小鼠皮肤成纤维隔离用流式细胞仪

成纤维细胞经常定义形态作为坚持以塑料基板梭形细胞。成纤维细胞是负责合成和重塑细胞外基质在胚胎和成年器官^1中的原理的细胞类型。成纤维细胞因此至关重要哺乳动物发育和细胞外环境是影响相邻存在于各组织和器官中的细胞类型的行为有助于基本上。

成纤维细胞也落后造成巨大的临床负担的医疗条件多样化的主要细胞类型。病理的成纤维细胞活性的损害正常组织功能，并且包括组织和器官的纤维化（如肺和肝），疤痕下列皮肤伤口愈合，动脉粥样硬化，全身性硬化症，和形成血管损伤后^2-5粥样硬化斑块的。特别是伤口愈合，急性和慢性，涉及ðeposition既不酷似也不功能类似正常组织周围，并导致发病率显著跨不同病理状态的疤痕组织。损伤后，存在成纤维细胞的肌成纤维细胞，以过渡，然后分泌结构ECM成分，发挥对邻近的细胞类型旁分泌效果，并且通过沉积疤痕组织⁶恢复机械稳定性。

在皮肤组织存在于跨越发育时间伤口修复的质量解剖部位之间和显著变化。在人生的前两三个月的胎儿愈合，不留疤痕;然而，从和整个成年期的晚期，治愈人类与疤痕。位点特异性，除了年龄特异性，在伤口愈合的差异存在。在口腔中的伤口改造以最小的疤痕形成^7,8-，而皮肤伤口内的瘢痕组织沉积是显著^9。争议仍然存在Çoncerning环境与对伤口愈合的结果本地的成纤维细胞的固有性质的在问候年龄和位置^10,11的相对影响。定在小鼠口服与皮肤真皮和早期胚胎（E15）愈合的显著差异与购买胚胎（E18）真皮，它很可能是在某些发育年龄和各种解剖部位之间在成纤维细胞的种群特性存在差异。

1986年，哈罗德·F.德沃夏克假定肿瘤伤口不愈合^12。 Dvorak的结论是，肿瘤行为类似于伤口在主体和通过激活伤口愈合的主机的响应诱导其基质。许多研究以来研究了成纤维细胞，以癌^13-15的进展的贡献，但如在伤口愈合中，身份并有助于皮肤CA的基质隔室的成纤维细胞的胚胎起源的情况下rcinomas还没有得到充分的界定。在回答这个问题负有鉴于最近的研究暴露肿瘤相关成纤维细胞作为抗癌治疗¹⁶潜在有效靶点医疗相关性。

识别和前瞻性隔离赋有纤维化潜力体内成纤维细胞系是实现有效地操纵其范围广泛的急性和慢性疾病损伤反应的一个重要步骤。在1987年，科马克表明两个亚群的成纤维细胞，一种驻留在乳头和一个网状真皮层^17,18内内。第三个亚群被发现在毛囊^19,20的毛乳头区毛囊有关。当进行培养，成长潜力，形态和生长因子/细胞因子，这些成纤维细胞亚型表现出不同型材^21-24。

迄今为止，研究探讨成纤维细胞，他terogeneity在很大程度上未能充分表征体内成纤维细胞之间的发育和功能的多样性。这部分地是对培养的成纤维细胞种群的依赖和细胞培养物或阳性选择的不是由所有的成纤维细胞²⁵表示的自表面受体的基础上的均化效果的结果。从我们的实验室最近的一项研究证实了深刻的表面标志，并在培养与未培养成纤维细胞中分离的流式细胞仪为基础的分离方法，在此手稿²⁶呈现转录变化。

接着，我们确定了鼠背真皮内的特定的成纤维细胞谱系并确定此谱系，通过ENGRAILED-1的胚胎表达的定义，主要负责在背部皮肤结缔组织沉积。期间急性和慢性纤维化形式，包括伤口愈合，癌症间质的形成，和谱系的功能辐射诱发的纤维化^27。鲜明的成纤维细胞系的表征具有治疗旨在调节纤维化的行为至关重要的意义。

而不是使用依赖在体外操作 ，以实现细胞分离^28,29的现有协议，收获协议（图1）这里详述将有助于成纤维细胞更准确地捕捉和表型的行为的体内产率信息进行分析。