栄養膜幹細胞へのマウス胚性線維芽細胞の直接変換するためのプロトコル

最近、トロホブラスト幹細胞の変換にマウス胚性幹細胞のいくつかのアプローチを比較した研究では、全ての分析システムにおいて、系統変換が不完全のままであることを明らかにしました。代わりに誘導された栄養膜幹細胞（iTSCs）のいわゆる栄養膜幹細胞様細胞は、起源¹の細胞運命のメモリを保持生成されています。ここでは、ITSC世代の異なるアプローチを行いました。マウス胚性線維芽細胞^（MEF）2からの多能性幹細胞の直接誘導と同様に、iTSCsは直接分化した体組織から変換されています。まず、MEFにおける過剰発現された場合、TSCの運命を誘導する12候補因子を同定しました。その後、要因TFAP2C、GATA3、EomesとETS2はITSC誘導³のために必要かつ十分であることが確認されています。同時に、別のグループは、独立して、TFAP2C、GATA3及びEomesがiTSCs中のMEFに変換するのに十分であることがわかりました。しかし、その中で研究は、導入遺伝子発現のために必要な時間がかなり長いETS2に転換カクテル⁴に存在しない場合、別の変換速度を示し、我々の研究と比較されます。

誘導し、胚盤胞由来トロホブラスト幹細胞の培養物を含有する従来のウシ胎児血清（FBS）は、成長不活性化MEFの^5,6によって分泌される因子の存在に依存しています。 ITSC​​誘導時には、これらの要因は、導入遺伝子の完全な組み合わせを欠いており、分化転換を受けていないのMEF、によって提供されています。しかし、一度個々のITSCコロニーは彼らが成長不活化したMEFによってあらかじめ調整されたメディアを、必要とする、サブ培養されます。そこから先、iTSCsを培養し、標準的なプロトコルに従って胚盤胞派生のTSCのように処理することができます。注目すべきは、細胞培養皿をゲル化することなく、田中ら ^5、私たちが日常的に文化のTSCとiTSCsとは対照的です。