Фенотипическая и функционального анализа активированных регуляторных Т-клеток, выделенных из хронического лимфоцитарного хореоменингита инфицированных вирусом мышей

Регуляторные Т (Т _р) клетки экспрессируют Forkhead коробки P3 (FOXP3) в качестве фактора транскрипции для их развития и функции ^1. Кроме того, клетки Т – _Reg выражают различные другие молекулы , такие как CD25 , ^2, ген-лимфоцитами активации 3 (LAG-3) ^3, индуцированной глюкокортикоидами фактор некроза опухоли рецепторов ^4, и цитотоксические Т-лимфоцит-ассоциированный белок 4 (CTLA-4) ⁵ на их поверхности, или внутриклеточной области. При хронической инфекции с различными видами патогенов , таких как вирусы, бактерии ^{6,7 8,9} и паразитов ^10-12, или в процессе развития рака ^13,14, клетки Т _рег дифференцируются в активированных клетках, демонстрируя повышенную функцию подавляющий нацеливание эффекторных CD4 ⁺ и CD8 ⁺ Т – клеток. Ряд работ предположили , что расширенные и активированные Т – клетки _рег способствуют обесцененных RESPONS CD8 ⁺ Т – клетоке во друга ретровируса (FV) инфекции ^15-17. FV-индуцированных Т _рег клетки ингибируют IFN-gamma или экспрессию гранзимом и цитотоксическую реактивность CD8 ⁺ Т – клеток ^15-17. Кроме того, в модели вирусной инфекции простого герпеса, сообщалось , что истощение клеток CD4 ⁺ CD25 ⁺ Т _рег привело к расширению вирус-специфических CD8 ⁺ Т – клеток и повреждения тяжелой ткани за счет инфильтрации immunopathogenic CD4 ⁺ Т – клеток ^18-20.

Мыши инфицированных хронически штаммом вируса лимфоцитарного хориоменингита клон 13 (LCMV CL13) ^21-24 широко используются для характеристики фенотипа и функции эффекторных Т – клеток (Т _EFF) и Т – клеток _рег при хронической вирусной инфекции. Во время хронической инфекции LCMV, вирус-специфические Т _эфф клетки постепенно теряют свою функцию эффекторной и разрядиться T (T _л.д.) клетки. С другой стороны, T_рег клетки усиливают их способность подавлять реакцию вирус-специфических Т – клеток ^25. Снижение в функционировании емкости _ЕФФ Т – клеток можно объяснить несколькими факторами , такими как повышающей регуляции ингибиторных рецепторов на _эфф Т – клеток, измененную функцию антиген-представляющих клеток, продукции иммунорегуляторных цитокинов и увеличение частоты или расширенной функции Т _рег ²⁶ клетки. Среди факторов , участвующих в подавлении Т – клеток, программируемая гибель клеток белок-1 (ПД-1) -expressing клетки _EXH Т и Т – клетки , _Reg широко рассматривается в качестве признаков антигена персистенции и ингибирующее среды. Недавно было сообщено о том, что блокада PD-1 и пути абляции клеток Т _рег приводить к усилению функции Т – клеток и снижение вирусной нагрузки во время LCMV хронической инфекции ^27. Кроме того, клетки Т _рег активируются при хронической инфекции мышей с LCMV ^23,25 </sвверх> и их подавляющая функция усиливается ^25. PD-1 сильно экспрессируется на Т _рег клеток, а также Т – клетки _EXH, а уровень PD-1 , выраженное _рег Т – клеток коррелирует с силой , подавляющей функции ингибировать пролиферацию Т – клеток на ^25.

Здесь мы опишем метод для сравнения характеристик активированных Т – клеток , выделенных из _рег мышей , инфицированных LCMV CL13 и клеток покоящихся Т _рег , выделенных из наивных мышей. Кроме того, мы объясняем ряд процессов , чтобы отделить активированные клетки Т – _REG и проверяет их ех естественных фенотипа, а также измерить их подавляющую активность в пробирке.