-wild sunflower hybrids. Seed Sci Res. 23, 241-255 (2013).
check_url/cn/54663?article_type=t

Play Video

Cite This Article
Pace, B. A., Alexander, H. M., Emry, D. J., Mercer, K. L. Reliable Method for Assessing Seed Germination, Dormancy, and Mortality under Field Conditions. J. Vis. Exp. (117), e54663, doi:10.3791/54663 (2016).

View Video